山楂原花青素和VC联合通过Wnt/β-catenin通路减轻胰岛素抵抗大鼠肝脏氧化应激

目的：探讨山楂原花青素（hawthorn proanthocyanidin，HPC）和VC联合通过Wnt/β-catenin通路减轻胰岛素抵抗大鼠氧化应激的机制。方法：80 只雄性Wistar大鼠通过高脂膳食法建立胰岛素抵抗模型，10 只饲喂普通饲料作为对照组，检测大鼠造模前后体质量变化和造模后空腹血糖、血清胰岛素浓度，比色法检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活力；随机选取50 只造模成功的胰岛素抵抗大鼠分为模型组、HPC组（56 μg/mL）、VC组（180 μg/mL）、HPC（56 μg/mL）＋VC（180 μg/mL）组和二甲双胍（2 μg/mL）组，每组各10 只。连续给药12 周，测定各组大鼠血液中葡萄糖、胰岛素浓度以及肝匀浆中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GPx）、还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的水平；实时定量聚合酶链式反应检测Wnt1、轴蛋白（Axin）、糖原合酶激酶-3β（glycogen synthasc kinase-3β，GSK-3β）、腺瘤样息肉病蛋白（adenomatous polyposis coli protein，APC）、β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors γ，PPARγ）的mRNA表达水平；蛋白质印迹法检测肝组织Wnt1、β-catenin和PPARγ的蛋白表达水平；荧光共振能量转移分析法检测Wnt1和Dsh蛋白结合的情况。结果：80 只大鼠给予高脂膳食喂养，有54 只造模成功，成功率67.5%。造模后，模型组大鼠的体质量以及空腹血糖、血清胰岛素、ALT、AST和ALP水平均极显著高于对照组大鼠（P＜0.01）。与模型组相比，HPC组、HPC＋VC组和二甲双胍组大鼠肝匀浆中各指标水平均有极显著差异（P＜0.01），HPC＋VC组对肝匀浆中各指标干预效果显著优于HPC组（P＜0.05）；HPC＋VC组Wnt1和β-catenin的mRNA相对表达水平极显著降低（P＜0.01），Axin、GSK-3β、APC和PPARγ的mRNA相对表达水平极显著升高（P＜0.01）；HPC＋VC组Wnt1和β-catenin的蛋白相对表达水平极显著降低（P＜0.01），PPARγ的蛋白表达水平极显著升高（P＜0.01）；HPC＋VC组的荧光共振能量转移信号明显减弱，说明随着时间的延长，Wnt1与Dsh之间的结合力明显减弱，形成的异源二聚体数量明显减少。结论：HPC和VC联合可通过Wnt/β-catenin通路改善胰岛素抵抗大鼠肝脏氧化应激状况。     

磷酸化南极磷虾肽调控Wnt/β-连接蛋白通路改善大鼠骨质疏松症

目的:研究磷酸化南极磷虾肽(PP-AK P)对双侧去卵巢骨质疏松症模型大鼠的改善作用及其机制。方法:采用双侧卵巢切除法建立骨质疏松症大鼠模型,将SD大鼠随机分为5组:假手术组(生理盐水)、模型对照组(生理盐水)、阳性对照组【阿伦磷酸钠1 mg/(kg·d)】和磷酸化南极磷虾肽低、高剂量组【400,800 mg/(kg·d)】,灌胃12周后,分别检测血清骨代谢相关指标、骨密度及骨组织形态学;测定Wnt/β-连接蛋白信号通路关键基因m RNA和蛋白的表达。结果:磷酸化南极磷虾肽能显著下调去卵巢骨质疏松症大鼠血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OCN)和骨形态发生蛋白(BMP-2)的分泌(P0.01),降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和I型胶原羧基端交联肽(CTX-I)水平(P0.01),降低去卵巢大鼠骨代谢的高转换率;显著提高模型大鼠股骨骨密度(P0.01),并能显著增加骨小梁厚度和面积,降低骨小梁间距,改善骨组织微观结构;q RT-PCR检测结果表明,磷酸化南极磷虾肽能显著降低LRP-5b、β-连接蛋白、RUNX2、OSX m RNA的表达水平;免疫印迹检测结果表明,磷酸化南极磷虾肽能显著降低LRP-5b、β-连接蛋白总蛋白、β-连接蛋白核蛋白及RUNX2蛋白的表达。结论:南极磷虾肽能显著改善双侧去卵巢大鼠骨质疏松症,其作用机制与下调Wnt/β-连接蛋白通路,降低骨质疏松症大鼠高骨转换速率有关。     

