免疫亲和柱净化-HPLC法测定小麦粉中的黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量

建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定小麦粉中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法。小麦粉样品经乙腈-水振荡提取,三合一免疫亲和柱净化后,采用双通道荧光检测器串联光化学衍生器同时测定黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮,二极管阵列检测器测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇。样品中各真菌毒素平均加标回收率为74.8%~105.2%,相对标准偏差为1.96%~6.26%。此方法可用于实验室开展小麦中3种真菌毒素含量的检测。     

免疫亲和层析高效液相色谱法对小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定

目的：建立测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的免疫亲和层析高效液相色谱法。方法：小麦粉经粉碎处理,用水提取,通过免疫亲和柱上样、净化和洗脱后,用高效液相色谱仪测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。结果：在100～5 000 ng·mL^-1,方法的线性关系良好,相关系数(R²)为0.999 8,检出限为48 ng·mL^-1,回收率为90.1%～109.6%,相对标准偏差为1.49%～2.20%。结论：该方法操作步骤简便,特异性强,精密度高,可以作为大批量分析小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的处理方案。     

免疫亲和柱净化—高效液相色谱法同时检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物

建立脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其衍生物3-乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-ADON)和15-乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-A-DON)的免疫亲和柱净化—高效液相色谱同时检测方法。小麦样品经超纯水提取、免疫亲和柱净化、吹干、定容后,用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行DON、3-A-DON和15-A-DON三种毒素的同时检测,并与液相色谱质谱法比对。结果表明:该方法检出限,DON、3-A-DON和15-A-DON均为100μg/kg,样品加标回收率范围86.6%~96.5%,变异系数小于10%,具有较好的准确性和精密度。该方法简单、快速、灵敏度高、选择性好,适用于小麦中DON、3-A-DON和15-A-DON的同时检测。     

小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化-高效液相色谱检测方法研究

目的建立小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化-高效液相色谱检测方法。方法样品经纯水提取后,用免疫亲和柱净化,经甲醇洗脱,在C18色谱柱上等度洗脱分离,采用紫外检测器检测。结果标准曲线在0.1~2.0 mg/kg范围内线性良好。小麦基质中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回收率为72.8%~110.1%,精密度为3.6%~10.8%,实验室内Hor Rat值为0.24~0.48;玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回收率为72.2%~90.6%,精密度为1.2%~5.2%,实验室内Hor Rat值为0.07~0.31。小麦基质中雪腐镰刀菌烯醇的回收率为58.9%~100.4%,精密度为3.6%~11.3%,实验室内Hor Rat值为0.23~0.63;玉米中雪腐镰刀菌烯醇的回收率为56.9%~91.9%,精密度为2.5%~7.8%,实验室内Hor Rat值为0.11~0.43。结论该方法具有灵敏度高、重现性好、操作简便、准确可靠等特点,适用于小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的测定。     

高效液相色谱法测定粮谷类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

利用纯水溶解提取粮谷类样品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,经过免疫亲和柱净化,并优化提取净化条件,通过高效液相色谱检测其含量。结果表明,采用2 mL滤液上样,经氮吹仪在40 ℃吹干后,用1 mL乙腈-水（20∶80,V/V）定容,在波长220 nm条件下进行检测,色谱峰分离效果良好。脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量在20～500 ng/mL范围内线性关系良好（R2=0.999 8）,检出限2 μg/kg,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）值为2.4%,回收率为87.6%～98.9%,RSD值为2.04%～2.68%,表明该方法具有良好的精密度和准确性,适用于粮谷类样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的定量分析检测。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金检测试纸的研制及应用

采用合成脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Dexynivalenol,DON)人工抗原,制备抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体(mAb),并以此为基础建立胶体金免疫层析检测试纸,于胶体金读数仪配合使用,用于进行玉米和小麦样品中DON的快速定量检测。通过检测玉米和小麦样品,脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金试纸方法检测限为87μg/kg,定量限为290μg/kg,线性范围400~5 000μg/kg,相关系数r=0.998。以国家标准(GB/T23503—2009)免疫亲和柱-高效液相色谱法检测样品的结果为认定值,胶体金检测法的准确度在80.7%~143.6%,变异系数范围4.7%~16.4%。采用配对t-检验分析,胶体金检测法与国标液相方法无显著性差异。     

不同净化柱处理对小麦粉中4种镰刀菌毒素的净化效果

比较MycoSep~?226多功能净化柱、DZT MS-PREP免疫亲和柱和实验室制备聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱在检测小麦粉中4种镰刀菌毒素(玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素)过程中的前处理效果。选择MycoSep~?226多功能净化柱、DZT MS-PREP免疫亲和柱和实验室制备聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱,通过不同的提取和前处理方法,以及建立高效液相色谱-串联质谱检测法,对小麦粉中的4种镰刀菌毒素进行测定。DZT MS-PREP免疫亲和柱处理小麦粉样品所得的回收率为88.01%~107.31%,相对标准偏差为1.09%~14.42%;聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱的回收率为70.05%~112.80%,相对标准偏差为3.42%~12.25%;MycoSep~?226多功能净化柱的回收率为69.42%~111.12%,相对标准偏差为1.46%~13.24%。免疫亲和柱具有重复利用,有机溶剂耗用量少、特异性强等显著优势,且聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱为新载体免疫亲和柱的制备提供了依据。     

粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇提取方法的验证与优化

根据脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)溶于水的性质,用水提取DON,经免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-紫外检测器测定,外标法定量.试验结果表明,验证后DON的回收率高达85％～90％,符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》规定要求.     

