磷酸化香菇多糖制备工艺的研究

研究制备磷酸化香菇多糖的工艺条件.以修饰后香菇多糖的磷酸根接枝量、黏度为考察指标,通过单因素和正交实验,考察磷酸化试剂、温度、时间、pH 值时修饰后香菇多糖磷酸根接枝量、黏度的影响.结果确定最佳磷酸化工艺条件为:8%混合磷酸化试剂、温度 80℃、时间 5 h、pH值8.0,所得磷酸化香菇多糖衍生物的磷酸根接枝量为 7.77%,黏度测定表明香菇多糖经磷酸化后黏度几乎没有变化.     

磷酸化香菇多糖的制备及其部分理化性质的研究

研究了制备磷酸化香菇多糖的工艺条件及其部分理化性质.通过单因素实验,考察磷酸化试剂、温度、时间、pH值对修饰后香菇多糖磷酸根接枝量、黏度的影响,确定最佳磷酸化工艺条件为:5%三聚磷酸钠(STPP)和2%三偏磷酸钠(STMP)混合液作为磷酸化试剂,温度90℃,时间5h,pH值9.O,所得磷酸化香菇多糖衍生物的磷酸根接枝量为6.826%.同时对修饰前后香菇多糖的理化性质进行分析,红外光谱表明磷酸基团已被接枝上且多糖性质无较大变化.     

磷酸化香菇多糖的工艺优化

研究了香菇多糖的磷酸化优化工艺条件,并对修饰后的磷酸根接枝量和粘度进行测定.采用正交实验,考察磷酸化试剂用量、温度、时间、pH对修饰后香菇多糖磷酸根接枝量和粘度的影响.结果表明,最佳工艺条件为:8%混合磷酸化试剂(5%三聚磷酸钠和2%三偏磷酸钠的混合试剂),温度80℃,时间5h,pH8.0.在该反应条件下,磷酸化香菇多糖衍生物的磷酸根接枝量为7.77%,粘度测定表明,香菇多糖经磷酸化后,粘度几乎没有变化.     

香菇多糖磷酸化修饰工艺条件的研究

研究了制备磷酸化香菇多糖的工艺条件。通过单因素实验,考察磷酸化试剂、温度、时间、pH值对修饰后香菇多糖磷酸根接枝量、粘度的影响,确定最佳磷酸化工艺条件为:质量分数分别为5%三聚磷酸钠(STPP)和2%三偏磷酸钠(STMP)混合液作为磷酸化试剂,温度90℃,时间5h,pH 9.0,所得磷酸化香菇多糖衍生物的磷酸根接枝量为6.826%。红外光谱分析结果证实,修饰后的香菇多糖含有磷酸酯基团。粘度测定表明,香菇多糖经磷酸化修饰后的粘度基本没有变化。     

乳酸乳球菌胞外多糖提取纯化工艺研究

乳酸菌胞外多糖分离纯化的步骤一般可由蛋白质的分离、多糖的提取纯化和粗多糖的纯度鉴定三个部分组成。本文对分离蛋白以及乙醇沉淀多糖阶段中各个条件分别进行单因素优化实验,正交试验得到乳酸乳球菌胞外多糖提取纯化的最佳工艺条件为60%三氯乙酸处理后14000×g离心40 min可有效除去发酵液中多数蛋白质,用3倍体积100%乙醇处理12 h可有效沉淀多糖。得到纯度高、含杂量低粗多糖,有利于进行进一步结构鉴定和分析,为乳酸乳球菌胞外多糖的进一步研究和应用提供了理论依据。     

保加利亚乳杆菌G6高产胞外多糖影响因素研究

研究保加利亚乳杆菌G6高产胞外多糖的影响因素。通过改变其营养基质和发酵条件,采用单因素试验和正交试验,确定出保加利亚乳杆菌G6高产胞外多糖的最佳工艺条件。结果表明:葡萄糖、蛋白胨和磷酸氢二钾为保加利亚乳杆菌G6高产胞外多糖的最适碳源、氮源和磷酸盐,当其质量浓度分别为30,10,3.0 g/L,而初始pH值为5.5,发酵温度为34℃,发酵时间36 h时,该菌株胞外多糖合成量为425.7 mg/L,比优化前提高了36.57%。验证实验结果表明,此工艺条件具有合理性和稳定性,并可为高产胞外多糖乳酸菌的开发和应用提供理论依据。     

