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为解决烤后烟叶基因组DNA提取稳定性差的问题,以烤后烟叶为材料,对CTAB法提取基因组DNA进一步改良优化:对CTAB沉淀缓冲液使用量、裂解时间、Tris平衡酚的处理次数和RNase处理时间4个影响因素进行单因素优化.实验结果表明:CTAB沉淀缓冲液使用DNA溶液体积的1.5倍、裂解时间40 min、Tris平衡酚抽提1次和RNase(10 mg/mL,1μL)处理10 min,能得到主带清晰的烤后烟叶基因组DNA.该方法提取得到的烤后烟叶基因组DNA OD260/OD280为1.7~1.9,OD260/OD230>2.0,35 ng左右基因组DNA即能得到清晰的RAPD和SCAR图谱,适用于以PCR为基础的分子生物学实验. 相似文献
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以实验室自行培育的平菇为实验材料,分别使用CTAB法、SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取平菇基因组DNA,并通过紫外分光光度计、限制性酶切及PCR检测来衡量基因组质量。结果表明,使用CTAB法很难得到高质量的基因组DNA,OD260/280仅为1.5左右,而且伴有较多的杂质,电泳条带拖尾严重;使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,效率较低,同时PCR检测不能得到有效扩增;而使用优化后的SDS-CTAB法及高盐酶解法提取平菇DNA,能够获得质量高、纯度好的基因组DNA,OD260/280基本保持在1.8~2.0之间,电泳条带较为清晰均一,使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,酶切效果较好,并且DNA质量能够满足PCR检测的模板要求。说明SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取的平菇DNA能够满足分子水平操作的要求,两者相比,前者成本较低,后者产率较高。 相似文献
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平菇基因组DNA提取方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以实验室自行培育的平菇为实验材料,分别使用CTAB法、SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取平菇基因组DNA,并通过紫外分光光度计、限制性酶切及PCR检测来衡量基因组质量。结果表明,使用CTAB法很难得到高质量的基因组DNA,OD260/280仅为1.5左右,而且伴有较多的杂质,电泳条带拖尾严重;使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,效率较低,同时PCR检测不能得到有效扩增;而使用优化后的SDS-CTAB法及高盐酶解法提取平菇DNA,能够获得质量高、纯度好的基因组DNA,OD260/280基本保持在1.8~2.0之间,电泳条带较为清晰均一,使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,酶切效果较好,并且DNA质量能够满足PCR检测的模板要求。说明SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取的平菇DNA能够满足分子水平操作的要求,两者相比,前者成本较低,后者产率较高。 相似文献
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为探明繁蜂棚中蚜霉病的病原种类及防治技术,采集繁蜂棚中感病蚜虫和空气中的真菌,通过显微形态学和转录间隔区(ITS)扩增证实繁蜂棚内寄生蚜虫的病原真菌为蚜虫枝孢霉(Cladosporium aphidis);密封试验箱内的消毒试验结果表明:在0.5 g/m3和1 g/m3剂量下,三氯异氰尿酸的总杀菌率可达92.31%和92.31%,对蚜虫枝孢霉的杀灭率分别达80.00%和83.33%;二氧化氯的总杀菌率可达97.88%和83.35%,对蚜虫枝孢霉的杀灭率分别达100%和93.33%;利用含三氯异氰尿酸钠的熏蒸剂熏蒸繁蜂棚,对蚜霉病的防治效率达69.65%。 相似文献
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目的:以鸭血为原料,筛选出高质量、高效率的DNA提取方法。方法:选用4种不同方法提取样品DNA,并建立实时荧光PCR实验,以此鉴别掺假伪劣产品。通过研究DNA质量浓度、提取时间和扩增效果,选取高质量、高效率的提取方法。结果:苯酚/氯仿抽提法提取浓度高、成本低,但步骤烦琐、耗时长,易接触有毒有害试剂;试剂盒法提取DNA纯度较高,但价格昂贵,不适用于大批量样品;核酸提取仪操作简便,但前处理耗时长,适用于大批量产品的检验检测;细胞裂解法操作简单、快速、成本低,因未经后续纯化,所得到的DNA纯度相对较低,但同样满足PCR扩增的检测要求,适用于大批量监督抽查任务。结论:对于大批量的鸭血源性成分检测推荐使用细胞裂解法,但一旦出现阳性样品需要进行复测则需要使用不同的提取方法,以确保实验的准确性。 相似文献
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以海藻糖合酶产生菌——恶臭假单胞菌为目标菌,建立了一种快速、简便提取假单胞菌染色体DNA的方法,利用本方法提取的DNA结构完整、无降解、纯度较高,无需纯化,可直接作为PCR方法扩增目的基因的模板。 相似文献
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目的对比NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种方法提取乳制品中核酸的提取效果,优化提取条件,确定一种更适用于现场检测、简便快速的的乳制品DNA快速提取技术。方法以牛奶、水牛奶、牦牛奶、羊奶、骆驼奶、以及驴奶6种常见的乳制品为材料,分别用NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种提取方法提取乳制品中的DNA,并根据裂解液用量和裂解时间进行优化,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析,检测DNA提取的质量和灵敏度。结果 NaOH裂解法能够提取所有物种的乳制品DNA,而且可以在最佳裂解条件下提取模拟掺假混合乳的DNA进行检测,发现其检测限能达到1%的牛奶含量。结论该方法取样量小,成本低,在15 min内即可完成快速提取,为实验室乳制品DNA定性或定量鉴别,以及乳制品的现场掺假鉴别提供了一种快速灵敏低成本的样品前处理技术。 相似文献
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了得到较高质量的基因组脱氧核糖核酸(DNA),本实验采取了5种方法对四川泡菜盐卤总基因组进行提取,对其提取的浓度、纯度进行分析比较,并以此为模版进行聚合酶链反应(PCR)体外扩增。结果表明,F1所得的基因组DNA纯度及浓度最高,F4方法提取的基因组DNA浓度较高,但受到蛋白或酚类物质的污染,F2以及F5两种方法得到的基因组DNA浓度较低,F3所得的基因组DNA浓度低并且含有较多RNA杂质。因此,本研究采用的5种对四川泡菜盐卤进行总基因组提取方法中,方法F1最合理、高效。: 相似文献
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采用不同方法对麦芽糊精基因组DNA进行提取,从中选取满足麦芽糊精材料进行分子标记检测的最好的DNA提取方法。以市售麦芽糊精为材料,分别采用CTAB、SDS和异硫氰酸胍3种方法提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。光密度检测结果显示,异硫氰酸胍法的提取量和纯度均优于SDS法和CTAB法;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示异硫氰酸胍法提取的基因组DNA谱带清晰、重复性好,SDS法和CTAB法提取的基因DNA观察不到谱带;3种方法提取的麦芽糊精基因组DNA都能够满足PCR分析的需要。结果表明,3种方法均能有效地从麦芽糊精中获得DNA,然而异硫氰酸胍法优于SDS法和CTAB法。 相似文献
