黑曲霉诱导子促进青钱柳悬浮细胞合成三萜

目的:研究黑曲霉真菌诱导子对青钱柳悬浮培养细胞合成三萜的影响。方法:采用植物细胞培养技术,建立稳定的青钱柳细胞悬浮培养体系,以外源黑曲霉诱导子刺激细胞合成三萜,分析诱导子浓度、添加时间及持续作用时间对细胞生长和三萜合成的影响。结果:在稳定期初期(第6天)添加50~300μg/m L的黑曲霉诱导子对细胞生长基本没有影响,但都能刺激细胞合成三萜,200μg/m L的刺激效果最好;在细胞生长周期的不同时间点添加200μg/m L的诱导子,对细胞生长和三萜合成的促进效果不一样,第0天(即接种时)添加对细胞生长的抑制作用最大,对数期中期(第4天)添加时细胞生物量比对照组降低了7.83%,但三萜含量却提高到对照组的9.10倍,对数期中期添加促进三萜合成效果最好;添加诱导子作用3 d后收获细胞,三萜含量和产量均达到最高,分别是对照组的10.79倍和10.21倍。结论:黑曲霉诱导子能够有效地促进青钱柳悬浮细胞合成三萜。     

促进纳他霉素合成的真菌诱导子筛选及诱导条件优化

采用真菌诱导子提高纳他霉素的产量,通过初筛,获得具有正向调节作用的真菌诱导子;采用Box-Behnken试验设计建立数学模型,进行响应面分析优化,确定诱导条件。结果表明：黑曲霉代谢产物诱导子能够有效提高纳他霉素的产量;质量浓度为122μg/mL的黑曲霉代谢产物诱导子在纳他霉素发酵18.3h后加入,诱导78.5h时,发酵液中纳他霉素的发酵产量可达到2.89g/L,为空白对照组的1.68倍。     

大豆异黄酮水解物的制备

利用黑曲霉产酶发酵培养基制备β-葡萄糖苷酶,再利用β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮粉制备异黄酮苷元。研究结果表明,较优产酶发酵培养基的C/N为6∶4,加水量1.4倍,培养基中不添加诱导物。水解500 mg40%大豆异黄酮粉的最佳条件为:加酶量100 U,水解温度50℃,水解时间1 h。     

大豆及其有效成分体外抗蛋白非酶糖化作用

为探讨豆浆的抗蛋白非酶糖化作用及其有效成分,将20g/L的牛血清白蛋白(BSA)与80mmol/LD-葡萄糖体外孵育,与此同时分别加入不同浓度豆浆、大豆异黄酮和染料木素,糖化系统建立90d时,测定各反应体系荧光值。结果表明,100mg/ml豆浆和0.1mg/ml大豆异黄酮体外能明显抑制非酶糖化反应,且随浓度升高,抑制作用明显增强;与等浓度豆浆比较,大豆异黄酮抑制作用明显较强。1μg/ml染料木素能明显抑制牛血清蛋白的非酶糖化作用,且与阳性对照氨基胍无明显差异。该研究表明豆浆具有抗蛋白非酶糖化作用,其中的有效成分可能与大豆异黄酮有关,大豆异黄酮中的有效成分与染料木素有关。     

固定化银杏克隆细胞悬浮培养产生黄酮的研究

采用银杏果实为原料诱导得到颗粒状愈伤组织,在MS培养液中筛选克隆细胞,单细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT中培养。细胞悬浮液与3%的海藻酸钠混合后滴入2%CaCl2MS,制成小球凝胶。固定化细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT+10mg/L肌醇的培养基中悬浮培养25d,黄酮生物合成量为85·63mg/L,克隆细胞增长速度提高24·45倍。     

由大豆浓缩蛋白(SPC)乳清制备高纯度异黄酮苷元的研究

以价格低廉、易污染环境的大豆浓缩蛋白(SPC)乳清为原料,采用等电点结合盐析法沉淀蛋白质、活性炭脱色、离子交换树脂脱盐、HPD-100型非极性大孔树脂吸附纯化、盐酸水解等工艺,制备高纯度的大豆异黄酮苷元产品。经高效液相色谱(HPLC)等方法分析,大豆异黄酮的纯度为(58.4±2.5)%(w/w),总回收率为(78.3±2.6)%;异黄酮苷元的相对含量≥95%(w/w),其中染料木素(Genistein)与大豆甙元(Daid-zein)的含量分别为(23.4±0.8)%和(31.2±0.9)%,而黄豆黄素(G lycitein)的含量极低。产品纯度和附加值高,既能克服当前异黄酮提取工艺中原料成本高、预处理方法繁琐、产品纯度低等缺点,又能实现废物利用,具有良好的推广应用与产业化前景。     

