胶体金免疫层析法快速检测果蔬中的三唑酮及其代谢物残留

目的 建立胶体金免疫层析法快速检测蔬菜水果中三唑酮及其代谢物农药残留的分析方法。方法 采用胶体金标记三唑酮单克隆抗体, 利用胶体金的可视化及抗体与抗原的特异性结合, 实现对果蔬中三唑酮农药残留的定性和半定量检测。结果 本方法对黄瓜和香蕉中三唑酮及其代谢物的总残留量检出限分别为0.05和0.85 mg/kg, 均低于国家标准食品中三唑酮农药最大残留限量(0.1~1 mg/kg), 该试纸条对其他农药无交叉反应, 重复性良好。结论 该方法具有高灵敏度、高特异性, 可快速准确的检测大批量样品中的三唑酮及其代谢物农药残留, 能够满足应急超标事件的现场检测需求。     

胶体金免疫层析技术测定食品中黄原胶

目的:建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测新方法,用于食品中黄原胶的快速筛查。方法:用黄原胶抗原标准品免疫新西兰大白兔,制备得到高效价的抗黄原胶多克隆抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并将其与抗黄原胶多克隆抗体标记制得金标抗体;在硝酸纤维素膜检测线上,预包被黄原胶标准抗原,质控线上包被羊抗兔IgG,采用竞争法,制成黄原胶胶体金免疫层析检测试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性和稳定性进行了试验。结果:该试纸条检测样品的敏感性为3g/kg。结论:研制出黄原胶胶体金免疫层析试纸条及其检测方法,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,5min可出检测结果,可用于现场大量样品的快速检测。     

呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮单克隆抗体的制备、鉴定与胶体金免疫层析试纸条的研制

目的:制备5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮(AMOZ)单克隆抗体,并建立AMOZ胶体金试纸条检测方法.方法:AMOZ与对醛基苯甲酸反应生成半抗原CP-AMOZ,将CP-AMOZ与BSA、OVA偶联制备完全抗原.免疫小鼠后制备腹水型抗体,ELISA检测抗体效价与其对CP-AMOZ半抑制浓度(IC50)和最低检测限(LOD),并检测抗体的特异性.胶体金与单抗偶联,同时在NC膜上包被完全抗原、兔抗鼠多抗分别作为检测线和质控线,制备免疫层析试纸条,测定试纸条的灵敏度与特异性.结果:成功制备CP-AMOZ-BSA、CP-AMOZ-OVA完全抗原及抗CP-AMOZ的单抗,抗体效价为1∶1.6×105,对CP-AMOZ IC50为0.86μg/L,LOD 0.07 μg/L,与其他硝基呋喃类药物代谢物及其衍生物均无交叉反应.制备的胶体金试纸条灵敏度5 μg/L.结论:成功合成了CP-AMOZ的完全抗原,免疫小鼠后制备了特异性强的单抗,并以此为基础研制出敏感、特异的胶体金快速检测试纸条.     

三唑酮及其代谢物在烟叶中的降解规律

为制定烟叶中三唑酮及代谢产物的农药残留限量,研究了合理使用条件下,三唑酮及其代谢物三唑醇在烟叶中残留降解规律和残留水平。采用气相色谱电子捕获检测器(GC-ECD)建立了同时测定烟叶中三唑酮和代谢产物三唑醇农药残留的检测方法,结果表明:三唑酮在鲜烟叶和烤后烟叶中的最低检出量(LOQ)分别为 0.01、0.05 mg/kg。三唑酮、三唑醇在鲜烟叶和干烟叶样品中添加水平为 0.01~ 5 mg/kg时,平均添加回收率为 79.8%~97.3%, RSD为 1.5%~9.0%,符合农药残留检测方法要求。对 2011-2012年山东、湖南两地三唑酮残留试验的烟叶样品进行了检测。结果表明,三唑酮在自然生长条件下半衰期为 3.8~5.6d,在储存条件下的半衰期分别为 157~315 d。最终残留试验结果表明,施药剂量和采收安全间隔期与烟叶中农药残留量显著相关,末次施药后 7、14、21 d,烤后烟叶中三唑酮及代谢物的残留量分别为 0.33~6.44 mg/kg、0.15~2.77 mg/kg、0.18~2.53 mg/kg。建议三唑酮及代谢产物在烟叶中 MRL为 5mg/kg,安全间隔期(PHI)为 14 d。      

三甲氧苄氨嘧啶胶体金免疫层析检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测食品中三甲氧苄氨嘧啶(TMP)的方法.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗TMP单克隆抗体并冻干于聚苯乙烯微孔中,TMP-OVA和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条.测试结果表明,TMP快速检测试纸条的灵敏度为50 μg/L,检测时间为5min,特异性高,批内和批间重复性良好,与ELISA试剂盒方法和LC-MS/MS方法符合率为100％.使用简单方便,适合现场快速检测TMP.     