乳酸乳球菌富硒及其硒多糖抗氧化活性研究

对乳酸乳球菌富硒工艺进行优化以及对其最优条件下提取的硒多糖抗氧化活性研究,结果表明:接种量、培养时间、亚硒酸钠浓度是影响乳酸乳球菌富硒量的主要因素;当接种量8%,培养时间24h,亚硒酸钠浓度14μg/mL,温度37℃,pH6.6时,乳酸乳球菌的有机硒转化率为59.87%。当最优条件下提取的硒多糖浓度达2mg/mL时,硒多糖对羟自由基和超氧阴离子的清除率为78%和59%,较同等条件下多糖的清除率分别提高了19%和18%。     

产胞外多糖乳球菌的优化培养

以苯酚硫酸法测定乳酸乳球菌乳酸亚种WH-C1在不同培养基中的胞外多糖合成量,试验以WHEY作为基础培养基,比较了添加不同碳源、氮源对EPS合成的影响,并采用正交实验L9（3^4）对碳源、氮源的添加量及培养基初始pH进行了优化,确定最佳组合为：葡萄糖添加量15g／L,胰蛋白胨添加量5g／L,培养基初始pH值为6．5。研究了不同培养温度和接种量条件下该菌株的EPS合成曲线,结果表明温度对发酵液中EPS总积累量的影响较大,通过本研究确定了乳酸乳球菌乳酸亚种WH-C1最佳培养条件为：培养温度25℃,接种量为2％（体积分数）,培养时间32h,EPs合成量为325．8mg／L。     

乳酸菌胞外多糖的纯化及对小鼠血清和肝组织抗氧化性的影响

本实验对乳酸乳球菌乳亚种胞外多糖的纯化工艺及其抗氧化活性进行研究。纯化结果表明,选择DA201-C树脂,调节胞外多糖的pH值为3.5,在45℃条件下,树脂用量为2%(V/V),静态吸附20h后糖保留率为81.56%,蛋白脱除率为72.09%,脱色率为81.69%。通过动物实验,检测小鼠血清和肝组织中的过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力可知,灌胃胞外多糖组的小鼠与对照组小鼠相比,抗氧化能力显著性提高。     

雪莲果低聚果糖磷酸化修饰研究

采用混合磷酸盐法制备磷酸化雪莲果低聚果糖,以磷酸根含量为考察指标,通过正交实验设计对工艺参数进行优化,探究了反应温度、反应液pH、磷酸化试剂总用量、反应时间4个因素对磷酸化雪莲果低聚果糖磷酸根含量的影响。得到雪莲果低聚果糖磷酸化修饰的最佳工艺条件为:反应温度80℃、反应时间5 h、反应液pH9.0、磷酸化试剂总用量m_(低聚果糖):m_(磷酸化试剂)为1:10,此条件下磷酸化雪莲果低聚果糖磷酸根的接枝量为0.7243 mg/g。红外光谱表明,磷酸化修饰前后低聚果糖的基本结构无较大变化,而磷酸化低聚果糖在1262 cm~(-1)处和1057 cm~(-1)处分别出现磷酸酯=P(O)O~-和C-O-P 2个基团的特征吸收峰。     

乳酸乳球菌乳酸亚种高产胆盐水解酶发酵条件的优化研究

本文利用从藏灵菇中筛选的产胆盐水解酶的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactissubsp.lactis)研究提高酶活力的环境因素。针对主要影响胆盐水解酶合成的四个因素,采用四因素三水平L9(34)正交试验确定了高产胆盐水解酶优化发酵条件:葡萄糖添加量为3%、大豆蛋白胨添加量为2%、发酵温度为37℃、接种量为2%。在优化条件下,胆盐水解酶活力是优化前的11.84倍。     

