副干酪乳杆菌N1115的耐酸耐胆盐特性研究

本研究对从内蒙古传统发酵乳制品中获得的副干酪乳杆菌N1115（LactobacillusparacaseiN1115）和从市场发酵乳中分离的18株乳酸菌进行了耐酸性（pH2．0）和耐胆盐（pH8．O）特性的研究，结果显示，酪乳杆菌N1115与商业菌株相比，在耐酸耐胆盐特性方面具有明显的优势，具有良好的益生菌开发潜质。     

植物乳杆菌KLDS 1.0318产酸、耐酸、耐胆盐能力及其免疫特性研究

目的:通过体外实验,研究植物乳杆菌KLDS 1.0318的生长曲线、产酸能力、耐酸耐胆盐性能,在此基础上对其可能的免疫调节活性进行研究。方法:采用平板计数法和紫外-可见分光光度法测定菌株生长曲线,pH计测定其产酸能力,平板计数法测定该菌株在酸性及高胆盐环境作用后的活菌数及存活率。采用CCK-8法观察不同剂量的植物乳杆菌KLDS 1.0318对小鼠脾淋巴细胞增殖能力以及对小鼠腹腔巨噬细胞能量代谢水平的影响,采用巨噬细胞吞噬中性红法评估不同剂量的植物乳杆菌KLDS 1.0318对巨噬细胞吞噬作用的影响。结果:植物乳杆菌KLDS 1.0318在4 h后进入对数期,12 h后达到稳定期。其产酸能力较强,pH在12 h后降至4.16。菌株在pH为2.5、3.5条件下培养至3 h时,其存活率分别为91.20%、97.50%,在胆盐质量浓度分别为0.3、0.5 g/100 mL的培养基中作用4 h后,其存活率分别为95.40%、87.76%。一定剂量的植物乳杆菌KLDS 1.0318能够促进脾淋巴细胞和巨噬细胞活性,并呈现剂量依赖关系。结论:植物乳杆菌KLDS 1.0318生长较快,具有较强的产酸、耐酸、耐胆盐能力,并具有潜在免疫调节功能。     

原生质体融合提高嗜酸乳杆菌耐酸及耐胆盐能力

两株不同来源嗜酸乳杆菌La-w1和La-w2进行原生质体融合,获得一株耐酸和耐胆盐能力强的菌株La-F1,并对其生长特性进行研究。结果表明,融合菌株La-F1耐酸性和耐胆盐能力明显高于初始菌株,其生长特性适于乳酸发酵食品要求。     

副干酪乳杆菌NCU622耐酸耐胆盐及其黏附性能

通过体外实验研究副干酪乳杆菌NCU622的耐酸、耐胆盐性能;采用体外细胞模型（人体结肠腺癌细胞系Caco-2细胞）测定副干酪乳杆菌NCU622的黏附性能,考察了菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能的影响,并对该菌株进行细胞毒性检测。结果表明：副干酪乳杆菌NCU622在pH 2.5的MRS液体培养基中作用3 h,存活率为98.21%;在胆盐质量浓度为0.3、0.5 g/100 mL的MRS液体培养基中作用4 h,存活率分别为95.14%和85.07%。副干酪乳杆菌NCU622对Caco-2细胞的黏附能力较强,为（21.19±0.94）CFU/Caco-2细胞,且菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能均有影响。副干酪乳杆菌NCU622与Caco-2单层细胞共培养24 h后,对其无裂解作用。这表明副干酪乳杆菌NCU622具有良好的耐酸耐胆盐能力及较强的黏附性能,且对Caco-2细胞无裂解作用,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品的菌种要求。     

耐酸耐胆盐嗜酸乳杆菌的紫外诱变选育

通过紫外诱变提高嗜酸乳杆菌的耐酸耐胆盐能力。通过正交试验确定了诱变参数：20 W紫外灯,菌液稀释至OD6000.65左右,照射60 s,照射距离为30.5 cm,此条件的致死率为90.5%。诱变处理后的菌体在模拟人肠道胆汁盐浓度（0.3%）以及pH=2的选择性培养基中处理不同时间后,活菌计数,最终筛选出具有耐胆盐能力显著增强的突变体L.a.abr。在含0.3%胆盐和pH为2的选择性培养基中培养1.5、2.0、2.5 h时的存活率分别为19.57%、10.87%和4.78%,而出发菌株的相应存活率分别为3.68%、1%、0.23%。     