夏枯草黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松的抑制作用

本研究通过干预去卵巢大鼠骨质疏松动物模型,探讨夏枯草黄酮对骨质疏松大鼠骨量、生物力学性能及骨代谢的影响。经夏枯草黄酮处理后,取血清检测血矿物质、护骨素(OPG)、碱性磷酸酶量(ALP)的含量变化,取各组股骨进行骨密度测定和骨组织形态检测,并用荧光定量PCR的方法检测Ⅰ型胶原、整合素β1与粘着斑激酶的mRNA表达。结果显示,夏枯草黄酮组ALP(3.03±0.22 IU/L)、破骨细胞数(0.23±0.05 1/mm2)、骨吸收周长百分数(14.94±5.12%)低于模型组(P0.05),而OPG量(186.34±44.21pg/mL)、骨密度、骨小梁相对体积(26.11±5.32%)和厚度(587.16±165.01?m)与模型组相比则有所增加(P0.05);表明夏枯草黄酮能够提升去卵巢大鼠的成骨细胞的功能,减缓骨吸收和骨代谢,促进骨形成,降低骨小梁损失,抑制骨量减少与骨强度降低,从而提升去卵巢大鼠的骨密度,最终对骨质疏松症起到了抑制作用。     

南极磷虾油、鱼油与花生四烯酸油对骨质疏松症小鼠脂质代谢的影响

目的：比较南极磷虾油、鱼油和花生四烯酸油对去卵巢骨质疏松小鼠脂质代谢的影响。方法：对8 周龄健康雌性C57BL/6J小鼠部分进行双侧去卵巢手术,建立绝经后骨质疏松症模型;部分不进行去卵巢手术,仅进行开腹腔与缝合的假手术,作为假手术组（生理盐水）。将造模成功的小鼠分为模型对照组（生理盐水）、南极磷虾油组（150 mg/kg mb）、鱼油组（80 mg/kg mb）和花生四烯酸油组（140 mg/kg mb）。连续灌胃12 周后取材,测定骨密度,血清和肝脏中的总胆固醇、甘油三酯水平,肝脏中脂质合成相关基因表达水平等相关指标。结果：两种n-3多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids,PUFA）油脂南极磷虾油和鱼油能极显著降低骨质疏松小鼠体脂比（P＜0.01）,改善血脂及肝脏脂质水平,显著或极显著下调肝脏中脂质合成关键基因SREBP-1c、FAS、ACC、SCD1的mRNA表达（P＜0.05、P＜0.01）;而n-6 PUFA油脂花生四烯酸油会升高血脂水平并上调肝脏中脂质合成关键基因的表达。结论：两种n-3 PUFA均能够显著改善骨质疏松小鼠脂代谢紊乱,且南极磷虾油效果更好;而n-6 PUFA花生四烯酸油则加剧脂代谢紊乱。     

海参皂苷Holothurin A和Echinoside A对肥胖小鼠尿酸代谢的影响

Holothurin A (HA)和Echinoside A (EA)是海参中含量较高的两种皂苷,本研究分析了HA和EA对db/db肥胖小鼠血尿酸、尿酸代谢相关酶活性及肾脏尿酸代谢相关转运体mRNA表达的影响。将db/db小鼠按体重分成模型组、HA组、EA组,每组8只,C57/BL6小鼠为对照组,HA组、EA组饲料分别添加0.07%两种海参皂苷单体,喂养2周。结果显示,相比对照组小鼠,模型组小鼠表现为血清尿酸水平显著升高,海参皂苷HA与EA分别降低血尿酸12.7%和18.1%（P<0.05）,并显著改善肾脏肾小球组织结构病理学变化。实验结果表明,海参皂苷对db/db肥胖小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶和腺苷脱氨酶的活性无显著影响(P>0.05),但显著上调肾脏尿酸代谢相关转运体GLUT9、OAT1、OCTs、OCTNs 的mRNA表达水平（P<0.05）。海参皂苷HA和EA可能通过调控肾脏尿酸代谢相关转运体改善尿酸代谢异常,其中EA改善效果优于HA。该研究成果为膳食海参皂苷预防尿酸代谢异常提供理论依据。     

