克氏原螯虾壳膜几丁质酶的分离纯化

本研究以克氏原螯虾虾壳为材料,探讨克氏原螯虾壳膜中几丁质酶的分离纯化方法。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析、苯基疏水层析和DEAE-32阴离子交换层析,获得比活力为44.93 U/mg、纯化倍数约16.28倍的电泳纯的几丁质酶制品。结合SDS-PAGE和飞行质谱测出该酶分子量为37.7 kDa,为单亚基蛋白。本实验的分离纯化方法可行,为后续酶学性质的研究提供了基础。     

克氏原螯虾虾头酶解工艺的研究

对克氏原螯虾虾头制取调味料的主要工艺参数进行了研究,同时优化了酶解液脱腥臭配方.确定出最佳水解酶为碱性蛋白酶,最佳酶解的条件为:水解时间1.5h、水解温度65℃、酶与底物比1750U/g、起始pH10.0、固液比1:1,在此条件下,水解率可达41.26%;酶解液脱腥臭最佳配方为:去腥剂为酵母粉,去腥时间为1h,去腥剂质量分数为0.5%,去腥温度为40℃.去腥效果最佳.水解液具有浓郁的虾风味,为调味料较好的基础原料.     

酶法提取克氏原螯虾头和虾壳的中蛋白质

采用蛋白酶法对克氏原螯虾头和虾壳中蛋白质的提取工艺进行研究。单因素试验和正交试验结果表明:虾头和虾壳中蛋白质提取的最优工艺条件为木瓜蛋白酶与风味蛋白酶按1:1.5混合作为复合蛋白酶,酶解温度为50℃、酶解时间为3h、蛋白酶用量为1.0%、pH6.5、料液比为1:10,该条件下蛋白质提取率为54.22%。     

克氏原螯虾虾头酶解工艺的研究

对克氏原螯虾虾头制取调味料的主要工艺参数进行了研究,同时优化了酶解液脱腥臭配方。确定出最佳水解酶为碱性蛋白酶,最佳酶解的条件为:水解时间1.5h、水解温度65℃、酶与底物比1750U/g、起始pH10.0、固液比1:1,在此条件下,水解率可达41.26%;酶解液脱腥臭最佳配方为:去腥剂为酵母粉,去腥时间为1h,去腥剂质量分数为0.5%,去腥温度为40℃,去腥效果最佳。水解液具有浓郁的虾风味,为调味料较好的基础原料。      

香辣克氏原螯虾头酱制备及其风味物质研究

为了提高克氏原螯虾加工副产品的利用率,开发一款香辣克氏原螯虾头酱。以克氏原螯虾头与鲜辣椒为原料,添加复合发酵剂,通过单因素与正交试验确定其最佳工艺为:克氏原螯虾头酶解液500g,鲜辣椒40%,复合发酵剂20%,发酵25h,发酵温度33℃。结合理化指标分析其风味物质,研究发现:成品香辣虾头酱共有51种挥发性风味物质,游离氨基酸共有16种,其中呈鲜味氨基酸4种,占游离氨基酸总量的24.13%,核苷酸以及关联化合物含量丰富。通过添加复合发酵剂制备的香辣克氏原螯虾头酱发酵周期短,感官品质佳,风味物质含量丰富,可以作为一款美味的调味品使用。     

不同贮藏温度对香辣克氏原螯虾头酱品质影响研究

为了进一步研究香辣克氏原螯虾头酱在贮藏过程中品质变化规律,文章通过分析4,18,33℃贮藏条件下香辣克氏原螯虾头酱的感官品质、呈味核苷酸、游离氨基酸、辣椒素含量、色泽、总酸以及菌落总数等指标变化情况。研究结果表明:随着贮藏时间延长,各实验组感官评分逐渐下降,菌落总数、酸度上升,呈味核苷酸、游离氨基酸和辣椒素含量降低,色泽逐渐变差。贮藏温度条件对香辣克氏原螯虾头酱品质影响较大,4,18,33℃贮藏条件下各实验组货架期分别为80,70,50d。该研究为香辣克氏原螯虾头酱合理选择贮藏条件提供了理论依据,也为相关研究提供了参考。     