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Isolation of genomic DNA is a prerequisite for assessment of milk quality. As a source of genomic DNA, milk somatic cells from milking ruminants are practical, animal friendly, and cost-effective sources. Extracting DNA from milk can avoid the stress response caused by blood and tissue sampling of cows. In this study, we optimized a novel DNA extraction method for amplifying long (>1,000 bp) DNA fragments and used it to evaluate the isolation of DNA from small amounts of milk. The techniques used for the separation of milk somatic cell were explored and combined with a sodium dodecyl sulfate (SDS)-phenol method for optimizing DNA extraction from milk. Spectrophotometry was used to determine the concentration and purity of the extracted DNA. Gel electrophoresis and DNA amplification technologies were used for to determine DNA size and quality. The DNA of 112 cows was obtained from milk (samples of 13 ± 1 mL) and the corresponding optical density ratios at 260:280 nm were between 1.65 and 1.75. Concentrations were between 12 and 45 μg/μL and DNA size and quality were acceptable. The specific PCR amplification of 1,019- and 729-bp bovine DNA fragments was successfully carried out. This novel method can be used as a practical, fast, and economical mean for long genomic DNA extraction from a small amount of milk. 相似文献
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采用两种不同方法对玉米变性淀粉基因组DNA提取比较,并经特异性引物进行实时荧光定量-聚合酶联反应(qRT-PCR)检测,从中选择出更适合玉米变性淀粉后续转基因成分检测的DNA提取方法。通过采用磁珠法和试剂盒法提取玉米变性淀粉基因组DNA,比较不同方法的提取效果。结果表明,试剂盒法的提取效果优于磁珠法。实时荧光定量PCR结果显示,试剂盒法提取的基因组DNA均可扩增出标准的S形曲线,而磁珠法提取的基因组DNA则无任何扩增信号。该研究为检测玉米变性淀粉中的转基因成分奠定了基础。 相似文献
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目的配制一种快速提取肉类DNA且满足重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)要求的裂解液。方法分别配制3种裂解液:Na OH裂解液、Chelex裂解液与PBS裂解液,取200μL裂解液与20 mg肉类样品进行混合,振荡5 s,取上清液稀释10倍直接作为扩增模板。结果 3种裂解液中Na OH裂解液提取DNA在稀释与未稀释条件下均有较好的扩增,Chelex裂解液提取DNA在稀释与未稀释下均无扩增,PBS裂解液提取DNA在稀释作用下有较好的扩增,在未稀释作用下无扩增。裂解液提取法和试剂盒方法提取的纯度、产物的大小几乎一致,所扩增的为同一产物,裂解液所需成本与试剂盒方法相比较低。结论 Na OH裂解液可以在5 min内提取肉类中的DNA,浓度与纯度均较高,所需时间短,成本低,且满足分子检测要求。 相似文献
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Semanti Basu Saptarshi Chatterjee Arghya Bandyopadhyay Keka Sarkar 《Journal of the science of food and agriculture》2013,93(4):788-793
BACKGROUND: Isolation of high‐molecular‐weight DNA is essential for many molecular biology applications. Owing to the presence of polymerase chain reaction (PCR) inhibitors, there is a scarcity of suitable protocols for PCR‐ready DNA extraction from food and natural environments. The conventional chemical methods of DNA extraction are time consuming and laborious and the yield is very low. Thus the aim of this research was to develop a simple, rapid, cost‐effective method of genomic DNA extraction from food (milk and fruit juice) and environmental (pond water) samples and to detect bacterial contaminants present in those samples. RESULTS: This approach is efficient for both Gram‐positive and Gram‐negative bacteria from all the studied samples. Herein super paramagnetic bare iron oxide nanoparticles were implemented for bacterial genomic DNA isolation. The method was also compared to the conventional phenol–chloroform method in the context of quality, quantity and timing process. This method took only half an hour or less to obtain high‐molecular‐weight purified DNA from minimum bacterial contamination. Additionally, the method was directly compatible to PCR amplification. CONCLUSION: The problem of availability of suitable generalized methods for DNA isolation from various samples including food and environmental has been solved by a nanobiotechnological approach that may prove to be extremely useful in biotechnological applications. © 2012 Society of Chemical Industry 相似文献