利用Illumina MiSeq测序分析手筑茯砖茶发酵及干燥阶段真菌群落多样性

为了解手筑茯砖茶发酵与干燥过程中真菌种类变化,以发酵(0、4、8、12 d)及干燥阶段(17、22 d)的手筑茯砖茶样品为研究对象,应用Illumina MiSeq技术进行扩增测序,为手筑茯砖茶发酵及干燥阶段样品中真菌多样性研究奠定基础。结果表明:手筑茯砖茶的发酵初期真菌群落结构存在较大差异,但随着发酵及干燥的进行真菌多样性整体呈下降趋势。测序及数据清理后共得到990 522个有效的Tags,聚类后有186个可操作分类单元,注释到5个门、14个纲、29个目、47个科、65个属。其中0 d的真菌多样性最高,且相对丰度最高的为曲霉属(Aspergillus),达40.59%。其次为德巴利酵母属(Debaryomyces)、散囊菌属(Eurotium)和青霉属(Penicillium)等。而在4、8、12 d及17、22 d茯砖茶样品中,散囊菌属是绝对优势菌属,第4天时其相对丰度已达到97.27%,在这5组样品中其平均相对丰度高达98.81%。本研究采用Illumina MiSeq测序分析更准确、全面地反映手筑茯砖茶发酵与干燥过程中真菌群落结构和多样性动态变化,为手筑茯砖茶工艺的改进及机理的研究提供了新思路。     

人工接种发酵银杏砖茶的研究

为了探索发酵法制作银杏茯砖茶的工艺以及在发酵过程中银杏茯砖茶主要功效成分的变化,通过单因素和正交试验,人工接种冠突散囊菌纯菌种发酵剂进行银杏茯砖茶发酵试验。结果表明,银杏茯砖茶发酵的最佳条件为:银杏茶与黑毛茶比例8:2,含水量35%、二次气蒸后接种、接种量为0.2%;在最佳工艺条件下,随着发酵天数的变化,银杏茯砖茶中银杏酸含量大幅下降,黄酮含量呈先上升后下降的趋势。     

茯砖茶对凝固型酸奶品质的影响

在复原乳中添加质量分数为1%~5%的茯砖茶,接种由嗜热链球菌ys14和德氏乳杆菌保加利亚亚种1.1480按1∶1组成的酸奶发酵剂,在42℃下发酵6h制得茯砖茶酸奶,并考察茯砖茶对酸奶的感官品质、理化特性和乳酸菌数的影响。结果表明:茯砖茶和酸奶良好的融合,并具有茯砖茶独特的风味。另外,在发酵过程中茯砖茶的添加没有抑制乳酸菌代谢产酸。与对照酸奶样品相比茯砖茶酸奶的粘度有不同程度增加,而其脱水收缩值有所下降。茯砖茶酸奶中嗜热链球菌ys14菌数较对照组有显著(p<0.05)增加,但对德氏乳杆菌保加利亚亚种1.1480无明显作用。     

天然发酵茯砖茶微生物菌群及抗菌特性研究

对天然发酵茯砖茶的微生物菌群以及抗菌活性进行研究。微生物分离和鉴定结果表明：曲霉、青霉和散囊菌是天然发酵茯砖茶的主要微生物,其中散囊菌是真菌发酵过程中的优势菌种。发酵茶水提物的抑菌实验显示,茯砖茶的浸提物对一些食品致病菌有抑制作用,尤其是对一些芽孢形成菌如蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、产气荚膜梭菌和生孢梭菌具有抑制作用,抑菌能力随发酵时间的延长而增强。提示在茶叶真菌发酵过程中,能够产生抑制食品致病菌和腐败菌的代谢物质。     

基于微生物组扩增子ITS的茯砖茶发花特征真菌菌群演替规律分析

茯砖茶是一种微生物参与发酵的黑茶。菌花香是茯砖茶独特的香气品质,其成因可能与发花过程中的真菌演替有关。为揭示茯砖茶发花特征真菌菌群演替规律,以薮北种茶树为原料制成黑茶与白茶,之后同时、同地发花分别制成茯砖茶与白茶砖。采用微生物组扩增子ITS分析发花过程中真菌演替规律。结果表明:1)不同茶类在发花过程中的特征真菌丰度的变化规律不同。2)渥堆改变了茯砖茶的菌群结构及微生物生长环境,导致茯砖茶与其它茶类的发花真菌菌群演替有差异。3)茯砖茶发花特征真菌菌群演替规律:茯砖茶发花前期,由渥堆影响丰度较高的黑曲霉、局限曲霉、萨氏曲霉、岐皱青霉、西兰花青霉、汉逊德巴利酵母等在发花6 d出现丰度峰。发花第9天散囊菌属、卡利比克迈耶氏酵母、海洋嗜杀酵母等真菌出现丰度峰,黑曲霉、汉逊德巴利酵母、局限曲霉维持丰度;发花12 d假灰绿曲霉出现丰度峰, 黑曲霉维持丰度。第22天发花结束,散囊菌属最终成为优势菌种。     