免疫亲和高效液相色谱法测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法改进

本文研究了小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高效液相色谱的检测方法。小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测对于小麦粉的储藏及食用质量安全控制非常重要,而GB 5009.111-2016中规定的免疫亲和高效液相色谱法的色谱条件对于检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇存在假阳性的风险。本文在国家标准的基础上,通过试验研究,优化了液相色谱条件:流动相为甲醇-水(25:75,V/V),检测波长240 nm、扫描范围190 nm~400 nm,本文还通过二极管阵列检测器能进行全波长扫描的特性,研究了定性分析的方法。该方法验证结果:回收率为91.7%~97.2%,检出限为20μg/kg,在50 ng/m L~5000 ng/m L的浓度范围内,线性相关系数为0.99989,精密度为0.83%~3.21%。优化后的方法既能通过定性分析避免假阳性的风险,又保持了较高的回收率和精密度、较宽的线性范围、较低的检出限,可以更好、更准确地用于小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法优化

目的 优化超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的分析方法。方法 样品经粉碎匀质后, 采用70%乙腈-甲酸水溶液涡旋浸泡提取, 普瑞邦亲和柱净化, 以乙腈-0.05%氨水作为流动相, Waters BEH C18柱(2.1 mm×100 mm, 1.7 μm)进行色谱分离, 超高效液相色谱-串联质谱的多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)模式进行测定, 内标法定量。结果 脱氧雪腐镰刀菌烯醇在5.0~150.0 μg/L范围内具有良好的线性关系(r2=0.9995), 添加回收率为93.4%~101.6%, 相对标准偏差为1.41%~3.54%, 质控样检测值在参考值允许范围内(569±60) μg/kg, 具有较好的重现性和准确度。结论 本研究提升了脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测能力, 该方法准确、可靠、便捷, 可满足实验要求。     

超高液相色谱串联质谱法测定小麦粉中真菌毒素

建立小麦粉中雪腐镰刀菌烯醇(NIV)、隐蔽型脱氧雪腐镰刀烯醇(Deepoxy-DON)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及衍生物(3A-DON、15A-DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)常见6种真菌毒素的同时测定方法。试样用多功能净化柱净化,液相色谱-串联质谱基质内标法定量测定。结果表明6种真菌毒素的检出限在0.50μg/kg~1.00μg/kg之间,线性相关系数R~20.994,3个水平加标回收率为82.1%~108.9%,RSD为4.6%~14.5%。采用本方法参加面粉中脱氧雪腐镰刀烯醇能力验证样品质控考核,统计结果 Z为-1.93,结果评价为满意。该方法准确、灵敏、高效,可适用于小麦粉中6种常见真菌毒素的定量分析。     

多功能净化柱净化-超高液相色谱串联质谱法检测云南所售部分面条及面条制品中的6种真菌毒素

目的 建立多功能净化柱净化-超高液相色谱-串联质谱法检测云南所售部分面条及面条制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮6种真菌毒素的含量。方法 样品经乙腈-水-甲酸(70: 29: 1, V:V:V)溶液浸泡提取, 通过Pribo Fast?M226多功能净化柱净化, 采用超高液相色谱-串联质谱的多反应监测模式进行分析, 外标法进行定量。结果 6种真菌毒素在0.05~400 μg/L范围内线性关系良好(r>0.994), 加标回收率为87.6%~101.3%, 相对标准偏差为1.09%~3.65%。81份面条样品中, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出含量为15.2~664 μg/kg, 检出率为98.77%, 检测值均未超过国家食品安全标准规定的参考限量值, 其余5种真菌毒素均为未检出。结论 本检测方法具有快速便捷、准确性好、灵敏度高、特异性强等特点, 适用于面条中6种真菌毒素的同时测定。     

运用免疫亲和柱和高效液相色谱(HPLC)检测啤酒大麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇

采用免疫亲和柱净化、高效液相色谱定量等方法对啤酒大麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)进行检测。向啤酒大麦中加入标准品,加标的范围在0.10～2.00μg/g,加标回收率为92.04%～97.29%,相对标准偏差是0.92%～2.67%。检出限是0.01μg/g。所测样品中DON的含量范围在0.0123～0.0926μg/g,其中江浙、云南和东北产区的啤酒大麦中DON含量较高。     

