酿造工业中黑曲霉孢子检测方法的改良

根据黑曲霉孢子菌的特征，对其检测技术进行探讨，筛选出检测无菌液，找出适于此类菌系检测方法的关键技术，研究结果表明，以0．15％琼脂无菌液代替无菌水对样品进行稀释，每个稀释液制成后，用磁力搅拌器，可使样品达到均匀分散程度，不再产生上浮、聚集的不均匀现象，再经接种，培养，即可获得准确结果，从根本上解决了用原稀释平板法检测孢子菌类数值重视性差，难以实值的问题。     

酿造工业中黑曲霉孢子检测方法的改良

根据黑曲霉孢子菌的特征，对其检测技术进行探讨。筛选出检测无菌液，找出适于此类菌系检测方法关键技术。研究结果表明，以0．15％琼脂无菌液代替无菌水对样品进行稀释，每个稀释液制成后，用磁力搅拌器搅拌，可使样品达到均匀分散程度，不再产生上浮、聚集的不均匀现象，再经接种、培养，即可获得准确结果，从根本上解决了用原稀释平板法检测孢子菌类数值重现性差、难以确定真值的问题。     

酿造工业中黑曲霉孢子检测方法的改良

根据黑曲酶孢子菌的特征，对其检测技术进行探讨。筛选出检测无菌液，找出适于此类菌系检测方法关键技术。研究结果表明，以０．１５％琼脂无菌液代替无菌水对样品进行稀释，每个稀释液制成后，用磁力搅拌器搅拌，可使样品达到均匀分散程度，不再产生上浮、聚集的不均匀现象，再经接种、培养，即可获得准确结果，从根本上解决了用原稀释平板法检测孢子菌类数值重现性差、难以确定真值的问题。     

酿造工业中黑曲霉孢子检测方法的改良

根据黑曲霉孢子菌的特征，对其检测技术进行探讨。筛选出检测无菌液，找出适于此类菌系检测方法关键技术。研究结果表明，以０．１５％琼脂无菌液代替无菌水对样品进行稀释，每个稀释液制成后，用磁力搅拌器搅拌，可使样品达到均匀分散程度，不再产生上浮、聚集的不均匀现象，再经接种、培养，即可获得准确结果，从根本上解决了原稀释平板法检测孢子菌类数值重现性差、难以确定真值的问题。     

酿造工业中黑曲霉孢子检测方法的改良

根据黑曲霉孢子菌的特征，对其检测技术进行探讨，筛选出检测无菌液，找出适于此类菌系检测方法关键技术，研究结果表明，以0.15%琼脂无菌液代替无菌水对样品进行稀释，每个衡释液制成后，用磁力搅拌器搅拌，可使样品达到均匀分散程度，不再产生上浮、聚集的不均匀现象，再经接种、培养、即可获得准确结果，从根本上解决了原稀释平板法检测孢子菌类数值重现性差、难以确定真值的问题。     

微生物检验中的无菌操作

无菌及无菌操作的概念 无菌是指在环境中一切有生命活动的微生物的营养细胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。无菌操作是指在无菌环境下进行的细胞传代培养、植物组织培养、细菌接种等操作,目的是防止微生物进入人体组织或其他无菌范围。无菌操作是微生物检测中的重要概念,只有在培养基、检测设备等处于无菌的前提下,样品才可能不受污染,才可能实现微生物检测的准确、可靠。     

单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品的 制备与验证

目的研究制备适用于验证、评价实验室或检测机构检测能力的单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的能力验证冷冻干燥样品。方法对目标菌与干扰菌进行10倍梯度稀释,对不同稀释度的菌液进行菌落计数得到菌含量,确定单核细胞增生李斯特氏菌与干扰菌的添加量;对保护剂和预冻条件进行筛选优化,制备单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品。冻干样品采用西林瓶真空包装,4℃条件下冷藏保存,随机取样检测评估样品均匀性,并在210 d期间内定期抽样检测不同贮存温度下的冻干样品,检测评估样品的稳定性。结果每个冷冻干燥阳性样品最终添加目标菌单增李斯特菌和干扰菌分别为10~2 CFU/m L和10~4 CFU/m L;每个阴性样品添加干扰菌10~4 CFU/m L;最佳冻干保护剂的组合为海藻糖3%,脱脂奶粉8%,谷氨酸钠1.5%。检测结果显示PT冻干样品具有较好的均匀性和稳定性。结论建立的单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品制备方法与评估程序均为有效,适用于验证与评价实验室或检查机构检测能力,满足能力验证活动的要求。     

肠侵袭性大肠埃希氏菌国家核酸标准样品的研制

目的研制肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品,并对其均匀性和稳定性进行评价。方法本文研究了肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的关键制备技术和保存技术,定值技术和定值方式,开展均匀性和稳定性试验,并对食品中肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的不确定度进行确定;标准样品采用Pico Green DNA分子荧光定量方法进行定值。多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度。结果标准样品均匀性标准不确定度为0.016%,不稳定标准差为0.0100,均匀性和稳定性试验结果表明,本文研制的标准样品均匀且稳定。结论研制出具有溯源性的肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品并获得国家标准样品证书,可适用于肠侵袭性大肠埃希氏菌的检测和质量控制。     