一株Kluyveromyces lactis酵母胞内乳糖酶性质的研究

源自乳酸克鲁维酵母的β-半乳糖苷酶为胞内酶,其具有乳糖水解能力和半乳糖苷的转移作用。本实验运用单因素试验方法研究乳酸克鲁维酵母乳糖酶的性质。结果表明该酶在pH值为6.0~7.0和37℃~48℃间比较稳定,酶作用最适pH值在6.5,最适反应温度为43℃,Mn2+、Mg2+等对酶有明显的激活作用,而Zn2+、Cu2+等对酶活有抑制作用。该酶以ONPG底物的米氏常数为4.186mmol/L。     

Biocontrol of Listeria monocytogenes in a model cultured milk (lben) by in situ bacteriocin production from Lactococcus lactis ssp. lactis

Bacteriocin‐producing (Bac⁺) Lactococcus lactis ssp. lactis CCMM/IAV/BK1 isolated from traditional lben was used in the preparation of lben from pasteurized milk to assess its potential inhibitory activity against Listeria monocytogenes ATCC 7644. Production of bacteriocin (arbitrary units, AU) in MRS broth fortified with yeast extract (MRSY) in a fermentor under controlled and uncontrolled pH conditions was also investigated. This Bac⁺ strain yielded about 35 times more bacteriocin when the pH was maintained constant at 6.5 than under varying pH conditions. To test the effect of in situ bacteriocin production against L. monocytogenes, lben was made from cow's milk artificially contaminated with approximately 10⁷ cfu/mL and fermented with a mixed mesophilic starter culture consisting of the lactococcal Bac⁺ organism and Lc. lactis ssp. lactis biovar diacetylactis 66, a diacetyl‐producing strain, in a ratio of 1 : 1. Numbers of L. monocytogenes were monitored during fermentation and storage of lben at refrigeration temperature (c. 7°C) for up to 6 days. Performances of the Bac⁺ starter were compared to those of an isogenic Bac^? derivative strain obtained from the Bac⁺ starter by curing with ethidium bromide. The results showed that the amount of L. monocytogenes decreased to below the detectable level in a 1‐mL sample within 24 h of storage at 7°C in lben fermented with the Bac⁺ starter culture. On the contrary, L. monocytogenes survived for 6 days of storage at 7°C in lben made with the Bac^? starter. The Bac⁺ wild strain of the starter studied could be adequately used to produce lben or similar indigenous fermented milks of improved hygienic quality on an industrial scale. Alternatively, it could be used as an adjunct in minimally processed products or in products obtained from raw milk to add a safety factor.     

乳酸乳球菌胞外多糖的分离及其体外抗氧化活性研究

本实验对乳酸乳球菌胞外多糖(EPS)的离心除菌、提取、粗胞外多糖中蛋白质的去除进行研究,同时探究胞外多糖的体外抗氧化活性。结果表明：6000r/min 离心15min;温度15℃;旋转蒸发浓缩到原体积的1/4;醇沉最佳条件为３倍糖溶液体积的90% 乙醇沉淀12h;选择TCA 沉淀蛋白,TCA 的最佳浓度为10%;胞外多糖有显著的体外抗氧化性。     

具有溶栓活性的重组乳酸乳球菌的构建

利用PCR方法从纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.natto)基因组DNA中扩增纳豆激酶原基因,构建了纳豆激酶原基因的表达载体pFY002,转化Lactococcus lactis NZ9000,得到活性表达纳豆激酶的重组菌Lactococcus lactis NZ9000/pFY002。利用纤维蛋白平板法检测其溶栓活性,并对诱导剂乳链菌肽(NisinA)的浓度、温度、诱导时间对重组菌产酶的影响进行探究。     