冠突散囊菌接种发酵茯砖茶的初步研究

探讨了冠突散囊菌液体发酵培养条件,并将纯培养冠突散囊菌菌悬液接种于黑茶进行茯砖茶发酵,与市售茯砖茶茶叶浸出液接种于黑茶发酵茯砖茶进行对比试验。实验表明,冠突散囊菌的最佳培养基配方为：NaCl 32g、NH4NO33g、蔗糖20g、MgSO40.5g、K2HPO41g、水1000mL;最佳培养条件为：pH5.8、温度30℃、转速180r/min。试验分别采用冠突散囊菌纯菌液及市售茯砖茶茶叶浸出液分别接种发酵茯砖茶,接种量为5mL、10mL、15mL。发酵中、末期用血球计数板对2组茯砖茶中冠突散囊菌孢子进行计数。经检测,在发酵结束时,接种茶叶浸出液的孢子数只有2.94×104—7.28×104个/g干茶,而接冠突散囊菌菌液的孢子数可达0.313×107—1.71×107个/g干茶。结果表明,使用纯菌液接种发酵茯砖茶可明显提高＂金花＂产量,可为改良传统工艺提供科学依据。     

茯砖茶中霉菌含量和散囊菌鉴定及利弊分析

在17份茯砖茶样品中,霉菌最高含量是1．7X10~6CFU/g,平均含量是4．2×10~4CFU/g地,散囊菌是优势霉菌,共分离到7种散囊菌:冠突散囊菌、间型散囊菌、匍匐散囊菌、谢瓦散囊菌、阿姆斯特丹散囊菌、赤散囊菌和一种散囊菌。对这些菌的分类特点及在茯砖茶中的利弊关系作了讨论。茯砖茶是我国特有的一种大量生产的边销茶,在我国的“茶文化”历史上还是一种较新的品种,创制才一百多年,原由湖南黑毛茶在陕西径阳筑制成砖茶,于本世纪40年代在四川试制成功,50年代在湖南开始压制生产。品质历来均以生“黄霉菌”愈多为佳、许多学者对其做过鉴定。近年来的教科书上多以灰绿曲霉群表示。仓道平对两份茯砖茶的优势灰绿曲霉菌株作了鉴定．认为是谢瓦曲霉(?)齐祖同对各地分离的茯砖茶中的5个优势菌株进行了鉴定,认为是冠突散囊菌(无性型．针刺曲霉)。散囊菌在茯砖茶中的存在及作用很少有研究报道。本研究对17份茯砖茶做霉菌含量检验,对分离的散囊菌属的种类作了讨论,以期达到在这方面研究抛砖引玉的作用。     

γ辐照对茯砖茶品质的影响研究

用不同剂量的γ辐照对茯砖茶进行处理后考察其微生物数量、理化性质及感官品质的变化。结果表明,γ辐照对茯砖茶中的微生物有较好的杀灭效果,4kGy的辐照处理能杀灭茯砖茶中97%以上的霉菌。辐照过的茯砖茶可浸出氟和氨基酸含量变化不大,可溶性糖含量和水浸出物含量提高,茶多酚、氨基酸、咖啡碱含量降低,总体感官品质有所改善。     

冠突散囊菌胞外多糖提取工艺研究

冠突散囊菌是茯砖茶生产过程中形成茯砖茶独特品质的优势菌。从茯砖茶中分离纯化出冠突散囊菌,进行液体深层发酵,并对其产生的胞外多糖提取条件进行了正交试验。试验结果表明,本次试验中最优的多糖提取条件为:冠突散囊菌液体发酵液浓缩至原体积的1/4,乙醇浓度95%,乙醇沉淀时间10h。     

冠突散囊菌胞外多糖含量测定及提取工艺研究

冠突散囊菌是茯砖茶生产过程中形成茯砖茶独特品质的优势菌。从茯砖茶中分离纯化出冠突散囊菌，进行液体深层发酵，并对其产生的胞外多糖提取条件进行了正交试验。试验结果表明，最优的多糖提取条件为：冠突散囊菌液体发酵液浓缩至原体积的1／4，乙醇浓度95％，乙醇沉淀时间10h。     