桑叶生物碱对肝纤维化小鼠的改善作用及机制

目的：观察桑叶生物碱对转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）/Smads信号通路及基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）mRNA表达的调节作用，探讨桑叶生物碱改善小鼠肝纤维化的作用机制。方法：采用腹腔注射体积分数10% CCl4 橄榄油溶液（5 mL/kg mb）联合高脂饮食诱导小鼠肝纤维化模型。造模8 周后，正常对照组和模型组给予蒸馏水，低、中、高剂量组分别灌胃50、100、200 mg/kg mb剂量的桑叶生物碱，阳性药物组给予100 mg/kg mb水飞蓟宾，持续45 d。采用酶联免疫试剂盒测定各组小鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、I型胶原蛋白（collagen I，Col I）及III型胶原蛋白（collagen III，Col III）含量；采用实时定量聚合酶链式反应测定肝组织TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7、MMP-13、TIMP-1 mRNA表达水平。结果：与模型组比，灌胃高剂量桑叶生物碱（200 mg/kg mb）的小鼠肝组织中α-SMA、Col I、Col III含量分别降低19.55%、19.93%、13.84%（P＜0.05）；TGF-β1、Smad3、Smad4、TIMP-1 mRNA表达水平分别下降59.04%、56.73%、50.70%、49.09%（P＜0.05），Smad7、MMP-13 mRNA表达水平分别上升48.29%、25.72%（P＜0.05）。结论：桑叶生物碱能改善小鼠肝纤维化，其机制可能是对TGF-β1/Smads信号通路相关因子和TIMP-1、MMP-13的基因表达具有调控作用。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用

目的：从鲫鱼卵中提取唾液酸糖蛋白,研究其对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用,并探究其作用机理。方法：采用切除大鼠双侧卵巢的方法建立骨质疏松症大鼠模型,灌胃鲫鱼卵唾液酸糖蛋白（400 mg/（kg·d））90 d后,分别检测大鼠尿液骨吸收指标（脱氧吡啶啉、钙、磷）、血清骨吸收指标（抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K）、血清骨生成指标（骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型前胶原羧基端前肽）以及血清骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB受体活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB,RANK）、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）含量。结果：鲫鱼卵唾液酸糖蛋白能显著降低骨质疏松症大鼠尿液脱氧吡啶啉（P＜0.01）、钙（P＜0.01）、磷（P＜0.01）含量和血清抗酒石酸酸性磷酸酶（P＜0.01）、组织蛋白酶K（P＜0.01）活性,防止大鼠骨吸收;显著降低血清骨源性碱性磷酸酶（P＜0.01）活性和骨钙素（P＜0.01）、Ⅰ型前胶原羧基端前肽（P＜0.01）含量,抑制大鼠高骨转换速率;显著上调OPG（P＜0.01）含量,下调RANKL（P＜0.01）含量,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞增殖分化,降低骨吸收。结论：鲫鱼卵唾液酸糖蛋白具有改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用,其作用机理可能与下调RANKL/OPG比值有关。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对SAMP6小鼠骨丢失的保护作用

本文研究了鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(Sialoglycoproteins of Carassius auratus eggs,Ca-SGP)对SAMP6小鼠骨丢失的保护作用。以雄性SAMP6小鼠为老年性骨质疏松症动物模型,连续灌胃Ca-SGP 150d后,检测血清骨代谢生化标志物,测定小鼠股骨矿化沉积率、胫骨骨密度及松质骨微结构。结果显示,经Ca-SGP(500mg/kg·bw)干预后,小鼠血清中骨生成标志物骨源性碱性磷酸酶的活性和I型前胶原羧基端前肽、骨钙素的含量得到显著升高(p0.01),骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K的活性得到显著抑制(p0.01);胫骨骨密度提高10.92%(p0.01);松质骨骨体积分数、骨小梁数目及厚度均得到显著增加(p0.01),骨小梁间隙显著缩小(p0.01);骨矿化沉积率提高98.87%,差异显著(p0.01)。该研究表明Ca-SGP可改善老年性骨质疏松症小鼠低骨转换,提高骨密度,改善骨小梁结构,促进骨矿化,为开发抗骨质疏松症药物和功能食品提供了理论支持。     