食品检测用大肠埃希氏菌标准物质的研制

目的建立食品检测用大肠埃希氏菌标准物质的制备方法, 研制均匀稳定的标准物质,用于实验室内部质量控制。方法采用冷冻干燥技术制备含量为4-5×104CFU/样品的菌球,参照《CNAS-GL29：2010标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,随机抽取20件样品进行均匀性检验,采用单因素方差分析对结果进行统计分析;将样品分别于-20℃、4℃、25℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。并组织3家实验室进行协同标定,再使用20件食品作为基质,按照国标法检验大肠埃希氏菌标准物质的适用性。结果对20瓶标准物质的均匀性检测结果进行单因子方差分析： F=1.933, 符合标准物质的要求。标准物质在?20 ℃保藏28 d,复苏率为96.2%;在4 ℃保藏14 d,复苏率为77.0%;25 ℃保藏7 d,样品中菌含量仍保持在104CFU/样品的水平,说明样品的短期储藏稳定性、长期储藏稳定性和运输稳定性都符合要求。经3家实验室协同标定, 样品活菌含量均在104CFU/样品水平,生化鉴定结果均符合大肠埃希氏菌的特征;标准物质加入到20种食品基质中, 均可以检出大肠埃希氏菌,活菌含量仍保持在104CFU/样品的水平。结论本研究所制备的大肠埃希氏菌标准物质的均匀性、储藏稳定性和运输稳定性均符合要求,适用性良好,可用于食品检测实验室的质量控制和食品中大肠埃希氏菌检测结果的评价。     

沙门氏菌能力验证样品制备

目的研究制备适用于沙门氏菌(Salmonella)能力验证(PT)检测项目的冷冻干燥样品,通过能力验证确定实验室或检查机构的校准、检测能力。方法对目标菌与干扰菌进行10倍梯度稀释,对不同稀释度的菌液进行菌落计数并计算菌浓度,确定沙门氏菌与干扰菌的添加量,以冻干的绿豆粉为基质,脱脂奶粉为冻干保护剂,将细菌混合物与冻干保护剂混合均匀,采用真空冷冻干燥方式分别制备沙门氏菌能力验证阳性样品与阴性样品,采用西林瓶真空包装、4℃冷藏贮存;通过随机抽样和鉴定以评估样品的均匀性,通过观察样品在90 d内不同温度下目标菌的测试结果以评估样品的稳定性。结果每个样品最终添加10~100 CFU目标菌,添加104 CFU干扰菌;抽检的样品均能有效鉴定,显示PT样品具有较好的均匀性;通过保存温度和时间的稳定性检验显示测试结果符合预期效果,PT样品具有较好的稳定性。结论建立了有效的沙门氏菌能力验证样品制备的方法与评价程序。     

甘蔗亚硫酸法糖厂产糖率的灰色关联度分析及预测

运用灰色系统理论,对甘蔗亚硫酸法糖厂产糖率的影响因素进行灰色关联度分析,得到了诸因素对产糖率的关联序,在此基础上,建立了产糖率预测的ＧＭ（１,Ｎ）模型,实验结果表明,模型有较高的精度。     

激活剂对米曲霉孢子萌发率的影响

双菌种制曲可以弥补米曲霉分泌酶系的不足,但米曲霉和黑曲霉孢子萌发时间不一致的问题限制了双菌种制曲的实际应用。研究首先明确了在相同培养条件下黑曲霉和米曲霉孢子萌发的时间差,添加激活剂可以加快米曲霉的孢子萌发速度,激活剂的最佳浓度为0.4%。添加该浓度激活剂,在不同温度下培养米曲霉和黑曲霉的孢子,结果表明,38℃下培养4.5 h,能使米曲霉和黑曲霉的孢子萌发率基本达到一致,分别达到72%和73%。     

辛烯基琥珀酸菊粉酯的乳化及抑霉性能研究

以菊粉为参照,研究了取代度、添加量、冻融等因素对辛烯基琥珀酸菊粉酯乳化能力的影响,考察了辛烯基琥珀酸菊粉酯对扩展青霉、黑曲霉和黑根霉菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长的抑制作用。试验结果表明:菊粉经辛烯基琥珀酸酐改性后具有良好的乳化性,其乳化能力随取代度(DS)和添加量的增加而增大。当辛烯基琥珀酸菊粉酯(DS=3.17×10-2)浓度为2.50%时,乳化液乳化效果和冻融稳定性良好,乳液颗粒大小一致、不聚集。抑菌实验表明辛烯基琥珀酸菊粉酯对扩展青霉、黑曲霉和黑根霉三种霉菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.00%、4.00%和2.00%(m/V),其对扩展青霉、黑曲霉和黑根霉菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长抑制作用随辛烯基琥珀酸菊粉酯浓度增加而增强。低于MIC浓度时,辛烯基琥珀酸菊粉酯对扩展青霉菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长的抑制作用最强,其次是黑曲霉,对黑根霉的抑制作用较弱。     