两歧双歧杆菌耐氧耐酸耐胆盐优良菌株的选育

本实验通过反复驯化的培养方法将两歧双歧杆菌驯化成耐氧耐酸耐胆盐的优良菌株。在耐氧驯化时,通过增加培养基中的氧气分压的方法进行驯化;在耐酸驯化的过程中,通过降低培养基的初始pH值的方法进行。实验结果表明,在牛乳培养基中耐氧驯化后的双歧杆菌的增殖比例为42000%,而原始菌的增殖比例仅为8333%,且前者的凝乳时间较后者短,为后者的2/3;再经过耐酸驯化的菌株在低pH值条件下的产酸性能也大为提高,且耐酸性明显优于未经驯化的菌株;最后再经过胆盐驯化的菌株在胆盐浓度为0.5%时培养后也有较高的活菌数,说明其对胆盐的忍耐力明显增强。     

两歧双歧杆菌耐氧耐酸耐胆盐优良菌株的选育

通过反复驯化的培养方法将两歧双歧杆菌驯化成耐氧耐酸耐胆盐的优良菌株。实验结果表明，在牛乳培养基中耐氧驯化后的双歧杆菌的增殖比例为41000％，而原始菌的增殖比例仅为8233％，且前者的凝乳时间为后者的2／3；经过耐酸驯化的菌株在低pH值条件下的产酸性能也大为提高，且耐酸性明显优于未经驯化的菌株；胆盐驯化的菌株经胆盐浓度为0．5％的培养后也有较高的活菌数，其对胆盐的忍耐力明显增强。     

益生性植物乳杆菌的体外抗氧化活性研究

对从内蒙古奶豆腐及新生儿肠道中分离的5株植物乳杆菌的抗氧化活性进行分析.将保存的5株植物乳杆菌用MRS液体培养基活化培养后,对其耐酸特性、耐胆盐特性、疏水性和抗氧化能力进行分析.结果表明,5株植物乳杆菌均具有一定的耐酸和耐胆盐特性,其中植物乳杆菌MGSHC4302能够耐受pH=2.0的酸性环境,植物乳杆菌CRFA4608、MGSHC4301和MGSHC4302能够耐受1.0％的胆盐:5株植物乳杆对二甲苯和三氯甲烷的疏水性明显好于LGG,表明这些菌株具有较好的黏附性.实验结果表明,植物乳杆菌CRFA4608和MGSHC4302对羟自由基的清除能力高于对照菌株鼠李糖乳杆菌LGG,除植物乳杆菌MGSHC4303外其他4株茵对DPPH的清除能力均高于鼠李糖乳杆菌LGG或与之相近,而植物乳杆菌MGSHC4302、MGSHC4303具有较高的超氧阴离子清除能力.综上所述,植物乳杆菌MGSHC4302可以作为今后开发具有益生性产品的潜在菌株.     

耐糖鼠李糖乳杆菌发酵生产L-乳酸的研究

对一株耐糖鼠李糖乳杆菌在高浓度葡萄糖条件下发酵生产L-乳酸进行研究。考察了接种量、发酵温度、pH和中和剂对乳酸发酵的影响。结果表明最适发酵条件为接种量15％（w／w），温度40℃，pH613，中和剂为氨水。当初始葡萄糖浓度为200g/L时，在16L罐中分批发酵90h，L-乳酸浓度达到182．8g，L，转化率为91．4％，产酸速率为2．03g／（h·L）。     

鼠李糖乳杆菌发酵及冻干保护的研究

对鼠李糖乳杆菌发酵性能和冷冻干燥存活率与保护剂、发酵时间和温度的关系进行了研究。利用液体发酵、紫外分光测量法、微量活菌计数法进行培养、测量。结果表明，鼠李糖乳杆菌发酵周期为12－16h；乳清粉和双歧因子对鼠李糖乳杆菌发酵产酸性能和细菌总数有定的影响。正交实验结果表明，10％乳清粉，15％脱脂奶粉，16h发酵时间的组合，冷冻干燥后存活的影响无显著性差异。结论：乳清粉和双歧因子在发酵后期会对鼠李糖乳杆菌的生长和发酵有促进作用可能是含糖量较高的原因。在冻干时，蛋白质（特别是酪蛋白）对细菌有保护作用。     

应用基因组改组选育耐糖L-乳酸高产菌株

本研究应用基因组改组提高鼠李糖乳杆菌的耐糖能力,进而提高L-乳酸的产量。通过紫外线和亚硝基胍诱变方法获得8株改良出发菌株。考察了氨基酸前处理和变溶菌素对原生质体形成的影响。利用双亲灭活的原生质体进行递进式融合,经过两轮基因组改组和碳酸钙高糖平板及瓶筛选,选育出了耐糖改组菌株F2-2。在初糖浓度为150g/L发酵罐中,F2-2的乳酸产量为140g/L,是野生型乳杆菌的1.8倍。结果表明基因组改组技术能够快速提高乳酸菌耐糖和产酸能力两个表型。     