枸杞多糖抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞活化作用机制

目的：探究宁夏枸杞多糖对转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）诱导的心脏纤维化细胞模型干预作用。方法：分离培养小鼠原代心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs），用质量浓度10 ng/mL TGF-β1作用于CFs，建立心脏纤维化细胞模型，采用宁夏枸杞多糖进行处理，观察细胞形态；免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达水平；Western blot检测TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达及其磷酸化水平；实时荧光定量聚合酶链式反应检测Snail、Twist和S100A4 mRNA的表达水平。结果：与对照组相比，模型组加入TGF-β1后，CFs细胞的形态由梭形变得狭长，细胞数目显著增多；α-SMA蛋白相对表达量升高；TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达及其磷酸化水平升高；Snail、Twist和S100A4的mRNA表达水平高度显著升高（P＜0.001）；给予宁夏枸杞多糖处理，可高度显著抑制TGF-β1诱导的CFs增殖（P＜0.001），减少CFs细胞中α-SMA及TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达，高度显著下调Snail、Twist和S100A4的mRNA表达（P＜0.001）。结论：枸杞多糖对TGF-β1诱导的CFs纤维化具有改善作用，其作用机制与抑制TGF-β1/Smads信号通路有关。     

鲫鱼皮胶原肽对小鼠的促钙吸收作用

目的：研究胶原肽（collagen peptides,CPs）对小鼠的促钙吸收作用。方法：采用小鼠低钙膳食模型法, 以昆明雄性小鼠为实验动物,设置正常组、低钙模型组、碳酸钙组、CPs低剂量（500 mg/kg mb＋CaCO3）、高剂量 （1 000 mg/kg mb＋CaCO3）组、酪蛋白磷酸肽对照组,连续灌胃6 周,考察小鼠血清钙、磷、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活力、钙吸收率、各项骨指标及骨微观结构、骨小梁形态变化。结果：CPs低、高剂量组小 鼠的ALP活力显著低于低钙模型组（P＜0.05）,其骨长度、干质量指数、骨钙含量、骨矿物密度（bone mineral density,BMD）、骨矿物含量（bone mineral content,BMC）均显著高于低钙模型组（P＜0.05）,CPs低剂量 组可使喂食低钙饲料的小鼠的各项指标达到正常组小鼠的水平。CPs低剂量组小鼠的ALP活力显著低于碳酸钙组 （P＜0.05）,其骨钙含量、BMD、BMC均显著高于碳酸钙组（P＜0.05）,提示补充碳酸钙的同时补充CPs,其促钙吸 收效果更好。结论：CPs可提高小鼠钙吸收率,增加骨小梁数目及强度,促进骨骼生长,从而能有效促进钙的吸收。     

南极磷虾油对骨质疏松模型小鼠骨折愈合的促进作用

目的：探究南极磷虾油（Antarctic krill oil,AKO）对骨质疏松模型小鼠骨折愈合的促进作用。方法：采用C57BL/6J雌性小鼠,通过双侧去卵巢术建立骨质疏松模型;随后行右胫开放性骨折手术并随机分为一般性骨折对照组、骨质疏松性骨折模型组、阳性对照组、AKO组。于骨折后5、11、24、35、56 d取材,动态分析AKO对小鼠血清相关指标、骨痂组织形态学、显微结构和生物力学以及软骨内成骨关键基因表达的影响。结果：酶联免疫吸附测定结果表明AKO能显著升高血清中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）质量浓度及骨碱性磷酸酶活力;骨痂苏木精-伊红染色及微型计算机断层扫描结果显示AKO能够促进软骨痂向硬骨痂转化,并改善骨痂微结构,加速骨痂重塑;生物力学检测结果显示AKO可增强骨性骨痂生物力学性能;实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,AKO可显著提高血管入侵相关因子（VEGF、血小板衍生生长因子和血管紧张素1）的mRNA表达（P＜0.05）,显著降低软骨细胞增殖和肥大相关基因（聚集蛋白聚糖A g g r e c a n和Col10a）的表达（P＜0.05）,显著升高软骨基质降解因子MMP-13以及骨生成相关基因（Col1a、骨钙素和骨形态发生蛋白2）的表达（P＜0.05）,提示AKO可通过调控软骨内成骨关键基因的表达,加速软骨内骨化进程。结论：AKO通过促进软骨内成骨及骨痂重塑,加速骨质疏松模型小鼠骨折愈合,提高愈合质量。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松症的实验研究

用切除大鼠卵巢方法建立骨质疏松症模型，研究大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用。结果表明：大豆异黄酮明显增加去卵巢大鼠骨密度，改进子宫指数和血清雌二醇水平及明显降低碱性磷酸酶活性，从而降低骨的转换率和增加骨密度。     