硝普钠对青钱柳悬浮细胞三萜合成的影响

本文采用植物细胞工程技术建立青钱柳细胞悬浮培养体系,以硝普钠为外源诱导物对其三萜的合成进行诱导,从硝普钠的浓度、添加时间和持续作用时间三个方面系统地研究了硝普钠对青钱柳悬浮细胞生长、总三萜酸积累及代表性三萜酸合成的影响,以期为植物细胞培养生产三萜酸类化合物提供参考。10~50μmol/L的硝普钠对悬浮细胞的生长影响不大,但对三萜合成的诱导作用也不明显;150μmol/L的硝普钠有效地促进了三萜的合成且对细胞生长影响较小;200μmol/L以上的浓度则对细胞生长有较强的抑制作用;接种后的第8 d添加150μmol/L硝普钠、持续作用4 d后收获效果最佳,总三萜酸产量可达1228.74 mg/L,为对照组的2.14倍,五种代表性三萜酸中以熊果酸(UA)和齐墩果酸(OA)的变化最为明显,分别比对照组提高了2.28倍和2.48倍。研究结果表明,外源添加硝普钠能有效地促进青钱柳悬浮细胞三萜酸的合成。     

大豆异黄酮对青年雌性大鼠卵巢、子宫组织中Bcl-2 mRNA 和Bax mRNA 表达的影响

目的：通过动物实验研究,观察Bcl-2 mRNA 和Bax mRNA 在青年雌性大鼠卵巢和子宫组织中的表达情况,从细胞凋亡角度研究大豆异黄酮对青年雌性大鼠的抗衰老作用。方法：选用2 月龄青年雌性大鼠50 只,按体质量分成5 组,每组10 只,分别为对照组(基础饲料)、低剂量组(大豆异黄酮100mg/(kg bw·d))、中剂量组(大豆异黄酮200mg/(kg bw·d))、高剂量组(大豆异黄酮300mg/(kg bw·d))、雌激素组(己烯雌酚0.5mg/kg 饲料),实验周期7 周。采用原位杂交法检测各组大鼠卵巢和子宫组织中Bcl-2 mRNA 和Bax mRNA 的表达水平。结果：大豆异黄酮能够增强大鼠卵巢和子宫组织中Bcl-2 mRNA 的表达水平;而各剂量组大鼠卵巢和子宫组织中Bax mRNA水平呈下降趋势。结论：大豆异黄酮可以增强抗凋亡基因Bcl-2 mRNA,拮抗促凋亡基因Bax mRNA 的水平,推测这是大豆异黄酮对青年雌性大鼠发挥抗衰老作用的途径之一。     

橄榄总黄酮抑菌作用研究

采用纸片扩散法和二倍稀释法测定橄榄总黄酮对食品加工、储存过程中常见腐败菌种的体外抗菌活性及最低抑菌浓度(MIC)。橄榄总黄酮对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、黑曲霉和青霉皆有抑制作用;对大肠杆菌和变形杆菌最低抑菌浓度均为0.25mg/mL;对枯草杆菌、青霉和黑曲霉的最低抑菌浓度为0.125mg/mL;对痢疾杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度均为0.0625mg/mL。     

醇酶法制大豆油废液中异黄酮的纯化及其抗肿瘤作用研究

用有机溶剂萃取和树脂吸附纯化醇酶法制大豆油废液中的异黄酮,用高效液相色谱检测纯化的异黄酮的纯度。以人乳腺癌细胞系MCF-7为模型,检测纯化的大豆异黄酮对MCF-7增殖的影响。结果表明,萃取法粗提的最佳萃取溶剂为乙酸乙酯与正丁醇(1∶1)的混合液,异黄酮提取率为70.47%,纯度为26.45%;树脂吸附纯化的最佳条件为:树脂型号,LSA-8;上样浓度,0.8 mg/m L;上样流速,0.5 BV/h;洗脱液,75%的乙醇;洗脱流速,6 BV/h;洗脱体积,1.5倍上样体积,异黄酮提取率为83.71%,纯度为72.09%。抗肿瘤实验表明,大豆异黄酮浓度达到100 mg/L时,能显著(p0.01)抑制MCF-7细胞的增殖,其作用有一定的剂量依赖性。     

