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相似文献
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1.
目的:研究鲫鱼卵唾液酸糖肽(Ca-SGPP)对成骨细胞MC3T3-E1骨形成活性及OPG/RANKL基因表达水平的影响。方法:在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的Ca-SGPP,采用MTT法、试剂盒和茜素红染色法检测Ca-SGPP对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响;利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测MC3T3-E1细胞骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨保护素(OPG)及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因m RNA表达水平。结果:Ca-SGPP可显著促进MC3T3-E1细胞增殖及ALP、OCN和COL I的分泌,提高MC3T3-E1细胞矿化能力,上调其BMP-2表达水平及OPG/RANKL的比值,且分子质量大的糖肽效果更佳。结论 :CaSGPP具有促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的能力,其机制可能与OPG/RANKL比值上调有关。  相似文献   

2.
目的:从红虾副产物中提取虾肽,研究其促MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化及矿化的活性。方法:用MTT法检测不同浓度虾肽对MC3T3-E1成骨细胞存活率的影响;诱导成骨细胞分化,在3 d和7 d时,测定其碱性磷酸酶(ALP)活性,在7 d和14 d时,测定其细胞骨钙素(OCN)及Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)含量,21 d时茜素红染色测定细胞诱导培养矿化程度;采用qPCR和Western blot方法检测虾肽对OPG/RANKL/RANK信号通路中骨形成关键基因和蛋白OPG、RANKL以及RUNX2表达的影响。结果:虾肽质量浓度为0.02,0.05,0.1 mg/mL时,显著促进MC3T3-E1细胞的增殖;ALP、OCN及COL-Ⅰ的含量相较于对照组均增加,矿化结节面积显著增大(P <0.05);此外,虾肽上调了ALP、OCN、COL-Ⅰ基因的表达,促进OPG和RUNX2基因及蛋白表达的水平,抑制RANKL基因及蛋白表达的水平。结论:虾肽能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化与矿化,激活OPG/RANKL/RANK信号通路,从而促进成骨细胞的分化及骨形成。  相似文献   

3.
维生素D_3(Vitamin D_3,VD_3)和染料木素(Genistein,Gen)二者均具有抗骨质疏松作用,然而,二者协同作用机制及维生素D_3的抗骨质疏松作用使用剂量有待阐明。本研究报告了维生素D_3和染料木素对人成骨肉瘤细胞MG-63、小鼠巨噬细胞RAW264.7诱导的破骨细胞增殖与分化的影响机制。维生素D_3联合染料木素可显著促进成骨细胞的增殖分化,促进骨保护素(OPG)的表达,抑制核因子κB(NF-κB)受体激活剂(RANKL)的表达,提高OPG和RANKL mRNA表达比值。此外,维生素D_3在6.25~50.00μmol/L剂量范围,可促进破骨细胞的增殖和成熟,而联合染料木素后表现为显著抑制作用。维生素D_3可促进破骨细胞中组织蛋白酶K的表达,联合染料木素处理细胞,显著抑制酒石酸抗性磷酸酶(TRAP)和组织蛋白酶K的表达。试验结果表明,维生素D_3联合染料木素,可显著促进成骨细胞的增殖和分化。维生素D_3表现为浓度依赖的增强破骨细胞增殖和成熟作用,而联合染料木素可显著抑制破骨细胞增殖和成熟,间接起到抗骨质疏松作用。  相似文献   

4.
研究了卵黄高磷蛋白磷酸肽(Phosvitin Phosphopeptide,PPP)及其钙螯合物(PPP-Ca)在成骨细胞(MC3T3-E1)和破骨前体细胞(RAW264.7)共培养体系中对成骨细胞分化的调节作用。对细胞毒性、碱性磷酸酶(AKP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性和TRAP染色进行分析;用RT-PCR技术进一步探究成骨细胞RANKL/OPG通路相关蛋白的mRNA表达情况。结果发现,PPP和PPP-Ca可以使MC3T3-E1体系中的AKP活性分别增加9.5%和12.7%;PPP和PPP-Ca的加入可以使MC3T3-E1体系中OPG基因mRNA的表达量从0.92分别提升至1.25和1.39、使RANKL基因mRNA的表达量从1.00分别提升至1.23和1.45。该研究结果表明,PPP和PPP-Ca可有效促进成骨细胞的分化。实验结果为进一步探索磷酸肽在多细胞模型体系中的作用提供了研究基础,同时为磷酸肽的功能活性开发提供理论依据。  相似文献   

