烟草抗PVY育种材料的筛选与应用

马铃薯Ｙ病毒对东北烟区烟草生产危害日趋严重。通过病圃发病情况调查和温室接种鉴定,初步筛选出ＣＶ９１、８７４１４、８０２１三份常规抗马铃薯Ｙ病毒材料,其中ＣＶ９１在田间调查和温室接种鉴定中表现为高抗马铃薯Ｙ病毒;转基因抗马铃薯Ｙ病毒材料８５－２、８６－１,８７－２,８９－１、９４－１、９５－１、９８－１温室接种鉴定结果为对ＰＶＹ免疫,利用ＣＶ９１育成了中抗ＰＶＹ的新品系９１１１－２１。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:1.烟草突变体的筛选与鉴定

烟草基因组计划重大专项2011年研究项目"烟草突变体库创制、筛选与分析"实施1年后,通过化学和生物方法创制并收获了15万份烟草突变二代种子;建立了2个序列筛选方法和10个表型筛选方法并进行了初步筛选。2012年始,该项目将全面开展烟草各种突变体的大量筛选及鉴定工作。     

甘蓝型油菜EMS突变体库构建及抗除草剂突变体筛选

为了利用诱变技术快速创造变异类型丰富的油菜新材料用于油菜遗传改良，分别用0．4％、0．8％、1．O％和1．2％的EMS（甲基磺酸乙酯）溶液对甘蓝型油菜中双9号种子进行诱变处理。结果发现：（1）1．0％的EMS溶液是处理中双9号干种子的最适浓度，4种不同浓度处理M：表型变异率依次为11．26％、14．82％、27．19％和12．38％；（2）EMS诱变具有器官特异性；（3）M：突变体库中筛选到3株苯磺隆抗性突变体，突变率约为10^-4。现已创建了包括子叶、叶片、花器、株型、角果等多器官变异类型的突变体库，为油菜遗传研究提供了丰富的种质资源。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:4.烟草抗干旱突变体筛选与鉴定

烟草经甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理可以分离得到多种突变体,这些突变体的获得将为揭示烟草生长发育规律奠定基础。烟草突变体的筛选已成为许多重要理论问题得以解决的前体,而筛选方法是突变体筛选成败的关键。干旱是影响植物生长发育的主要环境因子之一[1]。烟草在生长过程中,特别是从团棵期进入旺长期常常遭遇干旱,干旱已经成为影响其营养生长的重要因素。利用突变体材料筛选烟草抗旱突变体,不仅可为     

烟草抗野火病细胞突变体筛选

烤烟品种红花大金元叶片组织悬浮培养细胞经过４～５代继代培养后，铺平板于含野火病粗毒的ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ（简称ＭＳＩ）培养基上进行筛选或置于含野火病粗毒的ＭＳＩ液体培养基上进行浅层筛选培养。存活愈伤组织转移至相同培养基进一步筛选，经两次筛选得到的愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上诱导分化形成植株，通过上述方法筛选得到的抗性愈伤组织细胞比未经筛选进行继代培养的愈伤组织细胞对野火病粗毒表现出较强的抵抗力；对筛选得到的愈伤组织再生植株及其后代进行人工接种，从中筛选出一些抗病株系，研究结果表明，利用体细胞无性系变异，采用细胞离休筛选技术，可以获得抗野火病的烟草新材料。     

烟草抗青枯病突变体153-K的抗性遗传及与农艺性状的关系

烟草青枯病是一种细菌性病害,严重影响烟叶生产,筛选抗青枯病的烟草种质并解析其抗性遗传效应对指导抗病育种具有重要意义。本研究选用感病品种翠碧一号（CB-1）和抗青枯病突变体153-K为亲本,构建了F2群体,利用"主基因+多基因"混合遗传模型分析方法,研究其在安徽、福建两个病圃环境下的遗传效应,并对153-K青枯病抗性与农艺性状进行相关分析。结果表明,153-K在安徽病圃中的最优遗传模型为MX2-EEAD-AD,即2对等显性主基因+加性-显性多基因模型;153-K在福建病圃中最优遗传模型为MX2-ADI-AD,即2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性多基因模型。相关分析结果表明,在安徽、福建两个病圃环境下,青枯病抗性与株高呈显著负相关;而与叶片数、节距、茎围相关性均不显著。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:2.烟草抗主要病虫害突变体的筛选与鉴定

参照烟草品种抗病性鉴定标准GB/T 23224—2008,烟草基因组计划重大专项"烟草突变体创制、筛选与分析"建立了烟草抗病毒病、青枯病、黑胫病、赤星病、烟蚜的高通量筛选方法,将全面开展烟草抗主要病虫害突变体的大量筛选与鉴定工作。     

PVY抗性基因eif4E-pvr2转化烟草的初步研究

eif4E-pvr2基因是辣椒中的一种PVY抗性基因,与感病辣椒品种的eif4E基因只有两个碱基的差异.实验采用RT-PCR从感病材料中克隆得到感病的eif4E基因,再经过定点突变得到eif4E-pvr2基因,构建了抗性表达载体pMEIF2301,并利用叶盘法转化烟草,经GUS和PCR检测,初步明确eif4E-pvr2基因已整合到烟草基因组中.     