Fungal spoilage of bottled mineral water

The occurrence of filamentous fungi together with bacteriological parameters was assessed in 126 samples of still bottled mineral water of eight different commercial brands in Argentina. In spoiled samples with visible mycelium growth, the most frequently isolated fungal species were Penicillium citrinum, P. glabrum, other Penicillium species, Cladosporium cladosporioides and Alternaria alternata. In unspoiled samples, the genera found were Penicillium, Cladosporium, Rhizopus, Aspergillus and Phoma. Only three of the 126 samples failed to meet the required microbiological standards because they were found to contain faecal streptococci.     

茯砖茶优势菌株分离鉴定及发酵低级绿茶分析

对湖南白沙溪茯砖茶中的优势菌株进行分离、纯化,并通过形态学分析和ITS序列比对进行鉴定.以云南大叶种低级绿茶为原料进行纯菌发酵,分析发酵液主要成分含量的变化.结果表明:从湖南白沙溪茯砖茶中分离得到的4株优势菌株,其中J1被鉴定为谢瓦曲霉(Aspergillus chevalieri);J2、J3和J4均被鉴定为冠突曲霉...     

宋河浓香型白酒酒醅纯培养霉菌群落的组成及功能酶筛选

为探究宋河浓香型白酒酒醅纯培养霉菌群落组成,检测纯培养菌株与酒醅发酵过程相关的功能酶酶活特征,为白酒相关功能菌株发掘与利用提供依据,本实验采用纯培养方法,对不同发酵时间、不同位置酒醅样品中的霉菌进行分离;根据形态特征去重复后进行18S rRNA基因克隆测序,初步判断其分类地位;采用点接法进行酒醅发酵相关5种功能酶筛选。结果表明,宋河浓香型白酒酒醅中蕴含丰富霉菌类群,共获得纯培养霉菌63株,形态去重复后共计15株,归属于：草本枝孢（Cladosporium herbarum）、黑曲霉（Aspergillus niger）、沃特曼篮状菌（Talaromyces wortmannii）、嗜松篮状菌（Talaromyces pinophilus）、杂色曲霉（Aspergillus versicolor）、米曲菌（Aspergillus oryzae）、毛栓菌（Trametes hirsuta）、桔青霉（Penicillium citrinum）、菲律宾青霉（Penicillium freii）、雪白丝衣霉（Byssochlamys nivea）及两个潜在新分类单元;霉菌的纯培养检出率在宋河浓香型白酒酒醅发酵3~15 d较高,之后随发酵时间增加逐渐降低;酒醅中的纯培养霉菌菌株具有丰富的功能酶酶活特性,淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、酯化酶的酶活筛选率分别为：100%、93.3%、33.3%、73.3%、46.7%,为后续进一步研究菌株的功能及开发利用奠定基础。     

TOXIGENIC FUNGI ISOLATED FROM LATE-SEASON PECANS

Of 1978 fungal colonies isolated on malt-salt agar from twenty 5-kg samples of pecans harvested late in the season, 39% were Cladosporium, 21% were Penicillium, 9% were Alternaria or Epicoccum, 8% Pestalotia or Monochaeta, 4% Trichothecium, 4% Aspergillus niger, and less than 2% were Fusarium, Phomopsis, Rhizopus, Aspergillus, and miscellaneous genera. Forty-four of 260 representative isolates were persistently toxic to day-old cockerels. Toxigenic Penicillium spp. included P. citrinum, P. terrestre, P. cyclopium, P. funiculosum, P. roquefortii, P. purpurogenum, P. rubrum, and P. rugulosum. Toxigenic isolates of other genera included Aspergillus fiavus, A. cervinus, Alternaria alternata, Trichothecium roseum, Pestalotia sp., and Fusarium spp. Additional key words are Carya illinoensis, mycotoxins.     

