耐有机溶剂脂肪酶菌株的筛选及其耐受特性初探

以筛选获得的新疆酿酒葡萄内生菌为出发菌株,首先采用含有橄榄油乳化剂及罗丹明B的平板初筛,再分别以体积分数1%正庚烷和1%甲苯为筛选压力进行复筛,从中得到1株耐有机溶剂脂肪酶菌株M-CY1,经形态和分子生物学技术鉴定为Penicillium asturianum。该菌遗传稳定性良好,菌种的酶活性与菌丝的生长量呈正相关,多种有机溶剂对该菌产脂肪酶活具有促进作用,其中二甲苯作用最为明显,酶活为4.99 U/mL,相对酶活达143.76%。     

天山一号冰川沉积层低温脂肪酶产生菌的筛选及初步鉴定

从新疆天山一号冰川西支尾部的底部沉积层中分离筛选出高产低温脂肪酶菌株,进行初步鉴定及产酶探讨。使用罗丹明-B、吐温80、维多利亚蓝选择培养基以及三丁酸甘油酯酶活检测板,结合棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)比色法,筛选出产低温脂肪酶酶活较高的菌株,研究其生长特性及常规生理生化实验,并根据16S rRNA基因序列初步确定其所属菌属。共分离筛选到5株产低温脂肪酶酶活较高的菌株,经初步鉴定其中4株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),1株为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。该芽孢杆菌属产脂肪酶的能力略高于其余菌株。分离得到的5株菌均属于耐冷菌,有较好的耐盐性,能在低温条件下发酵产酶,其中4株在36h左右达到产酶高峰,为开发冰川环境下丰富的低温酶资源奠定了基础。     

脂肪酶产生菌的紫外诱变和筛选

以提高生物催化制备生物柴油的效率为目的,采用紫外诱变的方法对产脂肪酶的细菌菌株进行诱变和筛选,得到的诱变株命名为U12,脂肪酶酶活(60.25 U/mL)比原始相对出发菌株酶活提高220%。经五次传代实验平均酶活为58.63U/mL,相对诱变原菌降低2.69%。     

海洋真菌产酶能力的研究

从大连丽娇湾和金石滩采集获得海水、海藻等样品,采用PDA培养基分离海洋真菌,并对产酶真菌进行筛选及鉴定,及其产酶能力进行初步研究。结果显示,共筛选得到真菌32株,产酶菌株18株,其中有1株同时产4种酶,3株同时产3种酶,8株同时产2种酶。初步鉴定18株产酶菌分布于4个属,其中优势属为曲霉属（Aspergillus sp.）和青霉属（Penicillium sp.）,各6株,均占总筛选产酶菌株数的33.33%,其次为酵母属（Saccharomyces sp.）,共4株,占总筛选产酶菌株数的22.22%。11株产植酸酶、10株产纤维素酶、6株产淀粉酶、5株产蛋白酶、3株产脂肪酶。     

罗汉果内生菌及其周边土壤中产α-淀粉酶菌株的筛选

对罗汉果内生菌及其种植区土壤中的微生物进行分离,筛选淀粉酶产生菌,并研究其发酵条件,结果得到15株内生菌和8株微生物,从中筛选到2株产淀粉酶高的菌株2-1(土壤)和R-4(根部内生菌)。经初步鉴定,菌株2-1为球菌,菌株R-4为芽孢杆菌,均为革兰氏阳性菌。研究显示,菌株2-1产酶条件为1.0%氯化铵、0.5%酵母粉、1.0%可溶性淀粉、0.4%氯化钠,发酵温度为40℃,发酵3 d,其产酶量为127.65 U/m L;R-4菌株产酶条件为0.5%酵母粉、1.0%氯化铵、0.05%氯化钠、2.0%可溶性淀粉,发酵温度为40℃,发酵3 d,其产酶量为197.21 U/m L。     

