鸭梨多酚氧化酶的特性及抑制剂研究

以邻苯二酚为底物，采用分光光度法在420nm处测定鸭梨多酚氧化酶（PPO）的活性，研究了不同底物、温度、pH值和底物浓度对其活性的影响，并建立了酶促褐变反应动力学方程，探讨了柠檬酸、EDTA、亚硫酸氢钠和抗坏血酸四种抑制剂对鸭梨酶促褐变的抑制效果。结果表明，鸭梨多酚氧化酶的最适底物为邻苯二酚，最适温度为30℃，最适pH为6．6；酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动力学，以邻苯二酚为底物的动力学参数Km=0．333mol／L，Vmax=0．089U／min。相应的动力学方程为v=0．089[S]／（0．333＋[S]；四种物质对该酶均表现出不同的抑制作用，抑制效果为：抗坏血酸〉EDTA〉柠檬酸〉亚硫酸氢钠。     

重组葡萄糖脱氢酶酶学性质研究

葡萄糖脱氢酶可用于高纯度低聚果糖和葡萄糖酸钙的生产，一种重组葡萄糖脱氢酶表达、纯化后，对该酶酶学性质进行了研究。最适反应pH值8．4，最适反应温度37℃，在温度低于45℃条件下，酶活力稳定性好。在最适温度和pH条件下，以葡萄糖为底物时葡萄糖脱氢酶的米氏常数Km=20．09mmol／L，以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）为底物时的米氏常数Km=0．10mmol／L。     

基于酶反应动力学理论优化脂肪酶活力测定体系

为了提高棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)法测定脂肪酶活力的灵敏度和准确度,以来源于Rhizopus oryzae的脂肪酶Lipase F-AP 15为研究对象,首先对其最适反应pH和反应温度进行优化,然后将表面活性剂作为激活因子引入酶活力测定体系,探究影响机制,并依据酶反应动力学理论优化测定条件(底物浓度、酶质量浓度、反应时间),对优化的p-NPP法的重复性和准确性进行了检验,最后以另一个来源的脂肪酶Lipase-PPL为模型,以同样思路与方法改进与优化其酶活力测定体系,以考察优化方法和思路的适用性。结果表明：表面活性剂PEG 8000的引入使得覆盖在脂肪酶活性位点的α-螺旋结构被重排而打开,脂肪酶由封闭构象转为并保持在活化构象,脂肪酶活性增强;优化测定体系的最适条件为pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度1.00 mg/mL、底物浓度6 mmol/L、反应时间5 min,在此条件下测得的酶活力是常用p-NPP法(pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度2.50 mg/mL、底物浓度10 mmol/L、反应时间8 min)测得酶活力的1.4倍;重复性和准确性试验显示,优化p-NPP法重...     

香葱中蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质

对香葱中蒜氨酸酶进行分离纯化并研究其酶学性质。通过均浆、离心、硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G200凝胶过滤层析技术分离纯化得到纯度较高的蒜氨酸酶,并利用SDS-PAGE电泳对其纯度进行鉴定。结果表明,经分离纯化可得纯化倍数为19.6倍的蒜氨酸酶,酶比活力为11.44U/mg,酶活回收率为32.1%,达到电泳纯,其亚基的分子质量约为54.5ku。纯酶的最适反应温度为45℃,最适pH7.0,以S-甲基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为45.31mmol/L,Vmax为40.32μmol/(mg·min)。     

温度和pH值对耐高温α-淀粉酶活力的影响

本文系统的研究了温度、pH值和底物浓度对地衣芽孢杆菌HM-3产生的耐高温α-淀粉酶酶活力的影响。研究结果表明：地衣芽孢杆菌HM-3N耐高温α-淀粉酶的最适酶促反应温度为：75％-85℃之间，最适作用的pH值为：6．1-7．0之间，该酶用于玉米淀粉的液化其最适底物浓度是20％～25％。     

铬革屑酶解因素研究

选用1398蛋白酶对铬鞣革屑进行水解,从酶促反应动力学角度出发,研究了酶浓度、底物浓度、温度因素对酶解反应的影响,并通过正交试验,考察了各酶解条件的综合影响。结果表明:酶浓度和底物浓度超过一定范围时,表现为混合级反应,酶促反应受到抑制;反应温度在蛋白酶最适温度范围内时,酶活是影响反应速率的主要因素,反应温度超出最适范围很高时,温度成为影响反应速率的主要因素;1398蛋白酶最佳酶解条件为:底物浓度2%,反应温度60℃,酶浓度2%,氮收率达到60%左右。     

