芝麻香型白酒高温大曲产脂肪酶菌株的筛选与鉴定

芝麻香型白酒是我国传统白酒的创新香型,以独特的优雅芝麻香味而闻名,主体香微量成分是在醇、醛、酸、酯多种框架成分含量极其比例关系达到一定基础上再辅以一定量的吡嗪类、呋喃类、酚类等杂环化合物及含硫化合物而形成的复合香,其中产脂肪酶微生物是形成特殊风味物质的关键。研究采用纯培养技术,对山东扳倒井高温大曲不同发酵阶段的大曲样品进行产脂肪酶的微生物菌种的筛选与鉴定。结果表明,采用改进的罗丹明平板法筛选得到15株产脂肪酶菌株,通过活力测定得到6株产脂肪酶活性较高的菌株,对其进行了形态学和分子生物学的鉴定。该研究为今后产脂肪酶功能基因的筛选提供了出发菌株,为芝麻香型白酒香气成分的解析奠定了理论基础。     

抗铜绿假单胞菌南极微生物的筛选、鉴定及其抑菌谱研究

该研究采用稀释涂布平板法从南极团结湖沉积物中分离、纯化南极微生物,采用双层平板法和琼脂扩散法从中筛选铜绿假单胞菌的拮抗菌,通过形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析对筛选菌株进行菌种鉴定,并测定其抑菌谱。结果表明,共分离纯化出64株南极微生物,8株对铜绿假单胞菌具有抑制作用,其中菌株NO.TJ31的抑制效果最好,抑菌圈直径达（22.3±0.7） mm,经鉴定,其为弗氏甲基杆菌（Methylobacterium frigidaeris）,菌株NO.TJ31对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、副溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯氏菌都具有一定的抑制作用,具有较广的抑菌谱。     

冬枣果酒酿造酵母的分离筛选研究

对冬枣表皮和自然发酵的冬枣汁中的野生酵母菌进行了筛选。经过菌种富集培养和多次平板稀释分离培养、划线分离纯化培养得到88株菌,采用杜氏管发酵法,CO2失重比较法等从中筛选出一株能耐受12%vol酒精和25°Bx糖度,发酵性能优良的酵母菌株命名为TN9#,经初步鉴定TN9#菌株属于酵母属的酿酒酵母,可作为冬枣酒发酵专用菌种或冬枣果酒专用菌种选育的出发菌株。     

拮抗丁香假单胞菌海洋微生物的筛选与鉴定

该研究采用平板涂布法和平板划线法从印度洋沉积物中分离纯化海洋微生物，首先采用滤纸片法对丁香假单胞菌拮抗菌株进行初筛，然后采用牛津杯法进行复筛，并通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定，最后研究其抑菌谱。结果表明，从印度洋沉积物中共分离纯化出115株微生物，经过初筛得到33株丁香假单胞菌拮抗菌株，再经过复筛后，筛选出一株对丁香假单胞菌抑菌效果最好的菌株，编号为NO.4.1.3-1，其抑菌圈直径达（12.63±0.06） mm。该菌被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）；除屎肠球菌外，该菌对8株致病菌均有抑制作用，且对肺炎克雷伯氏菌、金黄葡萄球菌的抑菌作用较好，具有较广的抑菌谱。     

窖泥中高产愈创木酚类功能菌的筛选与鉴定

试验以黄鹤楼酒浓香型窖泥为材料,采用传统微生物分离方法即稀释涂布平板法对样品进行涂布,然后平板划线纯化、镜检,单菌发酵利用GC-MS筛选出高产愈创木酚类物质的功能菌株,然后利用分子生物学技术对菌种进行鉴定,最后进行菌种的耐受性分析。试验结果为:筛选出2株高产愈创木酚类物质的功能菌B-1、B-3,经鉴定分别为Bacillus amyloliquefaciens、Delftia sp. X-a12,总产量分别为3 632. 33和14 527. 31μg/L。耐受性分析结果为菌株B-1、B-3均耐4%vol酒精度、pH 4. 5、15%糖度。     

利用优势微生物抑制烟叶霉变的研究

试验研究了烟叶优势微生物对烟叶霉变的抑制作用。利用从烟叶中分离、纯化、培养出的优势微生物菌种对烟叶进行了抑霉试验。结果表明:从烤烟(C₃F)中分离、筛选出5株优势微生物(M1、M2、M3、M4、M5)对培养基、烟丝和烟叶中霉菌的生长繁殖均有不同程度的抑制作用,以M1菌株的抑霉作用最为显著。试验还对M1菌株的生理生化特性进行了分析鉴定。这一研究结果为利用生物技术抑制烟叶霉变开辟了新途径。      