水溶性大豆多糖的抑菌活性研究

对大豆多糖的抑菌活性进行了研究。试验表明,大豆多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产黄青霉和黑曲霉都有一定的抑制作用;在pH6的条件下大豆多糖抑菌活性最强;大豆多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和产黄青霉的最小抑菌质量浓度分别为8．0、6．0、1．0mg／mL和1．0mg／mL。     

泾渭茯砖茶发酵过程中霉菌的变化

茯砖茶发源于陕西泾阳,属于后发酵茶,霉菌是其发酵过程中起重要作用的菌,泾渭茯砖茶是茯砖茶的代表.本研究分析了泾渭茯砖茶发酵过程中的12个不同阶段(0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、23、28 d)可培养霉菌的变化,结果表明,发酵过程中参与的霉菌有8种,分别为冠突曲霉(Aspergillus crista...     

真菌激发子对灵芝液体发酵生产多糖和三萜类物质的影响

采用酸解法以3 种食用菌病原真菌(木素木霉、蘑菇轮枝孢和顶头孢)为激发子菌株分别制备相应激发子,以不同浓度和不同时间添加到灵芝发酵培养基中,考察对灵芝多糖和三萜类物质积累的影响。其中顶头孢激发子无论是对灵芝多糖还是对灵芝三萜类物质积累的诱导作用都是三者中最好的,使灵芝多糖和三萜类物质的积累与对照组相比分别提高了6.1 倍和5.2 倍,且最佳作用浓度均为120μg/ml,最佳加入时间分别为灵芝发酵培养的中期(3d)和初期(0d);木素木霉激发子对灵芝多糖和三萜类物质积累的诱导作用次之,其产量分别是对照组的2.7 倍和4.0 倍,最佳作用浓度均为80μg/ml,并且最佳加入时间均为灵芝发酵培养的后期(5d);而蘑菇轮枝孢激发子对灵芝这两种活性物质积累的诱导作用是这3 种激发子作用效果最弱的。另外,3 种真菌激发子对灵芝生物量的积累也都产生了积极的影响,特别是木素木霉激发子以80μg/ml 的浓度在灵芝发酵培养初期加入,可以使生物量的积累比对照增加2.3 倍。研究结果表明,真菌激发子对灵芝多糖和三萜类物质的积累因激发子种类、浓度以及添加时间的不同而产生了不同的影响。     

Effect of biotic elicitors on enrichment of antioxidant properties and induced isoflavones in soybean

ABSTRACT:  The antioxidant properties of methanolic extracts from soybean obtained with germination, wounding, and application of biotic elicitors were evaluated. Also, the relationship between observed antioxidant properties and compositional changes in isoflavone content was determined. The 2 biotic elicitors used in this study were the food-grade fungus Aspergillus sojae and A. sojae cell wall extract. Isoflavone content was determined by C₁₈ reverse phase high-performance chromatography coupled with a photodiode array detector. Antioxidant activities of the extracts were measured using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging and β-carotene cooxidation in a linoleate system. Higher antioxidant activities were observed in wounded and elicitor-treated extracts when compared with nonwounded control extracts. In addition, the phenolic content was higher in extracts from wounded and elicitor-treated soybean. Germination for 3 d slightly decreased total isoflavone content (–4.3%); however, wounding increased total isoflavone content (25.8%). The soybean extracts from seeds treated with A. sojae biotic elicitors had the highest total isoflavone contents (9.8 to 11.6 mg/g extract) and displayed the highest antioxidant activities in both the DPPH and β-carotene assays. Also identified in the wounded and elicitor-treated extracts were the induced isoflavones glyceollins that contributed to the higher isoflavone contents observed.     