Aspergillus ficuum菊粉酶的分离纯化及其酶解菊粉制备低聚果糖

采用硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱等分离纯化技术，从Aspergillus ficuum菌株混合酶系中分离得到4种菊粉酶组分，应用薄层层析法分离各组分水解菊粉的产物，发现其中3种组分主要含外切菊粉酶，一种主要含有内切菊粉酶。进一步对所得到的内切菊粉酶组分酶解菊粉制备低聚果糖进行了研究，研究了底物浓度、加酶量、反应温度和反应pH对低聚果糖制备的影响，确定其最适反应条件为：底物浓度50g／L、加酶量10U／g底物，反应温度45℃，反应PH6．0。在此条件下反应72h，菊粉酶解率达74％，低聚果糖得率可达50％以上，酶解产物以DP2～DP4为主。     

菊粉酶酶解菊芋提取液的试验

报道黑曲霉ＡＬ－１５４菊粉酶产生和酶解菊芋提取液的适宜条件：５％菊芋提取液,２％玉米浆、０．３％酵母膏的基本培养基,该酶活力达１４６．４ｕ／ｍｌ,是适培养条件为：ＰＨ４．５－５．０,３０℃,时间４８ｈ,酶解菊芋提取液的最适工艺条件为：ＰＨ５．０,６０℃,底物总糖浓度为１０－２０％,酶用量３．０ｕ／ｇ菊糖,酶解时间１０ｈ,底物降解率达９７．２％,酶解产物中果糖占总糖的８６．１％。     

米根霉糖化酶酶促反应条件的研究

以米根霉(Rhizopus oryzae)为供试菌株采用DNS法测定糖化酶的酶活力,系统地研究由该菌株分泌的糖化酶的酶促反应条件,主要考察反应时间、不同底物、底物浓度、反应温度、底物pH及金属离子等因素对酶活力的影响.结果表明,该酶系具有较高的酶活力可达到90 U/mL.对碳链较长的底物表现出较强的酶活力,最适酶促温度50～55℃,最适pH5.0～5.5,Mg2 、Zn2 和Ca2 对该酶系有不同程度的激活作用,其中Mg2 激活效应最大,而Mn2 、Cu2 和Fe2 对该酶系有不同程度的抑制作用,其中Mn2 的抑制作用最大.     

不同因素对松花粉中脂肪酶活力的影响

为研究松花粉中脂肪酶的最适反应条件,考察了温度(℃)、pH、底物、金属离子等因素对其酶活的影响。通过脂肪酶的催化水解作用,以95%乙醇终止反应,测定其酸价,进而求得酶活,并选择出脂肪酶的最适反应条件。结果表明,最佳反应条件为:温度35℃,pH7.4,底物为三丁酸甘油酯,Ca2+、Fe3+、Mg2+、Fe2+会提高脂肪酶活力。     

重组Athrobacter ramosus S34MTSase和MTHase的酶学性质及其制备海藻糖的应用条件优化

以淀粉为底物,通过麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltosyltrehalose synthase,MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltosyltrehalose hydrolase,MTHase)的共同作用生产海藻糖是一种经济高效的方法。对Arthrobacter ramosus S34来源并分别在E.coli BL21(DE3)中表达的MTSase和MTHase的酶学性质进行研究,发现MTSase的最适温度为45℃,最适pH为7.0,MTHase的最适温度为55℃,最适pH为6.0。随后用2种酶共同作用生产海藻糖,优化反应条件,考查反应温度、初始pH、底物DE值、加酶量以及底物浓度等因素对酶转化过程中海藻糖产率的影响。最佳酶转化条件为反应温度45℃、初始pH5.5,底物DE值8.5,加酶量分别为MTSase最小加量15.75 U/g淀粉,MTHase最小加量7.5 U/g淀粉。     

由淀粉生物合成海藻糖途径的初步验证和环境条件影响的研究

由温泉分离得一株茵WX-10．初步验证含有直接催比淀粉生成海藻糖的酶系。酶的作用受多种条件影响。包括反应时间、温度、pH等。最适反应条件为pH65～7.0，温度35C。反应液中有较高浓度缓冲液存在时，反应速度增快。DE为20浓度为10％的淀粉液化液是酶合适的底物。     