沪酿3．042米曲霉的纯化复壮

本文报告了酱油生产的主要菌种沪酿3．042米曲霉的纯化复 的方法,并对复的新茵株,退化菌株,原始菌株的酶活力,孢子数,生长速度等进行了比较,结果表明,经纯化复壮筛选出的菌株其上述三项指标接近甚至超过原始菌株。     

普洱茶发酵产茶多糖菌株的筛选与鉴定

以不同阶段的普洱茶发酵样为实验材料进行真菌的分离纯化,将分离纯化出的优势真菌在理想条件下和自然状态下分别进行茶叶接种发酵,筛选出产茶多糖的优势菌。结果表明,在普洱渥堆发酵中共分离纯化出22株菌株,其中5株菌株在渥堆发酵的不同阶段频繁检出,可用于接种发酵实验。在接种发酵中,茶多糖均有显著增加(p0.05)。其中PEZJ-1菌株提高茶多糖含量最为显著,在理想条件下和自然状态下的接种发酵中茶多糖含量分别达到23.57%和27.85%。通过菌落形态、分生孢子显微特征、18S r DNA序列,对PEZJ-1进行鉴定,确定该菌株为Aspergillus niger(Gen Bank登录号为JX863374),属于曲霉属。在普洱茶渥堆发酵中接种外源微生物能显著提高茶多糖含量,Aspergillus niger能大幅度提高茶多糖含量,为茶多糖的开发应用提供了微生物菌种。     

庆阳豆豉优势菌株的分离鉴定

为了确定庆阳豆豉的主要作用微生物,获得优势发酵菌株,以甘肃庆阳7个县区农户所制的发酵豆豉为材料,采用不同培养基分离纯化,通过平板透明圈法初筛,发酵液蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶活性测定,对传统豆豉发酵微生物进行了分离筛选,最后对优势菌株进行生理生化鉴定及16S rDNA分子生物学鉴定。共分离出22株细菌菌株,初筛获得10株均可分解蛋白质、淀粉和纤维素能力的菌株,其中QY2b蛋白酶和纤维素酶活性最高,分别达到了25.37 U/mL和6.015 U/mL。通过对QY2b的形态观察及生理生化试验,结合16S rDNA鉴定手段,确定该优势发酵菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

扳倒井白酒酿造菌种资源库的建设及应用

采用传统可培养技术和非培养分析技术解析白酒酿造微生物群落多样性,建立白酒酿造微生物产生物酶和风味物质筛选评价模型,建立白酒酿造微生物抗逆性筛选评价模型,建立现代化企业微生物菌种资源库--扳倒井白酒酿造菌种资源库,实现白酒酿造功能微生物的安全保藏和高效利用。通过功能微生物对大曲培育过程和白酒酿造过程的调控,促进了白酒生产质量的提高。     

张弓老酒大曲中耐高温酵母菌的分离鉴定及发酵条件优化

为筛选出耐高温的酵母菌,本实验利用传统微生物学分离培养方法,从张弓老酒中高温大曲中共初筛分离出100株酵母菌,进行复筛得到一株能在45 ℃下生长的酵母菌,编号为ZG-3,通过形态学特征观察并结合26S rDNA序列分析确定菌株ZG-3为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)。用常规方法对其耐高温和耐乙醇性以及乙醇发酵性能进行测试。研究表明菌株ZG-3的最适生长温度为37 ℃,最高生长温度为45 ℃,乙醇耐受性可达12%,在40 ℃条件下发酵72 h,产酒精4.7% vol。对菌株ZG-3发酵条件进行响应面优化,在最佳发酵下条件,即接种量12%、发酵温度40 ℃、pH为5、葡萄糖浓度140 g/L,发酵72 h,酒精度为5.2% vol。由此可见ZG-3是一株很有应用开发潜力的耐高温耐乙醇的酵母菌。     

明胶废水中耐钙菌株的筛选鉴定及培养条件优化

从明胶加工废水样品中筛选对Ca2+具有抗性的微生物菌株,结合形态特征、生理生化试验和分子生物学技术对其进行鉴定,并利用单因素试验及响应面法优化其培养条件,以期为高钙污染水体的微生物修复提供菌株资源和应用技术参考。结果表明,当Ca2+含量达到50 mg/mL时,从四个样品中筛选出1株抗钙性能较好的菌株,命名为N3-1,经鉴定其为尼阿布芽孢杆菌（Bacillus niabensis）。菌株N3-1生长的最佳培养条件为：初始Ca2+含量1.40 mg/L、培养温度37 ℃、培养基初始pH值8.3,培养时间21 h。在此优化条件下,菌悬液OD600 nm值为0.768。     