利用双层培养基筛选烟草抗赤星病突变体

在接种有赤星病菌(Alternaria alternata)的双层培养基上,成功地从高感赤星病烟草品种 NC89的花药中诱导出突变体苗,对这些突变体苗进行了离体抗病性鉴定,结果表明:其中70％的植株不同程度地表现赤星病抗性,部分表现高度抗性。     

部分烟草种质资源的PVY抗性鉴定

通过对69份烟草种质资源的马铃薯Y病毒(PVY)病圃人工诱发接种鉴定,初步筛查出C151、Hawana10、坝林晒烟和Criollo salteno 11等11份表现为高抗PVY的烟草种质资源,其中烤烟3份,晒烟3份,黄花烟3份,雪茄烟2份.C151属于烤烟类型,花色白,田间可采叶数22～24片,叶形长椭圆,叶色深绿,可作为抗PvY育种亲本.     

烟草青枯病抗性遗传效应分析

烟草青枯病是由青枯菌引起的烟草细菌性病害,是危害我国烟草生产的主要病害之一,解析烟草青枯病的抗性遗传效应对指导抗病育种具有重要意义。本研究采用主基因+多基因混合遗传模型的多世代联合分析方法,以多个抗病/感病样本为亲本,构建了两个不同的杂交组合,进行群体遗传效应分析。结果表明,岩烟97的青枯病抗性由2对加性、显性、上位性主基因以及加性、显性、上位性多基因控制;反帝三号-丙的青枯病抗性受1对加性-显性基因+加性-显性-上位性多基因控制。烟草青枯病抗性以加性效应为主,兼有显性效应,有利于等位基因聚合育种及早代选择。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:3.烟草突变体的TILLING筛选与功能鉴定

TILLING(targeting induced local lesions in genomes,定向诱导基因组局部突变)是利用单核苷酸多态性筛选突变体的一种全新反向遗传学方法,该方法首先通过化学诱变产生高频率点突变,再利用点突变筛选技术如毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,     

烟草愈伤组织辐射诱变抗苯丙氨酸突变体筛选

以K326为材料,研究了L-苯丙氨酸的筛选浓度,γ射线剂量和愈伤组织活化时间对抗苯丙氨酸突变体筛选效果的影响。结果表明:L-苯丙氨酸浓度越高,愈伤组织培养过程中褐变比例越高,细胞活性越低;γ射线剂量和愈伤组织活化时间均对愈伤组织的致死率有较大的影响。综合分析后,采用活化1周的愈伤组织,40Gy的γ射线辐射,以附加3.00mmol/LL-苯丙氨酸的MS培养基为筛选培养基,经多次"筛选—回复"培养,筛选出了苯丙氨酸解氨酶含量显著提高的抗苯丙氨酸细胞系,并诱导分化出再生苗。烟草愈伤组织辐射诱变抗苯丙氨酸突变体筛选体系的建立,为高苯丙氨酸含量烟草材料的培育奠定基础。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:5.烟草耐低钾突变体的筛选与鉴定

烟草是喜钾作物。除了作为重要的营养元素发挥作用外,钾与烟草的抗逆性、抗病虫害能力密切相关;钾含量也是烟叶品质评价的重要指标之一。基于钾素的重要性和我国土壤普遍低钾的国情及国内烟叶钾含量低的现状,开展烟草钾营养基础研究、选育耐低钾/钾吸收高效型烟草品种等工作极为迫切[1]。     

烟草赤星病抗性因素遗传的双列分析

对烟草赤星病两个抗性因素遗传的1／2＊7(7+1)双列杂交分析表明,病斑数量和病斑大小的遗传都符合加性-显性模型。病斑数量的遗传属部分显性类型,显性基因主要表现为减效;病斑大小的遗传属完全显性类型,显性基因为增效基因。1996、1997两年的田间试验结果和苗期离体叶片接种的结果基本一致。烟草对赤星病病菌侵入的抗性较抗病斑扩展的能力更容易通过品种间杂交传递给后代。配合力分析表明,一些组合具有较好的抗侵入特殊配合力,另一些组合具有良好的抗扩展特殊配合力。抗×感组合Beinhart1000-1×NC82两个抗性因素特殊配合力均较好,在抗病育种中有较高的利用价值。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:6.烟草T-DNA激活标签突变体侧翼序列筛选与鉴定