超声预处理对金枪鱼皮胶原ACE抑制肽消化稳定性的影响及消化产物的分离纯化、鉴定

以金枪鱼皮为原料,超声预处理后酶解制得高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,研究ACE抑制肽的模拟胃肠道消化稳定性,并对消化产物进行分离纯化和鉴定。结果表明,超声处理后不同酶解时间酶解液的ACE抑制活性均有所提高;超声预处理20、40 min后,酶解5 min酶解液的消化产物的ACE抑制活性显著高于其他组(p<0.05)。采用葡聚糖凝胶G-15对E5U20和E5U40进行分离纯化,两组酶解液均可分离为3个组分,其中E5U20组组分2的IC₅₀值最小为0.393 mg/mL。采用半制备高效液相色谱对E5U20组分2进行分离纯化,得到8个组分,其中峰3的IC₅₀值最小为0.102 mg/mL。通过质谱法对峰3进行鉴定,测得峰3序列为GPSGPPGP,来源于α1肽链第842~849的位置,符合高ACE抑制活性的多肽构效特点,目前尚无该氨基酸序列的报道。     

超声波提取克氏原螯虾壳中虾青素

以克氏原螯虾壳为原料,采用超声波辅助方法提取虾青素,探讨了提取剂种类、超声作用时间、超声波功率、料液比等因素对虾青素提取效果的影响。应用Box-Behnken中心组合实验和响应面分析法确定了克氏原螯虾壳中虾青素提取最佳条件为超声作用时间29.4 min、超声波功率163 W、料液比为1:18.2(g:mL),此条件下虾青素含量为62.52μg/g。     

葵花籽粕ACE抑制肽分离纯化及其性质研究

以葵花籽粕血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽为原料,采用DA201-C大孔吸附树脂对其进行分离纯化,并对纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽稳定性和活性进行了分析。结果表明:葵花籽粕ACE抑制肽最优纯化工艺为乙醇浓度70%、上样p H 5、上样流速2 BV/h、洗脱流速2 BV/h,在此条件下,得率为93.26%,纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽的抑制率为92.23%±0.48%。葵花籽粕ACE抑制肽对热和金属离子均具有良好的稳定性,模拟体内消化实验显示其活性不受胃肠酶的影响。     

玉米大豆复合ACE抑制肽的分离纯化及结构初探

为了探明ACE抑制活性玉米大豆复合肽的结构,采用超滤、Cu~(2+)-Sephadex G-25柱层析、大孔树脂脱盐对复合肽进行分离纯化后,采用HPLC-MS/MS对其中一种复合肽进行了结构鉴定,初步探讨了其构效关系。结果表明:复合粗肽经超滤分离后,得到复合肽的ACE抑制活性大大提高,再经Cu~(2+)-SephadexG-25柱分离后得到两个级分——复合肽Ⅰ和复合肽Ⅱ,前者的ACE抑制活性明显高于后者。复合肽中Pro、Leu、Phe和Ala等氨基酸的含量明显高于原料蛋白质,有助于ACE抑制活性提高。m/z为597.6的质谱峰是一个五肽。结论:m/z为597.6的化合物是氨基酸序列为Leu-Arg-Pro-Asp-Pro的五肽,其端基有助于ACE抑制活性的提高。     