Implementation of a rapid microbial screening procedure for biotransformation activities

A rapid and efficient microbial screening procedure was developed utilizing a 24-well plate format in conjunction with an automated liquid handling system and an HPLC. For the evaluation of this miniaturized and automated screening system, we selected the bioreduction of 6-bromo-beta-tetralone to 6-bromo-beta-tetralol. This procedure employed both yeast and rhodococci libraries, representing a culture collection comprised of several hundred strains, from which to screen for desirable bioconversion activity. Most of these strains had demonstrated bioreducing activity during previous screens to insure a "hit rate" as high as possible. The cultivation of microbes in the plate format was facile, time saving, and efficient compared to the standard method of screening utilizing larger volumes, such as test tubes or shake flasks. This improved method of screening for bioconversion activity, employing pre-selected microbial libraries based on microtiter plates and a fully roboticized analytical system, proved to rapidly yield valuable leads which compared advantageously with a more classical approach. A total of 192 yeast strains and 48 rhodococci strains were screened using this procedure. Analytical data revealed that 78% of the strains tested bioconverted the tetralone to the desired alcohol.     

鲜牛奶中耐药性细菌的分离与鉴定

目的:分离鉴定鲜牛奶中耐药性细菌的分布。方法:利用含有四环素(16μg/mL)、环丙沙星(4μg/mL)或庆大霉素(16μg/mL)的Luria-Bertani平板,分离样品中的耐药性细菌;采用K-B纸片法对分离菌株的耐药性进行确认;利用血平板测定分离菌株的溶血性;利用16S rRNA方法对分离菌株进行鉴定。结果:对30份采自河北张家口地区新鲜无菌牛奶样品的平板筛选结果显示,具有耐受1种以上抗菌素细菌的样品为23份(76.67%),具有耐受2种以上抗菌素细菌的样品为7份(23.33%),具有耐受3种以上抗菌素细菌的样品为1份(3.33%);共分离得到耐受四环素菌株37株、耐受环丙沙星8株、耐受庆大霉素菌株7株;随机挑选6株(每种抗菌素耐受细菌选取2株)进行16S rRNA鉴定,结果为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)1株、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)2株、琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)1株、阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)1株和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)1株;6株细菌中α溶血3株,β溶血1株,γ溶血2株;纸片法验证结果显示,只有1株分离细菌对庆大霉素敏感。结论:鲜牛奶样品中普遍存在多种耐药性细菌,抗菌素平板可以用于初步分析牛奶样品的耐药性细菌。     

免疫磁珠法检测食品中的沙门菌及分离菌株的耐药性

为检测沙门菌在本市食品中的污染和耐药情况,采集各类食品样品303件,经增菌后通过特异的免疫磁珠（IMS）吸附并接种XLD平板分离沙门菌.分离的菌株按年度分成2组,分别以改良K-B法测试对28种抗生素的耐药性.在303件样品中检出87件阳性,总阳性率28.71%.分离到的112株沙门菌以德比、肠炎血清型占优势.肉类制品的阳性率40.20%（82/204）明显高于其它食品,共分离出107株沙门菌（107/112,95.54%）.菌株耐药率在2年中有显著改变的抗生素有环丙沙星、复方新诺明、妥布霉素、二甲胺四环素、氯霉素和链霉素.耐10种以上抗生素的多重耐药株有12株（12/112,10.71%）,有4株头孢哌酮耐药株.IMS用于食品中沙门菌的分离效果较好.结果显示耐环丙沙星和多重耐药菌株的增多说明加强食源性沙门菌耐药监测的重要性。     

ε-聚赖氨酸高产菌株的选育

依据传统诱变理论和白色链霉菌生物合成ε 聚赖氨酸的特点 ,确立了以枯草芽孢杆菌为敏感菌株 ,抗性突变株筛选和抑菌圈法相结合的初筛方法。在优化诱变条件的基础上 ,以白色链霉菌为出发菌株 ,经紫外线与硫酸二乙酯诱变 ,选育出一株遗传性状稳定 ,遗传标记为AECr+Glyr的ε 聚赖氨酸生产菌株 ,其产量可达 0 79g/L。     

A survey of the occurrence and properties of methicillin‐resistant Staphylococcus aureus and methicillin‐resistant Staphylococcus intermedius in water buffalo milk and dairy products in Turkey

Antimicrobial resistance, β‐lactamase activity and mecA gene of Staphylococcus aureus and Staphylococcus intermedius isolated from raw water buffalo milk and dairy products in Turkey were determined. All strains showed resistance to at least one antibiotic but none was resistant to vancomycin. Of the 97 S. aureus and 35 S. intermedius strains, 9 (9.2%) and 2 (5.7%) were resistant to oxacillin and harboured mecA gene. β‐lactamase activity of 13.4% and 5.7% of S. aureus and S. intermedius strains was positive, respectively. Overall, 2.5% and 0.55% of the samples were contaminated with methicillin‐resistant S. aureus and S. intermedius, respectively.     