通过激活标签技术(activation tagging)得到突变群体是构建突变体库的一种重要方法,应用此种方法研究基因功能,不管是用正向或反向遗传学方法,都必须先获得插入位点的侧翼序列(flanking sequence)。随着拟南芥、水稻及烟草等作物的侧翼序列数据库的不断完善及烟草全基因组测序的完成,越来越体现出激活标签技术对于推动烟草功能基因组学研究具有巨大的潜力。     

受PVY诱导的烟草NtERD1的基因分离与表达分析

通过抑制差减杂交和cDNA芯片法从受PVY诱导的烟草抑制差减杂交文库中筛选得到一段长为745 bp的基因EST片段,经Blast同源性比对分析,该序列与植物脱水诱导早期应答基因(ERD)在核苷酸和氨基酸水平上高度同源。ORfinder分析表明,该序列包含一个492 bp的开放读码框,编码163个氨基酸。氨基酸Blastp比对显示,该氨基酸序列与其他植物脱水诱导早期应答蛋白具有很高的同源性。所以筛选得到的这个新基因属于烟草脱水诱导早期应答基因,被命名为NtERD1(GenBank登录号为GU144573)。实时荧光定量PCR分析表明,NtERD1在PVY接种早期上调表达,因此NtERD1受PVY侵染诱导,可能对烟草抗病毒具有重要作用。     

植物源抗烟草花叶病毒活性物质的初步筛选

利用半叶枯斑法,测定了13科18种植物蛋白粗提液对烟草花叶病(TMV)的抑制效果。结果表明,不同植物蛋白粗提液对TMV侵染心叶烟的抑制效果存在差异,6种植物蛋白粗提液对TMV的抑制效果达到50%以上,其中菠菜和合欢最高,分别达到了97.44%和96.92%。进一步通过(NH4)2SO4盐析,对菠菜和合欢蛋白粗提液抗病毒活性成分进行了初步分离,并测试(NH4)2SO4盐析的不同蛋白组分对TMV的抑制效果。结果显示,菠菜蛋白粗提液盐析后的两个蛋白组分都表现出很高的抗病毒活性,而合欢蛋白粗提液只在40%~80%饱和度盐析的蛋白组分具有较强的抗病毒活性。     

烟草对赤星病田间抗性的遗传研究

本文选用赤星病（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ）抗感程度不同的７个烟草品种，采用双亲交和双列交的交配设计，于１９９４～１９９６年间对其田间抗性的遗传进行了分析。结果表明，品种间抗病性差异显著，尽管环境因素对发病程度影响很大，各抗病品种的抗性基本稳定。双列分析和世代方差分析结果表明，抗病性呈部分显性，受多基因控制。基因表达的加性效应和显性效应同时存在，以加性为主。各抗性亲本的抗病基因的显隐性方向不同。遗传分析和配合力分析表明，狭义遗传率变幅为２１．２％～７８．１％，所有的抗性亲本均表现出较高的负效应一般配合力，具有较好的特殊配合力的组合有：宾哈特１０００－１×ＮＣ８２、宾哈特１０００－１×Ｇ－１４０、宾哈特１０００－１×金星６００７、净叶黄×ＮＣ８２、许金４号×ＮＣ８２、Ｇ－２８×Ｇ－１４０、Ｇ－２８×金星６００７。在进一步深入了解其抗性机制的基础上，这些材料都可以在赤星病抗病育种中加以利用。     

烤烟CYP82E10基因EMS突变体筛选及其尼古丁转化率分析

烟草尼古丁去甲基酶CYP82E10能够催化尼古丁去甲基化反应,产生致癌物NNN的前体物质。为降低烟叶NNN含量,利用Tilling技术在烤烟云烟87的EMS突变体库中筛选获得烟草尼古丁去甲基酶编码基因CYP82E10的11个突变株,其中M594发生L115F错义突变,M271单株发生P129L错义突变。M4代M594和M271材料的尼古丁转化率分别为对照的45%和38%,M5代分别为对照的34%和45%,说明上述突变能够降低CYP82E10的酶活性及植株转化率。因白肋烟CYP82E10无义突变不影响尼古丁转化率,故烤烟和白肋烟的尼古丁转化机制存在差异。研究获得的低尼古丁转化率突变体可作为育种材料培育低NNN烤烟新品种。