紫外诱导克氏原螯虾虾头自溶制备蛋白酶解液及其鲜味物质研究

克氏原螯虾虾头中含有丰富的内源酶,通过紫外线照射可诱导其发生自溶反应,制备滋味鲜美的蛋白酶解液。以水解度为指标,通过单因素试验和响应面优化紫外诱导克氏原螯虾虾头的自溶条件,确定最佳自溶条件为:紫外照射时间22. 94 min,自溶初始pH 7. 16,温度50. 06℃,自溶时间3 h。在此条件下克氏原螯虾虾头水解度达44. 39%。通过感官评价和理化指标,对克氏原螯虾虾头原液和自溶产物中的鲜味物质进行分析,结果表明,克氏原螯虾虾头经过自溶后,酶解液中腥味和苦味降低的同时,鲜味和醇厚感显著增加(P 0. 05);与虾头原液相比,自溶产物中鲜味氨基酸总量(2 150. 12 mg/kg)和游离氨基酸总量(8 605. 45 mg/kg)均显著增加,分别增加了1. 41倍和1. 29倍;呈味核苷酸及其关联化合物总量变化不大(P 0. 05),自溶产物中与鲜味有着密切联系的肌苷酸(IMP)为8. 36mg/kg,增加了47. 18%。通过紫外诱导法制备的克氏原螯虾自溶酶解产物,具有较浓的虾鲜味、口感醇厚,可以作为一种营养、健康、美味的调味基料。     

Angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides derived from arachin by simulated gastric digestion

In silico analysis of the sequences of arachin, the major storage protein of peanut suggests that it is laden with antihypertensive peptides. Physiological proteases pepsin, trypsin, chymotrypsin and pancreatin were used to release these peptides. The degree of proteolysis and in vitro angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibition was maximum with pepsin. The ACE inhibitor index of human gastric juice catalysed digestion was similar to pepsin demonstrating that such peptides can be produced in vivo following ingestion of arachin. Three peptides purified from the simulated gastric fluid digests were synthesized. Among them, the pentapeptide, NAQRP was the most potent with an IC₅₀ of 32 ± 2 μM. Molecular docking simulation with human tACE indicate that in addition to a favourable C-terminal Pro residue, the length of the peptides advocate ACE inhibitor potency. These results further potentiate the use of arachin/peanut proteins as functional ingredients in auxiliary therapeutic foods toward blood pressure management.     

源于鸡蛋清溶菌酶ACE抑制肽的分离纯化及结构鉴定

利用胃肠消化酶系水解疏水性氨基酸含量高的蛋清溶菌酶蛋白,筛选能抗胃肠消化的高活性ACE抑制肽。通过超滤、制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)、分析型RP-HPLC纯化、氨基酸组成分析及基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS),从胃肠消化水解液中分离鉴定出两种ACE抑制肽Lys-Val-Phe(KVF)和Trp-Ile-Arg(WIR),化学合成该两种三肽后,ACE抑制活性测定结果显示其IC50值分别为14μmol/L与88.5μmol/L。研究结果表明,蛋清溶菌酶蛋白来源的ACE抑制肽有望用于高血压的预防与治疗。     

Profiles,antioxidative and ACE inhibitory activity of peptides released from fermented buttermilk before and after simulated gastrointestinal digestion

Bioactive peptides, released from buttermilk by fermentation and/or gastrointestinal proteases, may have health promoting effects. Thus, a comprehensive analysis of the peptide fraction of fermented buttermilk, before and after different phases of simulated gastrointestinal digestion, was performed using ultra high-performance liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (UHPLC-ESI-MS/MS). Results showed that digestion simulation substantially changed the peptide profile of fermented buttermilk. A total of 81, 120 and 46 peptides were identified in fermented buttermilk, its gastric and intestinal digests, respectively. These peptides released mostly from β-casein followed by αs1-casein, κ-casein and β-lactoglobulin. In addition, 14 peptides released from milk fat globule membrane proteins (lactadherin, butyrophilin and GlyCAM-1). Bioactivity, mainly angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity, has been reported before for only 54 of the detected peptides. Radical scavenging, ferric reducing and ACE inhibitory activities of fermented buttermilk peptides increased significantly after digestion, indicating promotion in fermented buttermilk-peptide bioactivity by gastrointestinal digestion.     