T-2毒素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,研制出一种快速检测T-2毒素的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备20 nm胶体金,标记抗T-2毒素多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗兔二抗分别结合于硝酸纤维素膜上,经过试纸条层析条件优化,依次将样本垫、金标结合释放垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条。测试结果表明T-2毒素快速检测试纸条的灵敏度为50μg/L,检测时间为10 min,批内和批间重复性好,保存期为3个月。使用简单方便,非常适合现场快速检测T-2毒素。     

动物组织中呋喃它酮代谢物快速检测试纸条的研制

介绍了检测动物组织中呋喃它酮代谢物的胶体金试纸条的研制方法,主要包括胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装等研究步骤,所研制出的呋喃它酮代谢物快速检测胶体金试纸条对动物组织的最低检测限为1.0μg/kg,检测时间短,试纸条特异性好、假阳性率不高于5%、假阴性率为0,可应用于动物组织中呋喃它酮代谢物的快速检测和现场筛查,具有较高的市场应用前景。     

胶体金免疫层析捕获法检测人血清中肺炎支原体IgM抗体

采用胶体金标记鼠抗人IgMμ链抗体,肺炎支原体P1抗原作包被蛋白,检测肺炎支原体特异性抗体IgM.经对免疫金制备条件进行优化,制备了胶体金免疫层析检测试纸条.将该试纸条与市售试剂盒作对比检测,总符合率为99.17%,表明本方法灵敏度较高、特异性较强,价格低,操作简便快捷,更适合MP感染患者早期临床筛查.     

苯甲酸免疫胶体金快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,制备苯甲酸胶体金免疫层析快速检测试纸条,采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒直径为17nm的胶体金,将苯甲酸金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上制成胶体金结合垫,将包被抗原和二抗羊抗兔分别结合于硝酸纤维膜作为检测线(T线)和质控线(C线),组装成胶体金免疫层析试纸条并进行灵敏度测试.结果显示,胶体金试纸条检测限为100μg/L,可在5～7min内完成测试,与苯酚、甲苯、苯乙酸、苯丙氨酸等药物均无交叉反应,检测结果与酶联免疫吸附法完全一致.该方法具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高等特点,适用于现场快速检测和筛选工作,具有广泛的商业开发应用前景.     

胶体金免疫层析法快速检测动物组织中残留的喹乙醇

研制胶体金免疫层析法试纸条,用于动物源食品中喹乙醇药物残留的快速检测。将已制备纯化过的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在10min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/m L,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。本实验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。     

胶体金免疫层析法快速检测T-2毒素的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测谷物和饲料中T-2毒素的方法.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗T-2毒素单克隆抗体并喷涂于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗鼠二抗分别喷涂于硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装成试纸条并装入检测卡中.测试结果表明,T-2毒素快速检测试纸条的检测限为0.Smg/L,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0.该法使用简单方便,非常适合现场快速检测谷物和饲料中的T-2毒素.     

胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A研究

该研究应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测食品和饲料中赭曲霉毒素A方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记抗赭曲霉毒素A单克隆抗体,标记胶体金抗体喷涂于玻璃纤维上,赭曲霉毒素A偶联抗原OTA-OVA和二抗兔抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维膜上作为检测限和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装成试纸条并装卡。测试结果表明,赭曲霉毒素A快速检测试纸条灵敏度为5 ng/mL,检测时间为10 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。该法简单方便,非常适于现场快速检测赭曲霉毒素A。     

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。     

胶体金免疫层析法测定牛羊肉中掺杂鸡肉

目的建立胶体金免疫层析法快速检测牛羊肉中掺杂鸡肉的方法。方法采用柠檬酸三钠制备胶体金溶液,以真空干燥的方式制备有金标抗体的微孔试剂,将鸡IgY包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的检测线(T线),兔抗羊抗体包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的质控线(C线),向硝酸纤维素膜依次贴上吸水纸和样品垫,切条组装成试纸条。样品经磷酸盐处理,加入至金标抗体的微孔中,用试纸条检测,胶体金分析仪检测T/C线的颜色信号。结果该方法对牛羊肉中掺入鸡肉的检出限为3%,重复性和特异性较好,其他动物组织对其无干扰,检测时间仅需要15 min。结论该方法操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,适用于牛羊肉中掺杂鸡肉的现场快速筛查和检测。     

新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的研制

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。     

新霉素半定量胶体金试纸条的研制

建立了一种快速、简单的检测牛乳中新霉素残留量的胶体金免疫层析法。将不同浓度的新霉素人工合成完 全抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线（T1、T2线）,与待测牛乳样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体- 胶体金标记物,通过两条T1、T2线显色情况使传统新霉素胶体金试纸条由定性检测准确到半定量检测。试纸条对 牛乳样品的半定量检测限分别为200 μg/kg和400 μg/kg,该检测限满足欧盟及国家对新霉素检测的需求,且检测牛 乳样品能够满足现场快速检测的要求,为现场快速检测牛乳中新霉素残留提供了更精确的参考依据。     

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

烟叶中多菌灵胶体金定量试纸条的研制及应用

为了建立烟叶中残留的多菌灵的快速定量检测方法,利用胶体金免疫层析技术并配套胶体金读数仪,确定更适用于现场检测的多菌灵试纸条的产品形式,明确温度对胶体金试纸条定量结果的影响,用恒温孵育器控制检测温度,基于胶体金读数仪绘制标准曲线。结果表明:①研制的定量胶体金试纸条检测限为0.017 mg/kg,检测范围为0.020~2.0 mg/kg,定量范围为0.020~0.50 mg/kg,加标回收率为95.6%~128.9%,批内变异系数为6.2%~11.2%;②与高效液相色谱-串联质谱法的检测结果相比,阴性样品检测结果准确率大于95%,阳性样品的检测结果在定量范围0.020~0.50 mg/kg内线性关系良好;③对于与多菌灵结构相似的药物,试纸条与其无交叉反应,可特异性定量检测烟叶中残留的多菌灵。本研究中研制的多菌灵定量试纸条具有操作简便、检测速度快、准确性高、稳定性好等优点,适用于基层实验室的大批量样品检测及现场快速检测。