免疫亲和高效液相色谱法测定小麦粉品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法改进

本文研究了小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高效液相色谱的检测方法。小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测对于小麦粉的储藏及食用质量安全控制非常重要,而 GB 5009.111-2016 中规定的免疫亲和高效液相色谱法的色谱条件对于检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇存在假阳性的风险。本文在国家标准的基础上,通过试验研究,优化了液相色谱条件：流动相为甲醇-水（25:75,V/V）,检测波长 240 nm、扫描范围 190 nm~400 nm,本文还通过二极管阵列检测器能进行全波长扫描的特性,研究了定性分析的方法。该方法验证结果：回收率为 91.7%~97.2%,检出限为 20 μg/kg,在 50 ng/m L~5000 ng/m L 的浓度范围内,线性相关系数为 0.99989,精密度为 0.83%~3.21%。优化后的方法既能通过定性分析避免假阳性的风险,又保持了较高的回收率和精密度、较宽的线性范围、较低的检出限,可以更好、更准确地用于小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测。     

免疫亲和高效液相色谱法测定小麦粉品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法改进

本文研究了小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高效液相色谱的检测方法。小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测对于小麦粉的储藏及食用质量安全控制非常重要,而 GB 5009.111-2016 中规定的免疫亲和高效液相色谱法的色谱条件对于检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇存在假阳性的风险。本文在国家标准的基础上,通过试验研究,优化了液相色谱条件：流动相为甲醇-水（25:75,V/V）,检测波长 240 nm、扫描范围 190 nm~400 nm,本文还通过二极管阵列检测器能进行全波长扫描的特性,研究了定性分析的方法。该方法验证结果：回收率为 91.7%~97.2%,检出限为 20 μg/kg,在 50 ng/m L~5000 ng/m L 的浓度范围内,线性相关系数为 0.99989,精密度为 0.83%~3.21%。优化后的方法既能通过定性分析避免假阳性的风险,又保持了较高的回收率和精密度、较宽的线性范围、较低的检出限,可以更好、更准确地用于小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测。     

免疫亲和高效液相色谱法测定小麦粉品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法改进

本文研究了小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高效液相色谱的检测方法。小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测对于小麦粉的储藏及食用质量安全控制非常重要,而 GB 5009.111-2016 中规定的免疫亲和高效液相色谱法的色谱条件对于检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇存在假阳性的风险。本文在国家标准的基础上,通过试验研究,优化了液相色谱条件：流动相为甲醇-水（25:75,V/V）,检测波长 240 nm、扫描范围 190 nm~400 nm,本文还通过二极管阵列检测器能进行全波长扫描的特性,研究了定性分析的方法。该方法验证结果：回收率为 91.7%~97.2%,检出限为 20 μg/kg,在 50 ng/m L~5000 ng/m L 的浓度范围内,线性相关系数为 0.99989,精密度为 0.83%~3.21%。优化后的方法既能通过定性分析避免假阳性的风险,又保持了较高的回收率和精密度、较宽的线性范围、较低的检出限,可以更好、更准确地用于小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测。     

谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物的检测及污染规律分析

采用高效液相色谱-质谱联用技术建立测定小麦粉、挂面、玉米糁、大米等谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(deoxynivalenol-3-glucoside,D3G)、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-acetyldeoxynivalenol,3ADON)及15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-acetyldeoxynivalenol,15ADON)的检测方法,并对各种粮食中的污染情况进行调查。样品采用乙腈提取,正己烷除脂和固相萃取柱净化后,采用高效液相色谱-串联质谱检测,外标法定量。方法均经过优化和验证,满足谷物及其制品的检测要求。分析96份谷物及其制品中4种真菌毒素的污染规律,结果表明,15ADON无检出,只有1个样品检出3ADON,DON和D3G均有不同程度的检出,DON检出率大于D3G,其中在挂面中的含量最高。D3G与DON的含量呈正相关,D3G/DON在30%左右,且不同谷物种类主要污染的毒素种类均以DON为主,其中挂面的污染最为严重。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱的研制

利用本实验室研制的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单克隆抗体研制了DON单克隆抗体免疫亲和柱,柱容量为1μg。小麦样品添加DON标品(1～3μg/g),用蒸馏水提取样品中DON,经免疫亲和柱净化、甲醇洗脱,HPLC检测,回收率大于88%,变异系数4.6%～7.4%。     

免疫亲和层析净化超高效液相色谱法测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量结果的不确定度评价

通过免疫亲和层析净化超高效液相色谱法测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇,对测定过程中可能引入的不确定度进行分析和评定。建立不确定度的数学模型,对各分量进行量化和合成,最终建立玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的不确定度分析方法。评定结果表明:影响检测结果不确定度的因素主要是标准曲线拟合、标准系列工作液配制和测量重复性等;玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量为1 426μg/kg时,其扩展不确定度为158μg/kg(k=2)。     

超高效液相色谱法测定小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

采用免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法测定小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。结果表明:在100~1000 ng/mL,DON线性关系良好(R2=0.999 933),精密度RSD为1.3%;具有较高的回收率在93.0%~105.5%。本方法准确,快速、简便,能满足小麦样品中DON的检测。