动物双歧杆菌乳亚种HCS04-002发酵条件优化

为实现动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）HCS04-002的高活菌数培养,获得其生长的最适发酵条件,对发酵工艺和发酵培养基分别进行优化。以菌泥收率为考察指标,通过单因素及正交试验对培养温度、接种量和初始pH值等发酵工艺参数进行了优化;以发酵液活菌数为响应值,通过单因素试验和Box-Behnken试验优化发酵培养基。结果表明,动物双歧杆菌乳亚种HCS04-002最佳发酵条件为：培养温度39 ℃、接种量3%、初始pH值为7.2;最佳发酵培养基组分为：酵母蛋白胨24 g/L、酵母浸出物30 g/L、葡萄糖19 g/L、乳糖11 g/L。在此优化条件下,菌株HCS04-002菌悬液活菌数达2.73×109 CFU/mL。     

基于基因水平研究乳酸乳球菌的有氧呼吸代谢

本研究旨在对能和不能有氧呼吸代谢的乳酸乳球菌呼吸链基因同源性和细胞色素氧化酶活力进行分析,为确定乳酸乳球菌的有氧呼吸必要条件奠定基础。首先,分别测定已筛选到的菌株KLDS4.0325和KLDS4.1102在发酵和有氧呼吸代谢时的生长曲线;其次,提取KLDS4.1102的基因组DNA,随后利用PCR扩增其呼吸链编码基因并进行DNA测序;最后,从Gen Bank数据库下载KLDS4.0325的呼吸链编码基因序列,利用DNAMAN软件比较这两株菌呼吸链编码基因的同源性,并测定这两株菌的细胞色素氧化酶活性。结果表明在有氧呼吸条件下KLDS4.0325的生物量和p H都显著增大,而KLDS4.1102在两种条件下呈现一致的生长趋势,呼吸链编码基因的同源性分析显示KLDS4.1102具备完整的呼吸链,而酶活测定结果却显示KLDS4.1102无细胞色素氧化酶活性,这表明KLDS4.1102不能进行有氧呼吸代谢不是由于编码基因缺陷造成的,可能是某些编码基因不能正常表达,导致其细胞色素氧化酶不能正常发挥作用。     

Optimisation of bacteriocin production of Lactococcus lactis subsp. lactis MA23, a strain isolated from Boza

Lactococcus lactis subsp. lactis MA23 produces a bacteriocin (6400 AU/mL) that inhibits the growth of many Gram‐positive bacteria but is not active against Gram‐negative bacteria. This bacteriocin inhibits growth of lactococcal strains that are producing nisin, lacticin or lactococcin suggesting it to be different from these bacteriocins. The nutritional requirements and optimal growth conditions for MA23 bacteriocin production were studied with fed‐batch fermentations. The optimal pH, carbon source and nitrogen source for bacteriocin production were pH 6.5, sucrose (0.5%) and yeast extract (1%), respectively.     

镉胁迫下泡菜乳酸乳球菌的形态变化

通过扫描电镜和透射电镜分别观察不同质量浓度水平的Cd2+对泡菜乳酸乳球菌（Lactococcus lactis subsp.lactis）细胞的影响,扫描电镜结果显示：Cd2+质量浓度在0、10 mg/L时,泡菜乳酸乳球菌呈椭圆形、表面光滑、菌体生长繁殖旺盛,随着Cd2+质量浓度的增加菌体细胞表面产生白色颗粒状物质、菌体细胞存活数量大幅下降（OD600 nm值由1.336下降到0.515）。当添加200 mg/L Cd2+时,几乎没有见到明显的菌体、显示有少量棱形晶状物。透射电镜结果显示：当Cd2+质量浓度为0～50 mg/L时泡菜乳酸乳球菌结构完整、细胞内容物分布均、菌体生长较为正常,当菌体暴露于100、200 mg/L Cd2+时菌体细胞出现异常现象,如细胞破裂、内容物从薄膜穿孔中释放、质壁分离等。两类电镜结果均表明：在低质量浓度Cd2+（≤50 mg/L）胁迫下,对泡菜乳酸乳球菌的生长几乎不产生影响,添加Cd2+质量浓度上升到100、200 mg/L时泡菜乳酸乳球菌正常生长受到抑制。