白酒黄水中纤维素降解菌的分离鉴定及产酶活性研究

为拓展纤维素降解菌资源,以羧甲基纤维素钠（CMC-Na）为唯一碳源作初筛培养基,从浓香型白酒发酵副产物黄水中分离得到18株具有产纤维素酶能力的菌株进行纯培养。形态学、生理生化和系统发育鉴定结果显示,菌株XH01、XH04、XH05、XH18为Bacillus cereus,菌株XH34为Bacillus circulans,菌株SW01、SW05为Bacillus megaterium,菌株SW02为Bacillus endophyticus,菌株SW03、SW04为Bacillus simplex,菌株SW09、SW13为Bacillus bataviensis。菌株ZL08为Penicillium camemberti,菌株ZL13为Aspergillus fumigatus,菌株ZL04和ZL25为Penicillium chrysogenum,菌株ZL15和ZL17为Alternaria tenuissima。利用二硝基水杨酸法对菌株发酵液纤维素酶活进行研究,结果表明,菌株SW02的产酶活性较高,其羧甲基纤维素酶活为153.36 U/mL,β-葡萄糖苷酶活为126.00 U/mL,微晶纤维素酶活为17.64 U/mL,滤纸酶活为30.48 U/mL。     

产纤维素酶细菌的激光诱变及产酶条件的优化

以产纤维素酶枯草芽孢杆菌HAS-8为出发菌株,利用氦—氖激光进行诱变育种。通过透明圈筛选和酶活力测定,筛选得到1株细菌HAS-8D,其纤维素酶活力提高68.2%。遗传稳定性试验证明它具有良好的遗传稳定性。经过正交试验优化,最终得到菌株HAS-8D的最佳发酵条件为麸皮2.0%、玉米粉1.0%,培养时间24h,起始pH为7.0,发酵后活菌数达到1.1×109CFU/mL,酶活力为684.35 U/mL。     

大曲中产阿魏酸酯酶菌株的筛选及其特性分析

目的 从浓香型白酒大曲中分离筛选出一株产阿魏酸酯酶的菌株。方法 将大曲样品中筛选出的11株菌进行划线纯化培养,进一步挑选出产阿魏酸酯酶酶活较强的菌株并鉴定,分析其安全性及生物学特性,最后对发酵产酶条件进行优化。结果 得到一株产阿魏酸酯酶酶活较强的菌株为L-7,经鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。经毒力基因检测、有害代谢产物实验结果均为阴性;生物学特性研究实验结果为:在16 h时生物量达到最大,耐最低pH为4,最高为11, NaCl质量分数为8%的条件下仍能生长,耐受最高的乙醇体积分数为13%;具有较好的安全性且有耐乙醇、耐盐、广泛的pH耐受性等优良性能。通过发酵产酶条件优化,该菌株产阿魏酸酯酶最佳发酵条件为:接种量为6%体积分数、培养温度32℃、转速160r/min、培养时间96 h;此时该菌株产阿魏酸酯酶的酶活为(44.68±0.05) U/L,较优化前提高了57.05%。结论 本研究结果可为产阿魏酸酯酶的菌株筛选提供参考,且筛选所得屎肠球菌在提高浓香型白酒及其他发酵食品中阿魏酸含量及风味具有应用潜力。     

产褐藻胶裂解酶菌株筛选与高产酶菌株的ARTP诱变选育

该研究采用平板酶解圈法从南海海域海藻、动物及沉积物样品中筛选产褐藻胶裂解酶细菌,对筛选菌株进行分子生物学鉴定,并利用常压室温等离子体（ARTP）诱变技术选育高产褐藻胶裂解酶菌株。结果表明,共分离筛选得到酶活较高的细菌14株,16S rDNA比对分析结果表明,它们隶属于3个门、5个纲、7个目、8个科、9个属,其中有5株菌（占35.7%）可能代表着新的分类单元。以高产褐藻胶裂解酶海藻类芽孢杆菌（Paenibacillus algicola）HB172198T作为原始菌株,利用ARTP诱变技术选育获得2株褐藻胶裂解酶活力明显提高的突变株（编号分别为30-19、80-6）,其酶活力分别比原始菌株提高了32.6%和21.6%,且连续6次传代培养诱变菌株的产酶遗传性状稳定。     