Solanum muricatum Ameliorates the Symptoms of Osteogenesis Imperfecta In Vivo

Pepino (Solanum muricatum), which is an evergreen plant native to South America, is well‐known for its effects in antioxidation, antidiabetic activity, anti‐inflammation, and antitumor activity. A previous study in our lab indicated that Solanum muricatum (SM) extract promoted osteogenic differentiation by upregulating Wnt and BMP signaling pathway in rat bone marrow stromal cells. The osteogenesis imperfecta (OI) mouse model was used in order to further discover the osteogenic properties of SM extract in the present research. We utilized microCT analysis to collect bone mass and microarchitectural parameters at vertebrae and at femur metaphysis in OI mice. Raman spectrometry was applied to identify change of bone mineral and matrix composition during SM treatment. Finally, collagen synthesis marker PINP and collagen degradation marker CTX were detected using enzyme immunoassay. SM extract could improve the bone mass and microarchitectural parameters both at vertebrae and at femur metaphysis. It also significantly increased the collagen content by promoting its biosynthesis and inhibiting its degradation. By using heterozygous Col1a1^Jrt/+ mice as a model of OI, 6 weeks treatment of SM extract could significantly ameliorate the symptoms in OI mice. Thus, SM holds potential for developing new drugs of bone formation and bone remodeling.     

枸杞中绿原酸对转化生长因子-β1诱导心肌成纤维细胞纤维化的影响

目的：考察枸杞中分离得到的绿原酸对转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs）纤维化的干预效果。方法：质量浓度10 ng/mL TGF-β1诱导CFs建立心肌纤维化细胞模型，用不同质量浓度绿原酸处理纤维化细胞，细胞毒性实验（cell counting kit-8，CCK-8）检测绿原酸对CFs增殖的影响；酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测纤维化标志蛋白胶原蛋白（collagen，Col）I、Col III和免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）检测Twist1、Acta2、Snail2及纤维化蛋白S100A4等mRNA表达水平；Western blot检测TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白及其磷酸化表达水平。结果：CCK-8检测表明枸杞中分离得到的绿原酸能抑制细胞异常增殖；ELISA和免疫荧光检测表明，枸杞中分离得到的绿原酸能下调纤维化标志蛋白Col I、Col III和α-SMA的表达；qPCR检测表明枸杞中分离得到的绿原酸能高度显著下调纤维化转录调控因子Acta2、Twist1、Snail1、Snail2、Smad4及纤维化蛋白S100A4的mRNA表达（P＜0.001）；Western blot检测表明枸杞中分离得到的绿原酸能高度显著下调TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达（P＜0.001）。结论：在本研究质量浓度范围内，枸杞中分离得到的绿原酸抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化过程，其机制可能与TGF-βl/Smads信号通路有关。     

大豆异黄酮和牛初乳复合制剂对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善及抗氧化作用

目的:研究大豆异黄酮和牛初乳复合制剂(复合制剂)对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善和抗氧化作用。方法:首先采用生化分析方法测定复合制剂活性氧清除活性,然后取50只去卵巢SD大鼠,随机分为5组:假手术组、去卵巢组、去卵巢加复合制剂低剂量组(117 mg/kg)、去卵巢加复合制剂中剂量组(233 mg/kg)、去卵巢加复合制剂高剂量组(467 mg/kg),连续灌胃给予复合制剂90 d后,测定股骨骨密度及骨Ca含量,测定血清AKP活力和血清Ca、P、Zn含量及血脂水平,分析血液和组织SOD活性及MDA含量。结果:复合制剂清除超氧自由基、羟自由基和H₂O₂的EC₅₀值分别为479.7、1592.3、115.3 μg/mL。与去卵巢组相比,给予复合制剂后,中、高剂量组股骨Ca含量、股骨中点及远心端骨密度明显提高,差异有显著性(p<0.05)。复合制剂能显著提高血清Ca、Zn和HDL-C水平,降低AKP活力和TC水平(p<0.05或p<0.01)。与去卵巢组比,高剂量组能显著提高血液、肝、肾和脾SOD活性(p<0.05或p<0.01),中剂量组能显著提高血液、肾SOD活性(p<0.05);中剂量组能显著降低血液、肝、脾MDA含量(p<0.05),高剂量组能显著降低肝、肾MDA含量(p<0.05)。结论:复合制剂能清除活性氧,预防去卵巢大鼠骨丢失,增加骨密度,增强体内抗氧化能力,对骨质疏松症有较好改善作用。