侧柏叶挥发油抑制真菌实验研究

应用水蒸汽蒸馏法提取侧柏叶挥发油,通过体外抑制真菌实验比较挥发油和常用食品防腐剂山梨酸钾对3种常见真菌的抑菌活性,同时考察两者对这3种真菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果显示,侧柏叶挥发油对上述3种常见真菌表现出明显的抑制活性,侧柏叶挥发油的抑菌作用强于山梨酸钾。侧柏叶挥发油对黑曲霉和青霉的最低抑菌浓度均为25.00 mg/mL;对根霉的最低抑制浓度为12.50 mg/mL。山梨酸钾对黑曲霉和青霉的最低抑菌浓度均大于50.00 mg/mL;对根霉的最低抑制浓度为40.00 mg/mL。由此可见,侧柏叶挥发油在天然防腐剂开发方面将有良好的应用前景。     

响应面法优化海带酱的米曲霉和黑曲霉发酵工艺

为研究海带酱的最佳发酵工艺,在考察湿海带与湿黄豆比例、米曲霉与黑曲霉比例、盐浓度和盐水添加量等单因素对海带酱氨基态氮影响的基础上,采用响应面法对海带酱的米曲霉和黑曲霉发酵工艺进行优化。结果表明,海带酱的最佳发酵条件为:湿海带与湿黄豆比例为3:1,米曲霉与黑曲霉比例为2:1,盐浓度为14.5%,盐水添加量为77%,该条件下海带酱中氨基态氮值达到最高,为0.76%±0.04%,与理论预测值基本一致。这表明使用最佳发酵条件制作海带酱,可提高氨基态氮含量,增强海带酱的鲜味。同时,该海带酱营养成分为:能量171.33±1.15 kJ/100 g,蛋白质3.22±0.04 g/100 g,脂肪1.92±0.03 g/100 g,碳水化合物5.68±0.06 g/100 g,钠2633.00±1.00 mg/100 g;其中,氨基态氮含量符合GB/T 24399-2009《黄豆酱》标准。本研究可为发酵酱制品的进一步开发与利用提供一定的技术指导。     

两株素食者肠道菌产β-葡萄糖苷酶考察及产酶条件优化

采用对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷法,与黑曲霉相比较考察素食者肠道菌LJ-G1、LJ-Q2产β-葡萄糖苷酶能力,再经单因素、响应面试验对菌种的产酶条件进行优化。结果表明:LJ-G1、LJ-Q2菌株均能产β-葡萄糖苷酶,且LJ-Q2产酶能力高于LJ-G1,与黑曲霉相比较,在发酵时间短于64 h时LJ-G1、LJ-Q2产酶能力高于黑曲霉;LJ-Q2菌种的最优产酶条件为:培养基p H 8.0、培养温度38℃、培养时间38 h。在最优条件下进行验证实验,酶活力达到1.70 IU/m L。加入大豆异黄酮原料进行发酵培养,得到游离大豆异黄酮转化率为39.4%。     

高产Monacolin K红曲霉菌种的筛选及液态发酵条件优化

为了提高红曲霉（Monascus ）液态发酵生产Monacolin K的能力,一种新型的常压室温等离子体（ARTP）诱变技术被应用于产Monacolin K红曲霉菌株的诱变选育工作;同时,通过构巢曲霉（Aspergillus nidulans ）平板对峙培养的筛选方法,选育获得较初始红曲霉菌Monacolin K产量提高60%以上的突变菌株MP60-6。确定发酵培养基组成为甘油5%,米粉50 g/L,蛋白胨15 g/L,NaNO3 2 g/L,MgSO4 1 g/L,ZnSO4 2 g/L,KH2PO4 1.5 g/L,并进一步确定在发酵第3、第4天添加0.1%的乙酸和0.2%的柠檬酸,发酵第8天补加10%的甘油。在上述条件下发酵17 d后Monacolin K产量可以达到1 302 mg/L,为出发菌株产量的2.66倍。     

大豆豆脐中异黄酮的提取工艺优化

为了提高大豆豆脐在大豆加工行业的利用率以及更大程度地发挥大豆豆脐的营养价值,本文在国标大豆异黄酮检测方法的基础上,建立了一套适用于测定大豆豆脐中异黄酮含量的高效液相色谱方法。本实验以大豆豆脐为原料,采用乙醇-水溶液作为提取溶剂,通过单因素实验和正交实验确定超声波辅助提取大豆异黄酮的最佳工艺,结果表明:各因素对大豆异黄酮提取率影响大小的顺序为:提取温度(B)>提取时间(C)>料液比(D)>乙醇浓度(A);在乙醇浓度为80%、提取温度为80℃、提取时间为1.5h、料液比为1:35 g/mL时提取三次,大豆异黄酮的提取率可达10.88±0.120 mg/g。本方法准确、高效,能够提取出原料中90%以上的大豆异黄酮,该提取工艺稳定可行,可为大豆豆脐中异黄酮的提取提供理论依据。