不同微生物菌株产脂肪酶发酵条件优化

从石油污染土壤中分离、筛选出4株产脂肪酶高的微生物菌株,采用正交试验对4株菌产脂肪酶发酵条件进行了初步优化。结果表明,碳源种类和油含量对各种菌株产酶的影响效果较大;其中D4菌株产酶活最高,达到51.667U/mL;而A6菌株产酶活最低,为23.334U/mL。为进一步工业化生产脂肪酶奠定理论基础。     

胆固醇氧化酶产生菌TS406的复合诱变育种

利用实验室筛选得到的胆固醇氧化酶产生菌青霉TS406进行高产菌株的诱变选育,通过紫外线联合硫酸二乙酯(浓度3%)和紫外线联合亚硝基胍(1.2mg/mL)两次连续复合诱变获得了一株高产型突变株,其产酶活力从546 U/L提高到了1267 U/L,酶活提高了 273%,并利用SPSS软件分析证明了突变株的产酶稳定性.     

耐有机溶剂蛋白酶产生菌MSP05的筛选、鉴定及酶学性质研究

目的:从燕尾港受污染海域筛选耐有机溶剂蛋白酶产生菌,确定该菌的分类地位,并对其所产溶剂稳定性蛋白酶的酶学性质进行研究。方法:通过在培养基中添加20%(V/V)甲苯作为筛选压力,筛选耐有机溶剂极端微生物,通过产蛋白酶筛选培养基筛选产蛋白酶的菌株,并利用摇瓶发酵进行复筛,最后对产酶菌株进行鉴定并对粗酶的性质进行测定。结果:筛选获得耐有机溶剂蛋白酶产生菌MSP05,结合16S rDNA序列分析、形态学观察和生理生化性质将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该酶的最适反应温度和pH分别为50℃和10.0,Cu2+、Mn2+对酶有激活作用,Mg2+、Fe3+和Ba2+对酶具有抑制作用。在50%乙醇中,25℃、140 r/min振荡72 h后仍能保持50%以上酶活力。结论:分离获得耐有机溶剂蛋白酶产生菌解淀粉芽孢杆菌菌株MSP05,对有机溶剂具有较好的耐受性,具有潜在的工业应用价值。     

罗汉果内生菌中产环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选及产酶条件优化

从罗汉果内生菌中筛选高产环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）的菌株进行菌种鉴定,并对其产酶条件进行优化。利用CGTase快速筛选法从罗汉果内生菌中筛选获得一株高产CGTase的菌株,编号为ND-6,经形态学和分子生物学鉴定其为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。通过单因素和正交试验优化得到其产CGTase条件为1.0%环糊精作碳源,1.0%蛋白胨作氮源,初始pH值为8.0,装液量70 mL/250 mL,发酵温度40 ℃。在此优化条件下,菌株所产CGTase酶活达到9 753 U/mL,是优化前的1.43倍。     

异淀粉酶产生菌的筛选

从淀粉厂附近的土壤中分离产脱枝酶的菌株,通过筛选得到了多株菌株。对其中一类产脱枝酶的菌落为黄色的菌株进行了研究,从中筛选到了一株产异淀粉酶酶活相对较高的菌株D15,依据菌株特性初步鉴定该菌株属于黄杆菌属。对菌株D15的液体发酵条件进行了初步优化,其发酵64 h时产酶活力最大,达到1.62 U/mL。     

酱香型大曲中具产酶功能霉菌的分离筛选

目的:从酱香型大曲中筛选功能菌。方法:从贵州省某酒厂的酱香大曲中分离到19株霉菌,测定了各菌株的液化酶、糖化酶和蛋白酶活力。结果:筛选到两株同时产液化酶、糖化酶和蛋白酶三种酶活都相对较高的菌株,对两株菌进行鉴定,并构建系统进化树,经鉴定两株菌分别为谢瓦散囊菌FBKL3.0004和阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013。结论:筛选的两株菌能够应用于白酒酿造。     