谷朊粉酶解物的制备及其ACE抑制肽的分离鉴定

以谷朊粉为原料,以血管紧张素转换酶（ACE）抑制率为指标,比较4种蛋白酶的酶解效果。采用超滤、葡聚糖凝胶色谱、反相高效液相色谱（RP-HPLC）的方法分离纯化ACE抑制肽并用电喷雾飞行时间质谱联用(ESI-TOF-MS)鉴定其结构。结果表明：碱性蛋白酶酶解3 h的谷朊粉酶解物具有较高的ACE抑制活性;超滤后,分子质量Mr<1 ku的组分具有较高的ACE抑制率;分离纯化后得到小肽的ACE抑制率高达（81.03±1.20）%;由ESI-TOF-MS质谱图得出该小肽的m/z为630.89,氨基酸序列为Trp-Phe-Gln-Pro（WFQP）。     

花生ACE抑制肽的分离纯化、结构鉴定及体内降血压功能研究

在水酶法提取花生油和水解蛋白的中试生产基础上,将中试生产得到的水解蛋白通过DA201-C大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶Sephadex G-15色谱分离纯化制得花生ACE抑制肽Ⅰ,再经半制备和分析型RP-HPLC进一步分离纯化后,利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间-飞行时间（MALDI-TOF-TOF）串联质谱对具有最高ACE抑制活性的组分进行结构鉴定,得到氨基酸序列为Pro-Gly-Arg-Val-Tyr的花生ACE抑制肽Ⅱ。按照该结构合成得到较大量的花生ACE抑制肽Ⅱ,与花生ACE抑制肽Ⅰ一起作为受试样品进行SHR大鼠体内降血压功能实验。实验证明,花生ACE抑制肽在体内确实具有降低血压的作用,与降血压药物相比其服用剂量较大,但安全性相对较高。      

大豆乳清蛋白及其糖基化产物体外模拟胃肠消化特性研究

体外模拟胃液和胰液对大豆乳清蛋白(WSP)及其糖基化产物的消化特性进行研究。结果表明:当胃蛋白酶和胰酶添加量为底物质量的2%~8%时,仅模拟胃液能部分水解WSP,体外消化率为48.0%~50.2%;胃蛋白酶作用后,SDS-PAGE电泳显示WSP的组分脂肪氧合酶和β-淀粉酶条带消失,而大豆血球凝集素以及胰蛋白酶抑制剂KTI、BBI被部分水解后仍有清晰条带;胰酶作用后,SDS-PAGE电泳显示WSP的各组分条带基本不变;使用葡萄糖在60℃的干热条件下对WSP糖基化改性1~7 d能够提高WSP糖基化产物的乳化特性和热稳定性,相比于WSP,此糖基化产物的体外消化率随反应时间的延长先增加后降低。     

克氏螯虾虾壳Protamex蛋白酶水解物的抗氧化活性

使用Protamex蛋白酶对克氏螯虾虾壳进行水解,研究虾壳蛋白多肽的还原能力和Fe2+螯合力,DPPH.清除能力,ABTS.+清除能力和羟基自由基清除能力。结果表明,虾壳蛋白肽的自由基清除能力和还原力均随着肽浓度的增大而增大。Fe2+螯合力同样与蛋白肽的浓度之间存在着量效关系,但是当浓度达到10 mg/mL时,螯合力不再继续增大。通过对蛋白肽的分子量分布进行研究发现,92.79%的多肽的分子质量小于1 000 u,其中21.50%的多肽分子质量小于180 u,50.51%的多肽分子质量为180～500 u,20.78%的多肽分子质量为500～1 000 u。     

大鳞副泥鳅蛋白ACE抑制肽的分离纯化与鉴定

目的:开发大鳞副泥鳅的ACE抑制肽。方法:采用超滤、葡聚糖凝胶(Sephadex G-15)和半制备型高效液相色谱等多种技术,从大鳞副泥鳅蛋白酶解产物中分离纯化制备了高活性的ACE抑制肽,并利用高效液相色谱质谱—串联质谱对其结构进行解析;利用抑制动力学分析纯化后ACE抑制肽的抑制模式。结果:高活性ACE抑制肽的氨基酸序列为Glu-Gly-His,相对分子质量345.2 Da, IC₅₀值为(17.89±3.28)μg/mL,纯化倍数为27.47。结论:大鳞副泥鳅抑制肽是一种竞争性的ACE抑制肽。