干酪乳杆菌基因组改组菌株耐酸性表征

本实验对干酪乳杆菌基因组改组菌株的耐酸性进行了研究,结果表明,冷冻( － 80℃)和临界pH 值(pH3.2)对干酪乳杆菌基因组改组菌株影响不显著,HCl 和游离乳酸对该菌株生长有一定影响,游离乳酸影响更大。在pH5.0 条件下发酵60h,干酪乳杆菌改组菌株获得的菌体干重为6.34g/L,乳酸产量为87.6g/L,比原始菌株耐酸性有显著提高。     

酸汤中乳酸菌的鉴定及其耐酸、耐胆盐和抗氧化活性

采用16S rDNA基因序列对从酸汤中分离出的6株乳酸菌进行鉴定,并研究6株菌的耐酸和耐胆盐能力;同时以清除1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基为指标,探究其体外抗氧化活性。结果表明,6株菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),可耐受pH2.5和0.3%质量分数的胆盐,且活菌数保持在10⁷ CFU/mL以上,存活率大于87%;菌体浓度为10⁸ CFU/mL时,6株菌对DPPH自由基的清除率在23%~35%之间,对羟基自由基的清除率在6%~16%之间。6株植物乳杆菌中,JMST-1兼具良好的耐酸、耐胆盐和一定的抗氧化能力,在耐酸、耐胆盐试验中存活率达到91%,对DPPH自由基和羟基自由基的清除率分别达到28.60%和15.44%。     

植物乳杆菌C8的耐受性和体外降胆固醇活性研究

对一株分离自内蒙古奶豆腐中的植物乳杆菌C8进行了酸和胆汁盐耐受实验,抗生素敏感性试验以及体外胆固醇降解实验,并分析了其降胆固醇的作用机理.结果表明,C8能够耐受pH 3和高浓度胆盐(30g/L)环境;对所选10种抗生素均表现出一定的耐药性;该菌具有良好的降胆固醇活性,产生的游离胆酸的量与胆固醇移除能力呈正相关,且以在甘氨胆酸钠存在条件下最佳(5.39mmol/L).植物乳杆菌c8降胆固醇的作用机理主要是菌体细胞的表面吸附作用和胆固醇与胆盐的共沉淀作用.     

降胆固醇和耐酸耐胆盐益生菌的筛选研究

本研究通过含有胆固醇胶束的MRS-胆固醇液体培养基从五株益生菌中筛选出降胆固醇能力较强的益生菌,接着对筛选出的益生菌进行耐酸、耐胆盐试验。结果表明,五株益生菌都有降胆固醇的功能,其中干酪乳杆菌LCA-1、鼠李糖乳杆菌LR-D和植物乳杆菌LP-C的胆固醇去除率较高,分别为25.26%、22.18%和20.03%;LR-D能够短时耐受低p H值环境,在p H 2.5的发酵液中培养2h的存活率能够达到14.39%,但是耐胆盐能力较差;LP-C能够长时间耐受低p H值的环境,具有较强的胆盐耐受能力,在高胆盐环境(0.5%)中培养2 h的存活率高达133.75%,培养24 h的活菌数仍保持在1.13×105 cfu/m L,此时其余两株菌的活菌未检出,说明LP-C能够耐受高胆盐环境。植物乳杆菌LP-C具有较高的胆固醇去除率,能够耐受低p H值和高胆盐环境。因此,可用于进一步研究与开发。     

乳杆菌在胆盐MRS培养基中的传代稳定性

该实验探究提高乳杆菌传代稳定性的方法以提高乳杆菌在胃肠道的定植能力,为工业生产提供依据。该研究以植物乳杆菌M547、M621、M748、戊型乳杆菌M750为研究对象,研究胆盐环境对菌株生长的影响,利用生长曲线仪确定合适胆盐培养菌株的浓度,对比胆盐培养和MRS培养的菌株在耐胆盐能力、产酸能力、耐酸能力的表现。0.04%的胆盐培养后,菌株在传代过程中对于0.075%胆盐的耐受存活率提升11%~18%左右,0.1%胆盐的耐受存活率提升20%~34%。胆盐培养对于产酸能力,耐酸能力及稳定性的提高没有明显作用,但对菌株的耐胆盐能力及传代稳定性有提高作用,可为研究改善益生菌的益生特性的方法提供理论支持。