分光光度法测定黑曲霉孢子浓度的研究

采用分光光度计测定黑曲霉（Aspergillus niger）xj在不同生长期、不同稀释倍数下孢子悬液的OD600 nm值,对比血球板计数法得到的孢子悬液浓度,研究在对数期和稳定期OD600 nm值与孢子浓度之间的关系;采用微电影拍摄法观察黑曲霉xj产孢结构形成过程,并绘制固体发酵条件下的生长曲线。结果表明,在10～20倍稀释区间内,稀释倍数与OD600 nm值之间呈现良好线性关系（对数期R2 =0.984 8、稳定期R2 =0.991 3）,且OD600 nm值与孢子浓度之间也保持良好的线性关系（对数期R2 =0.995 3、稳定期R2 =0.993 6）;通过微电影拍摄法观察到黑曲霉xj产孢结构形成是分阶段进行的过程;在固体发酵过程中,孢子浓度呈现“S”型增长趋势。该研究为测定丝状真菌孢子浓度提供另一种可借鉴的方法。     

苹果腐败霉菌的拮抗酵母菌筛选鉴定及拮抗机理初探

从苹果果皮中筛选出对引起苹果采后病害的扩展青霉(Penicillium expansum)、互隔交链格孢霉(Alternaria alternata)和黑曲霉(Aspergillus niger)具有拮抗作用的酵母菌,并初步研究其拮抗机理。结果表明:筛选得到两株可以同时拮抗三种腐败霉菌的拮抗酵母菌Y4和Y9,根据酵母菌菌落性状、生理生化特征并结合分子生物学的分析结果,鉴定为Candida railenensis和Aureobasidium pullulans,其中A.pullulans为类酵母真菌。C.railenensis的最佳拮抗浓度为109 CFU/mL,对P.expansum、A.alternata和A.niger的菌丝生长、孢子萌发和芽管生长均有显著(p<0.05)的抑制作用。扫描电镜观察到C.railenensis能够包围和吸附腐败霉菌孢子,与它们竞争营养与空间,此外还能够吸附P.expansum菌丝体与其直接作用。C.railenensis的主要抑病机理是营养与空间竞争,并且其生防效果的发挥是多种方式共同作用的综合结果。     

The effect of beta-sitosterol on spore germination and germ-tube elongation of Aspergillus niger and Botryodiplodia theobromae

The effect of beta-sitosterol on spore germination and prevention of elongation of germ-tube of Aspergillus niger and Botryodiplodia theobromae was studied. The antifungal activity of the compound showed a percentage inhibition, of the fungal spore germination, of about 40% at a concentration of 50 micrograms/ml while inhibition on the elongation of germ-tubes was as high as 65% at the same concentration. The ED50 for inhibition of germ-tube elongation in A. niger was about 31 micrograms/ml. The role of the compound in disease resistance is discussed.     

黑曲霉抗菌活性组分分离研究

黑曲霉(Aspergillus niger)是曲霉属黑曲霉群霉菌,为低等真核生物。黑曲霉是集安全和具有许多活性强大酶系等诸多优点于一身的优良工业发酵用菌种。前期研究分离得到一株黑曲霉Aspergillus niger xj,其液体培养代谢物对根癌农杆菌、青枯雷尔氏菌、腐霉等常见农业病原菌有抑制作用。本文对黑曲霉的抗菌活性组分分离研究进行简要综述,对于进一步开发和利用黑曲霉这一真菌资源,研究开发新型的环境友好微生物杀菌剂具有较大的理论和实践意义。     

黑曲霉孢子性状与糖化力的相关性分析

该试验从麸曲中分离纯化鉴定出10株黑曲霉,比较了不同黑曲霉种曲的颜色及产孢量,用水解圈和3,5-二硝基水杨酸（DNS）法定性定量比较其糖化力,进而分析了黑曲霉孢子性状与糖化力的相关性。结果表明,菌株AW1、N3、D11、D2种曲产孢量较多,分别为9.55×109个/g、9.35×109个/g、8.97×109个/g、8.8×109个/g;菌株AY1和AY2种曲产孢量较少,为1.95×108个/g、4.13×108个/g;扫描电镜（SEM）比较菌株AW1、N3、AY1和AY2的分生孢子头,前两者分生孢子头大且小梗紧密,后两者分生孢子头小且小梗疏松;菌株AY1和N3的D/d值及糖化力最高,分别为2.36、1.29,3 158.2 U、2 991.9 U;糖化力定性和定量结果比较吻合,但与黑曲霉孢子的数量和颜色没有明显的相关性。