5.
目的研究二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,对细胞中成骨细胞护骨素(OPG)及细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法人骨肉瘤细胞株MG-63细胞培养、传代后分为:二膦酸盐10μmol/L组、二膦酸盐50μmol/L组和阴性对照组3组,保温72 h后,应用RT-PCR和Western blot检测干预后OPG和RANKL mRNA和蛋白水平的表达。结果二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,细胞中OPG mRNA和蛋白水平表达升高,RANKL mRNA及蛋白水平则降低(均P<0.05)。结论二膦酸盐可能通过调节人骨肉瘤细胞株MG-63细胞OPG/RANKL轴的表达,抑制骨肉瘤的溶骨性破坏,对治疗人骨肉瘤有潜在价值。  相似文献   

6.
目的 研究二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,对细胞中成骨细胞护骨素(OPG)及细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 人骨肉瘤细胞株MG-63细胞培养、传代后分为:二膦酸盐10 μmol/L组、二膦酸盐50 μmol/L组和阴性对照组3组,保温72 h后,应用RT-PCR和Western blot检测干预后OPG和RANKL mRNA和蛋白水平的表达.结果 二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,细胞中OPG mRNA和蛋白水平表达升高,RANKLmRNA及蛋白水平则降低(均P<0.05).结论 二膦酸盐可能通过调节人骨肉瘤细胞株MG-63细胞OPG/RANKL轴的表达,抑制骨肉瘤的溶骨性破坏,对治疗人骨肉瘤有潜在价值.  相似文献   

7.
以水产加工下脚料鳕鱼骨为原料,对其进行基本组成分析与组织结构观察。从鳕鱼骨中提取胶原蛋白并酶解制得不同分子量段的胶原肽。探讨不同分子量胶原肽组分对MG-63细胞碱性磷酸酶(ALP)活性及相关因子骨形态发生蛋白(BMP-2)、骨保护素(OPG)与核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)m RNA表达水平的影响。结果表明:鳕鱼骨中蛋白质含量较高(14.5%),Van Gieson染色发现鳕鱼骨中含有大量的胶原蛋白纤维。鳕鱼骨胶原肽能够提高细胞ALP活性,同时显著上调细胞BMP-2 m RNA的表达水平;鳕鱼骨胶原肽可有效提高细胞OPG/RANKL m RNA的相对表达量,以间接对破骨细胞的成熟及活化进行调控。鳕鱼骨可作为一种优良的天然蛋白源,鳕鱼骨胶原肽能够作为一种有效的抗骨质疏松营养强化剂加以开发。  相似文献   

8.
采用低钙鼠粮饲喂Wistar大鼠,造大鼠低钙模型,口服给予模型组大鼠酶解牛骨肽3个月,研究酶解牛骨肽对低钙大鼠促进骨骼生长的作用,测定各实验组大鼠体重指数以及大鼠股骨重量、股骨强度、骨钙含量及血清钙离子含量等多项生理生化指标,同时做体外细胞实验,研究酶解牛骨肽对成骨细胞MC3T3-E1增殖情况的影响。结果表明:酶解牛骨肽对低钙大鼠骨钙含量水平的升高有明显作用(P 0.05),酶解牛骨肽可以在体外促进成骨细胞MC3T3-E1的增长,说明酶解牛骨肽在一定程度上能够促进骨骼生长发育。  相似文献   

9.
目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1 μg/mL)CMC和低浓度(0.1 μg/mL)CMC,利用MTT法检测对MC3T3-E1细胞活力的影响,流式细胞仪检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果:高浓度和低浓度的钙对MC3T3-E1细胞活力均有显著的促进作用,24 h的高钙组的细胞增长率(9.67%)优于低钙组(8.95%);36 h和48 h后低钙组的增长率分别为14.96%和20.33%,明显优于36 h和48 h作用后的高钙组(6.23%和1.73%),两组细胞凋亡率与空白组比较差异较小,且均显著低于对照组(p<0.01)。结论:CMC高钙组和CMC低钙组在一定浓度范围内,能促进MC3T3-E1细胞活力显著增强,并且改善血清饥饿诱导的成骨前体细胞凋亡。  相似文献   