有机介质中酶促对羟基苯甘氨酸酯不对称水解的研究

为了进一步探讨利用有机介质中酶促外消旋对羟基苯甘氨酸酯不对称水解反应制备对映体纯对羟基苯甘氨酸的可能,优化反应条件,研究了不同来源的酶、有机介质及底物结构等因素对该反应的影响。结果表明,脂肪酶Novozym 435为最适催化剂;在所研究的四种有机溶剂中叔丁醇为最适有机介质;最适底物为对羟基苯甘氨酸甲酯。同时在该反应体系中,脂肪酶Novozym 435表现出较好的热稳定性和操作稳定性。     

小麦多酚氧化酶酶学特性的研究

选取3个小麦品种作为试验材料,以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在410nm处测定小麦多酚氧化酶（PPO）的活性,研究温度、pH值、底物浓度对其活性的影响以及酶促动力学常数Km,结果表明：小麦多酚氧化酶的最适温度范围为60～75℃．最适pH值为4．0～4．6,描述的单底物酶促反应动力学,相应的动力学参数Km=0．19mol／L．vmax=4．04×102（mol·L^-1）·min-1。     

果实和蔬菜中的过氧化物酶

介绍了果实和蔬菜中过氧化物酶催化的反应 ,过氧化物酶的底物、最适 p H和最适温度 ,过氧化物酶的热失活与酶的恢复和再生 ,过氧化物酶的化学物质抑活。     

一步亲和纯化蒜氨酸酶及其酶学性质研究

以自制S-烷基-L-半胱氨酸为配基的亲和凝胶直接从独头蒜粉碎液中提取蒜氨酸酶.用自制亲和凝胶吸附蒜氨酸酶后,考察含0.2 mol·L-1葡萄糖溶液的洗脱效果.利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验,并研究温度、pH和底物浓度对酶活性的影响.结果表明,利用葡萄糖溶液洗脱,得到8.29倍的纯酶.而阴性对照纯化倍数为3.78倍.提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为50 kDa和44 kDa.以合成的蒜氨酸为底物,蒜氨酸酶的最适温度是40℃,最适pH4.92,Kin为19.795μmol·mL-1,Vmax=8.446 μmol·mg-1·min-1.     

固定化β-半乳糖昔酶的催化特性研究

β-半乳糖苷酶经固定化后,其催化性能得到一定程度的改善。在各种反应条件相同的条件下,固定化酶的最适反应奈件与游离酶相比得到一定程度的拓宽：受反应温度变化的影响变小,pH从5．8～6．2扩宽至5．7-6．5;对乳糖的转化效率有了不少的提高,酶的稳定性也得到了加强。实验中固定化β-半乳糖苷酶重复使用28次,底物转化率均在45％以上,具备了一定实际应用能力。     

鸭肉酶解液美拉德反应制备鸭肉香精基料的研究

为制备鸭肉香精基料,以鸭肉酶解液为原料,添加还原糖、盐、维生素以及蒜粉进行美拉德反应。通过单因素实验和正交实验,确定最佳美拉德反应条件:酶解液中加入10%葡萄糖,3%盐,0.7%VB1,0.15%VC和0.1%蒜粉,110℃,自然pH6.87条件下反应30min。在此条件下制得的香精基料液体澄清,淡黄色,具有浓郁的鸭肉香味,令人愉快的香甜气和轻微蒜味,咸鲜味明显、突出,无苦涩味。     

鲜食玉米脂氧合酶的酶学性质

本实验研究鲜食玉米脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)的酶学性质。以新鲜甜玉米、糯玉米籽粒及其胚为试材,采用紫外分光光度法,以亚油酸为底物,探讨了酶提取部位、酶促反应温度、pH值及底物浓度对LOX活性的影响。结果表明,鲜食玉米胚中LOX活性显著高于鲜食玉米籽粒,其最适反应温度为55℃,最适反应pH值为6.0,最适底物浓度为8.0mmol/L,提高温度和延长处理时间能有效地钝化LOX。     

黑曲霉产菊粉酶的条件及其酶学性质的研究

对黑曲霉SL-09在摇瓶条件下产菊粉酶的奈件及其酶学性质进行了研究。结果发现,接种量和装瓶量对产酶影响不大,而pH值影响较为显著,最佳产酶pH值为6．0;在对催化条件的研究中发现最佳反应温度、底物浓度和pH值分别为60℃、60g/L和6．0;锰离子对酶活有较强的激活作用,最适浓度为1．5×10mol／L;同时发现该酶存在着严重的产物抑制现象,当果糖浓度大于1％时,菊粉酶活力将大幅度下降。