稻谷霉菌的分离鉴定及其对稻谷品质的影响研究

以湖南常德仓储稻谷为研究对象,进行微生物实验及品质检测,并利用ITS序列分析技术,对稻谷中主要霉菌进行鉴定。结果表明：通过分子生物学方法对菌种进行鉴定,经过三次取样,在稻谷中共分离出13种不同霉菌分别为：Rhizopodiformis isolate HX-1、Aspergillus oryzae isolate NL5、Lichtheimia ramosa strain AUMC 7961、Aspergillus niger isolate SZ8M-14、Aspergillus fumigatus strain JXL-108Y-1、Aspergillus flavus isolate L-4932013、Rhizomucor pusillus strain CNM-CM 5124、Aspergillus candidus strain HDN15-152、Penicillium citrinum strain NSF4、Aspergillus cristatus、Penicillium islandicum culture collection MUCL 14074、Aspergillus cristatus strain 33YH-WZ-18、Rhizomucor pusillus strain AUMC 7966。随着稻谷霉菌的增长,稻谷的出糙率和整精米率均下降,与第一次取样相比,最后一次取样的5个点位稻谷出糙率分别下降了0.71%、1.69%、2.51%、2.94%、1.80%,整精米率分别下降了0.49%、6.13%、8.72%、7.56%、8.68%,脂肪酸值上升,5个点位稻谷脂肪酸值分别增加7.44%、14.10%、0.13%、25.31%、22.19%,说明稻谷霉菌对其品质的劣变具有积极作用。     

黑茶优势菌对绿茶浸提液发酵过程多酚类化合物的影响

利用从普洱茶中分离出的黑曲霉、根霉和从茯砖茶中分离出的冠突散囊菌接种云南大叶种晒青毛茶茶汤,进行单一菌株发酵,对发酵过程茶多酚类化合物的含量变化进行分析。结果表明：随着发酵时间的延长,茶多酚含量显著降低,黄酮类化合物总量在黑曲霉、冠突散囊菌作用下分别减少72%、31.76%,在根霉作用下增加了94.92%;儿茶素各组分的含量变化较大,其中表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯均呈现显著的下降趋势,而儿茶素、没食子酸在不同菌株作用下表现出不同的变化规律;茶黄素在黑曲霉、根霉作用下先增加后减少,冠突散囊菌则相反;茶红素总体呈下降趋向,茶褐素在根霉、冠突散囊菌作用下显著增加。     

CONTAMINATION OF GRAINS BY MYCOTOXIN-PRODUCING MOLDS AND MYCOTOXINS AND CONTROL BY GAMMA IRRADIATION

Ninety random grain samples were collected and analyzed for mycotoxins, and the effect of gamma irradiation on the production of mycotoxins in grains was studied. Aspergillus, Penicillium, Mucor, Rhizopus, Fusarium, Alternaria, Scopulariopsis and Cladosporium were the most common fungal genera isolated from grains. Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus candidus, Aspergillus ochraceus, Penicillium citrinum, Penicillium expansum, Penicillium citreonigrum, Penicillium purpurogenum, Penicillium griseofulvum and Penicillium verrucosumwere the most common Aspergillus and Penicillium species in grains. Out of 120 Aspergillus and Penicillium isolates, 80 were mycotoxin producers. Analysis of grains revealed the occurrence of aflatoxin B₁ ochratoxin A, cycolopiazonic acid and citrinin. Of the 90 samples, 67 were positive for one or more mycotoxin. Irradiation of grains at dose of 2.0 and 4.0 kGy decreased significantly the total fungal counts compared with unirradiated controls. After 100 days of storage at room temperature, the unirradiated grains were contaminated with high concentrations of mycotoxins as compared with irradiated 4.0‐kGy samples. Mycotoxin production in grains decreased with increasing irradiation doses and was not detected at 6.0 kGy over 100 days of storage.     

加饭酒大罐发酵过程中真菌群落的动力学研究

采用分离培养法和基于核糖体RNA基因间隔序列的RISA图谱分析技术,研究了绍兴加饭黄酒大罐发酵过程中醪液内真菌群落的动力学变化及所含真菌群落情况。研究结果显示,发酵醪液中共涉及9属13种真菌。它们分别是犁头霉属(Absidiasp.),根毛霉属(Rhizomucor variabilis),曲霉属(Aspergillus oryzae,As-pergillus niger,Aspergillussydowii,Emericellanidulans),青霉属(Penicilliumcitrinum),伊萨酵母属(Issatch-enkia orientalis),毕赤氏酵母属(Pichia anomala,Pichia burtonii),酵母属(Saccharomyces cerevisia),红酵母属(Rhodotorula mucilaginosa),念珠菌属(Clavisporalusitaniae)。其中犁头霉、米曲霉属和异常毕赤氏酵母在整个发酵过程中均出现,既是发酵投料时的原始菌群,也是发酵醪液中的主要菌群。酿酒酵母和黏质红酵母在发酵前期含量较少,在中后期数量逐渐增多,并成为发酵醪液中的优势菌群。