10.
目的:为制备人体高效吸收利用的补钙剂并探究其对MC3T3-E1细胞成骨活性的影响。方法:对牛骨多肽进行钙螯合处理,以钙螯合能力为考察指标,通过响应面方法确定最佳制备条件;利用红外光谱、X射线衍射和原子吸收等方法探究肽钙螯合物的结构特性及其稳定性;通过细胞实验探究牛骨肽钙螯合物对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化活性的影响。结果:制备牛骨肽钙螯合物的最佳条件为肽钙质量比2.97∶1、温度62.54℃、pH 9.06。在该条件下,钙螯合能力达到55.65 μg/mg。光谱结构分析结果表明氨基氮、羟基氧和羧基氧是钙主要螯合位点,二者之间主要通过配位键结合,且肽螯合钙后分子质量增加;此外,牛骨肽钙螯合物稳定性受温度影响较小,但对pH值较敏感。MC3T3-E1细胞实验结果表明肽钙螯合物具有明显促MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化活性的作用。结论:制备的牛骨肽钙螯合物具有潜在的促MC3T3-E1细胞成骨活性功效。  相似文献   

11.
目的:探究秘鲁鱿鱼皮胶原蛋白水解肽增强MC3T3-E1细胞抗骨质疏松的作用。方法:将培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组、氯化镉损伤组和胶原蛋白水解肽干预组;利用MTT法确定氯化镉的半数抑制浓度,建立细胞损伤模型;根据各组细胞增殖率差异,确定最佳胶原蛋白水解肽的添加量;通过细胞周期、凋亡,碱性磷酸酶活性的测定及Alizarin red染色法分析胶原蛋白水解肽在细胞增殖、分化、钙化阶段拮抗氯化镉的抑制作用。结果:与氯化镉损伤组相比,胶原蛋白水解肽干预组细胞活性升高(P0.01);处于G1期的细胞数量减小(P0.05),S期细胞数量增大(P0.05);凋亡率降低(P0.05);9,12,15 d时AKP活性升高(P0.05,P0.01,P0.01)。结论 :摄入一定剂量的氯化镉会抑制MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和钙化。胶原蛋白水解肽在一定程度上可改善此类损伤对MC3T3-E1细胞的影响。  相似文献   

12.
以14种水产动物卵为原料,筛选出具有较高促前成骨MC3T3-E1细胞增殖活性的鲫鱼卵水溶性糖蛋白,采用响应面法优化了鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(Sialoglycoprotein of Carassius auratus eggs,Ca-SGP)的提取工艺,并评价Ca-SGP对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。结果表明,14种水产动物卵中,鲫鱼卵糖蛋白唾液酸含量最高,且对MC3T3-E1细胞增殖率最高,分别为5.76%和145.71%;采用单因素和响应面试验优化得到制备Ca-SGP的最优提取工艺为:NaCl浓度为0.38 mol/L、提取时间为4.2 h、液料比为1:3.88 w/v,在此条件下,Neu5Ac得率的预测值为592 mg/100 g,验证值为588.47 mg/100 g。Ca-SGP对骨形成作用的研究结果表明,Ca-SGP显著提高MC3T3-E1细胞增殖至135.56%,显著提高COL I、OCN和OPN的分泌量,分别提高到32.23、261.46和85.89 ng/mL,显著提高成骨细胞矿化能力至241.67%,说明Ca-SGP具有显著促骨形成作用(P<0.05)。以上研究为寻找安全、有效抗骨质疏松功能因子提供新途径。  相似文献   

13.
鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:从鲫鱼卵中提取唾液酸糖蛋白,研究其对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用,并探究其作用机理。方法:采用切除大鼠双侧卵巢的方法建立骨质疏松症大鼠模型,灌胃鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(400 mg/(kg·d))90 d后,分别检测大鼠尿液骨吸收指标(脱氧吡啶啉、钙、磷)、血清骨吸收指标(抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K)、血清骨生成指标(骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型前胶原羧基端前肽)以及血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)含量。结果:鲫鱼卵唾液酸糖蛋白能显著降低骨质疏松症大鼠尿液脱氧吡啶啉(P<0.01)、钙(P<0.01)、磷(P<0.01)含量和血清抗酒石酸酸性磷酸酶(P<0.01)、组织蛋白酶K(P<0.01)活性,防止大鼠骨吸收;显著降低血清骨源性碱性磷酸酶(P<0.01)活性和骨钙素(P<0.01)、Ⅰ型前胶原羧基端前肽(P<0.01)含量,抑制大鼠高骨转换速率;显著上调OPG(P<0.01)含量,下调RANKL(P<0.01)含量,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞增殖分化,降低骨吸收。结论:鲫鱼卵唾液酸糖蛋白具有改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用,其作用机理可能与下调RANKL/OPG比值有关。  相似文献   