抗食品腐败真菌的乳酸菌筛选、复配及混合发酵工艺优化

应用化学防腐剂控制食品中腐败微生物,防腐剂残留对人体具有一定的潜在性危害。本文筛选抗食品腐败真菌的乳酸菌,并对其进行复配及混合发酵以提高其发酵液抗真菌活性。通过24孔板双层琼脂法及分级抑菌浓度法从多株乳酸菌和丙酸杆菌中筛选抗真菌较强的菌株并确定混合菌最优组合。通过Plackett-Burman试验,最陡爬坡试验,对其发酵工艺进行优化,用96孔板酶标仪法测其发酵上清液的抗真菌活性。结果表明:最优混合菌组合为植物乳杆菌L9和费氏丙酸杆菌D5;发酵培养基优化配方:葡萄糖55 g/L,碳酸钙6.7 g/L,酵母浸粉14.8 g/L,磷酸氢二钾 0.25 g/L,硫酸锰 0.1 g/L,乙酸钠 5.0 g/L,柠檬酸铵 2.0 g/L,接种比例为5:1（D5:L9）,发酵温度为37 ℃。对筛选出的L9和D5在优化后的发酵培养基进行混合发酵验证,其发酵液抗真菌活性可高达47.07 AU。     

一株假单胞菌的分离鉴定及其产絮凝剂絮凝特性的研究

目的:获得高效廉价的微生物絮凝剂。方法:利用常规筛选技术从宜州龙江河沿岸排污口污泥中分离筛选菌株,菌种鉴定是经形态观察、理化特性分析以及分子水平16S rDNA系统进化分析进行的;按照常规方法考察了絮凝剂在高岭土、活性炭及酵母悬浮液中的絮凝性能和影响絮凝性能的因素。结果:获得一株产絮凝剂的菌株L2019-2,该絮凝活性菌株鉴定为维罗纳假单胞菌(Pseudomonas veronii)。其产生的生物高分子絮凝剂在无机悬浮液和有机悬浮液中均具有絮凝活性。在高岭土悬浮液中,pH为5.0、温度为30 ℃、助凝剂为Fe3+时,絮凝剂的絮凝活性较高,絮凝率达98.30%。经化学组成分析,该絮凝剂为酸性糖蛋白。结论:L2019-2所产絮凝剂具有很好的絮凝性能,可为研究微生物絮凝剂提供良好的菌种资源,在污水处理中更具有很好的应用潜力。     

2015年分离自中国大陆食品的1 070株沙门菌耐药性分析

目的 了解我国2015年食源性沙门菌的耐药状况及mcr-1基因在硫酸粘菌素(conlistin,CT)耐药菌株中的分布情况。方法 采用微量肉汤稀释法测定1 070株食源性沙门菌对10类16种抗生素的药物敏感性,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测196株CT耐药菌株中是否存在mcr-1基因。结果 71.9%(769/1 070)的沙门菌对受试的16种抗生素呈现不同程度的耐药性,其中萘啶酸(NAL)、四环素(TET)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林/舒巴坦(SAM)4种抗生素的耐药率较高,均在40%以上,未见碳青霉烯类耐药菌株,47.5%(508/1 070)的沙门菌同时耐受3类或3类以上抗生素,表现为多重耐药,同时耐受抗生素种类最高为9类。共存在141种耐药谱,优势耐药谱型为NAL、AMP-SAM-NAL-CT和TET。196株CT耐药沙门菌检出1株携带mcr-1基因且超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性的菌株,该菌株为伦敦血清型,是所有测试菌株中唯一1株九重耐药株。部分省份沙门菌耐药率较高。生禽肉和生畜肉来源沙门菌耐药率较高,分别为80.6%(349/433)和73.5%(283/385)。结论 我国2015年食源性沙门菌整体耐药水平较高,且多重耐药情况严重,生禽畜肉是耐药沙门菌的主要来源,我国食源性沙门菌中存在携带mcr-1基因的严重耐药菌株,应引起关注。