高NK活性纳豆菌的诱变选育及产酶条件的研究

采用物理化学诱变方法,对纳豆菌进行复合诱变,以期筛选出纳豆激酶(NK)活力高的优良菌株。以实验室分离、筛选的纳豆菌NK-8作为出发菌,通过紫外线和氯化锂对其进行复合诱变,经过菌种的初筛和复筛,得到了酶活较出发菌提高2.2倍的菌株JN-14,并对初始菌株与诱变菌株进行了一系列的比较。实验进一步研究了该菌株产纳豆激酶的发酵过程,比较了不同的营养源与生长条件对菌株产酶的影响,优化、确定了菌株产纳豆激酶的产酶条件。     

水解淀粉乳酸菌的筛选

为得到具有淀粉水解能力的乳酸菌,本文从绍兴米酒、黄酒米浆水、黄酒前酵液、黄酒后酵液、黄酒酵母及黄酒酒糟中分离得到80株细菌;经过淀粉圈显色实验的初步筛选,得到12株具有水解淀粉能力的菌株;之后利用不同比例淀粉的发酵培养基对初筛得到的菌株进行培养,并测定发酵液中淀粉酶的酶活,最终筛选得到6株具有较强淀粉水解能力的乳酸菌。经过16S rDNA测序分析,鉴定分离筛选所得的6株菌。将其中性能最优的菌株AR300进行生长曲线以及对应时期的酶活测定,分析菌株生长与其产淀粉酶能力之间的关联,进一步说明乳酸菌水解淀粉情况。     

产纤溶酶米曲霉的筛选及诱变育种

利用自己设计的筛选方法，从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6，其产纤溶酶酶活为25U／mL。SA-6经过紫外线、^60Co和亚硝基胍诱变，筛选得到突变株NA-25，其产酶酶活为63U／mL，是出发菌株SA-6的2．52倍。突变株NA-25的发酵性状改变，其产纤溶酶的高峰比出发菌株迟了约10h。     

产耐盐蛋白酶深海细菌的分离鉴定

本文采用高盐富集、复筛发酵及耐盐稳定性实验的方式,从深海海泥中筛选产耐盐蛋白酶的深海海洋细菌。从深海海洋微生物中共筛选出25株耐盐菌,在这25株菌株中有14株在酪蛋白平板上能产生较大的水解圈;通过发酵复筛及耐盐稳定性实验,筛选得到一株酶活性能高且耐盐稳定性好的菌株,将其编号为SWJSS3;对菌株SWJSS3进行16SrDNA的鉴定并初步研究了盐浓度对产酶情况和酶稳定性的影响。菌株SWJSS3在0~10%(m/V)的盐浓度条件下均能生长,在0~10%的盐浓度下,菌液OD600的吸光值范围为0.08-1.98;通过发酵复筛其所产生的蛋白酶酶活在盐浓度为1%时达最高,为233.56±2.16U/mL;所产蛋白酶在终浓度为15%(m/V)的NaCl溶液下,混匀4℃保存1h,残余酶活为初始酶活的40.70±2.06%,继续存放一段时间到第9h,酶活基本保持不变;通过16SrDNA鉴定其为铜绿假单胞菌,与PseudomonasaeruginosaRP2816SrDNA的相似性达到99%以上。     

中高温大曲中高产蛋白酶菌株的选育

从宋河大曲中共分离得到39株产蛋白酶芽孢菌株,采用透明圈法和摇瓶发酵法筛选出1株高产蛋白酶菌株MSPN-11,酶活达114.8U/m L。以该菌株为出发菌种,采用紫外诱变的育种方法,以致死率和蛋白酶活力为指标选育高产蛋白酶菌株。研究表明:紫外照射时间160s、照射距离50cm~55cm的剂量处理,菌株致死率达80%以上,且90%诱变菌株的R/r值在3.0以上,得到1株高产蛋白酶菌株MSPR8,酶活提高了26.38%。