14.
研究证实牛乳铁蛋白具有成骨活性功能,既能刺激成骨细胞增殖,也能诱导破骨细胞凋亡。骨骼的生长发育是一动态平衡的生物过程,是通过成骨细胞诱导的骨生成和破骨细胞诱导的骨吸收所调节的。采用成骨细胞MC3T3-E1细胞与破骨前体细胞RAW264.7细胞1∶1的比例直接接触的共培养方式,研究不同浓度(20、100、500μg/m L)的牛乳铁蛋白对共培养中成骨细胞和破骨细胞活性以及破骨细胞骨吸收功能的影响。首先,通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测共培养上清中的ALP活性,发现低浓度的牛乳铁蛋白能够抑制成骨细胞的ALP活性,而中高浓度的牛乳铁蛋白能够显著地促进成骨细胞的ALP活性。利用TRAP活性检测试剂盒及ELISA检测试剂盒,则发现低中浓度的牛乳铁蛋白能够促进破骨细胞的TRAP活性,而高浓度的牛乳铁蛋白能够显著地抑制破骨细胞的TRAP活性和共培养体系RANKL/OPG的比值。最后,通过骨吸收陷窝实验,证实了中高浓度组的牛乳铁蛋白能够显著地抑制破骨细胞的骨吸收功能。结果表明了高浓度的牛乳铁蛋白在共培养体系中不仅能够促进成骨细胞的活性,并且对破骨细胞具有抑制活性及功能的作用。  相似文献   

15.
鸡蛋黄经脱脂得到蛋黄蛋白质,直接以MC3T3-E1细胞增殖活力为指标,对水解条件进行优化,从而制备蛋黄蛋白质水解产物(egg yolk proteins hydrolysate,EYPH)并对其促MC3T3-E1细胞增殖分化的活性进行研究。结果表明:在对比胰蛋白酶与风味蛋白酶水解过程中,发现单一胰蛋白酶反应得到产物活性最好,胰蛋白酶反应的最佳水解条件为水解时间6 h、水解温度37℃、酶与底物质量比1∶50、p H 8.0。EYPH使MC3T3-E1细胞增殖活力得到提高,为129.89%,细胞周期分析得到S期细胞增加了4.69%,这2个方面证实EYPH对MC3T3-E1细胞的增殖活力有显著的提高。EYPH对MC3T3-E1细胞分化矿化有显著影响,碱性磷酸酶活力提高了9.1%;刺激骨钙素分泌,其含量上升2 mg/mL;形成更多的矿化结节。此外,EYPH还能刺激RUNX2特异性转录因子的基因表达,表达量提高了6.12倍。结果说明EYPH对成骨细胞MC3T3-E1增殖分化有显著的促进作用,因此,EYPH对于抗骨质疏松方面有较好的应用潜力,为开发其功能性食品提供一定的数据参考。  相似文献   

16.
17.
酶法制备的骨胶原蛋白肽为混合肽,通常具有多种潜在的生物活性,但目前缺乏基于促成骨细胞增殖活性的靶向性研究。本实验以酶法制备的牦牛骨胶原蛋白肽为原料,采用高效液相色谱法与纳米液相色谱-串联质谱法分别测定混合肽的分子质量与序列构成,基于与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的CDOCKER半柔性对接,靶向筛选具有潜在促成骨细胞增殖活性的骨胶原蛋白肽,并进行体外细胞增殖培养验证。结果表明,共鉴定得到78 条牦牛骨胶原蛋白肽,主要以低分子质量肽段为主(小于3 000 Da的组分占91.8%),通过与EGFR对接发现,多肽GPAGPQGPRGDKGETGEQ(GP-18,1 736.815 Da)、TPEVDDEALEKFDK(TP-14,1 634.775 Da)、GPAGPQGPRGDKGETGE(GP-17,1 608.757 Da)、GKSGDRGETGPAGPAGPIGPV(GK-21,1 875.951 Da)和GKSGDRGETGPAGPAGPIGPVG(GK-22,1 932.973 Da)具有潜在促成骨细胞增殖活性。小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞培养实验结果表明,3.0 mg/mL GK-22促成骨细胞相对增殖率达106%,显著高于空白组(P<0.05)。本研究可为促成骨细胞增殖活性肽的靶向筛选和工业化制备提供理论参考。  相似文献   

18.
研究珍珠贝外套膜胶原蛋白肽(pearl oyster mantle collagen peptide,POM-CP)及其锌螯合物(zincchelating pearl oyster mantle collagen peptide,POMCP-Zn)对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响。结果表 明:噻唑蓝检测结果显示,与空白对照组相比,POMCP-Zn能够显著促进成骨细胞的增殖,而POM-CP对成骨细胞 的增殖性无显著影响;与空白对照组相比,400 μg/mL的POM-CP和10 μg/mL的POMCP-Zn将成骨细胞的碱性磷酸酶 活性分别提高到1.31 倍和1.48 倍;POMCP-Zn还可以提高成骨细胞分化阶段Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素蛋白的分泌量, 同时促进成骨细胞矿化阶段骨结节的形成。综上所述,与POM-CP相比,POMCP-Zn对成骨细胞MC3T3-E1的增殖 和分化有较强的促进作用,POMCP-Zn有望成为预防骨质疏松症的潜在功能性食品。  相似文献   

19.
目的:优化龟甲蛋白提取工艺,筛选龟甲促成骨细胞(MC3T3-E1)增殖活性组分。方法:以蛋白含量及对MC3T3-E1细胞增殖率为指标筛选龟甲蛋白提取方法;以料液比、提取温度、时间为自变量,龟甲蛋白含量为因变量,进行单因素提取研究,结合响应面试验设计,获得提取龟甲蛋白最佳工艺;通过超滤技术将龟甲蛋白按分子量分为5个不同组分:总提组分(组分1),Mw>10 kDa组分(组分2),Mw:3~10 kDa组分(组分3),Mw:1~3 kDa组分(组分4),Mw<1 kDa组分(组分5),CCK8法测定不同浓度龟甲蛋白(12.5、25、50、100、200 μg/mL)及其不同组分对MC3T3-E1细胞增殖率的影响。结果:磁力搅拌方法得到的龟甲蛋白含量最高,且活性最佳,龟甲蛋白最佳提取条件为料液比1:13(g/mL)、提取温度30℃、提取3 h,此条件下测得龟甲蛋白含量为15.16%;龟甲蛋白不同组分均能促进MC3T3-E1前成骨样细胞增殖,并呈浓度依赖性,在浓度为200 μg/mL时,组分1~5对细胞的增殖率分别为20.58%、25.30%、30.24%、37.89%、38.15%,分子量小于1 kDa的组分促MC3T3-E1细胞增殖活性最佳。结论:本研究为龟甲蛋白的制备工艺提供参考,并证明龟甲蛋白及其不同组分均具有较好的促成骨细胞增殖活性,其中分子量小于1 kDa组分对MC3T3-E1细胞增殖的效果最佳。  相似文献   

20.
目的:研究乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)对幼年大鼠骨健康的作用。方法:将40 只4 周龄雄性SD大鼠随机分为对照组(0 mg/kg bw/d)、LF低剂量组(100 mg/kg bw/d)、LF中剂量组(500 mg/kg bw/d)和LF高剂量组(1000 mg/kg bw/d),连续喂养30 d后,测定幼年大鼠体重和脏体比变化、股骨骨密度(Bone mineral density,BMD)和骨微观结构变化、血清及股骨骨髓组织中抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRACP)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、组织蛋白酶K(Cathepsin,CTSK)、核因子κB受体激活因子配体(Receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(Osteocalcin,OPG)水平。结果:灌胃LF 30 d后,与对照组比较,LF剂量组幼年大鼠体重、脏体比增长趋势相近,差异不显著(P>0.05),LF中、高剂量组骨小梁数量(Trabecular bone number,Tb.N)、骨小梁厚度(Trabecular bone thickness,Tb.Th)、血清及股骨骨髓组织中OPG和OPG/RANKL水平显著增加(P<0.05),骨小梁分离度(Trabecular bone space,Tb.Sp)、TRACP、MMP-9、CTSK和RANKL显著降低(P<0.05)。结论:补充LF能够减少幼年大鼠骨吸收,增加骨形成和骨量,调节骨代谢平衡,促进骨健康。  相似文献   

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