Aspergillus ficuum菊粉酶的分离纯化及其酶解菊粉制备低聚果糖

采用硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱等分离纯化技术，从Aspergillus ficuum菌株混合酶系中分离得到4种菊粉酶组分，应用薄层层析法分离各组分水解菊粉的产物，发现其中3种组分主要含外切菊粉酶，一种主要含有内切菊粉酶。进一步对所得到的内切菊粉酶组分酶解菊粉制备低聚果糖进行了研究，研究了底物浓度、加酶量、反应温度和反应pH对低聚果糖制备的影响，确定其最适反应条件为：底物浓度50g／L、加酶量10U／g底物，反应温度45℃，反应PH6．0。在此条件下反应72h，菊粉酶解率达74％，低聚果糖得率可达50％以上，酶解产物以DP2～DP4为主。     

Aspergillus ficuum 内切菊粉酶的酶解条件优化及酶解动力学研究

采用Aspergillus ficuum 内切型菊粉酶Endo-Ⅰ 酶解商品菊粉制备低聚果糖,经正交试验确定其最适酶解条件为：pH5.0、温度45℃、底物浓度50g/L、加酶量10U/g,在此酶解条件下,低聚果糖得率可达70.37%,酶解产物以DP3 和DP4 为主,同时含有一定量的DP2、DP5、DP6、DP7、DP8;在此条件下酶解自制菊芋干粉时,低聚果糖得率为41.72%,酶解产物以DP3～DP6 的低聚果糖为主,DP2 含量很少,同时酶解液中还含有大量的果糖;在此条件下酶解自制菊芋提取液时,低聚果糖得率高达79.80%,酶解产物中除DP6 含量较低外,其他各聚合度的低聚糖分布比较平均。在此相同酶解条件下酶解72h 时,3 种底物中,以菊芋提取液酶解后的低聚果糖得率最高。因此,应用Aspergillus ficuum 内切型菊粉酶Endo-Ⅰ酶解菊芋制备低聚果糖宜选择菊芋提取液作底物。     

固定菊粉酶酶解菊芋提取液制备果糖的研究

采用固定菊粉酶方法酶解菊芋提取液制备果糖溶液,并对固定化菊粉酶的反应条件进行了研究.制备的果糖溶液浓度可达到95%.     

与生产功能性低聚糖相关的酶(上)

制造功能性低聚糖的方法有提取法、酶水解法、酶转化法、酸水解法、碱转化法及化学合成法等,其中酶反应法是工业生产的主要方法.介绍了与低聚果糖相关的酶主要有菊粉酶、β-呋喃果糖苷酶和高果糖基转移活性果糖苷酶等,以及这些酶的作用原理和生产方法,并介绍了低聚果糖的制造方法及固定化酶在低聚果糖生产的应用。     

黑曲霉VN－19493菊粉酶的酶学性质及应用于果糖生产的研究

对黑曲霉ＶＮ-１９４９３菊粉酶的酶学性质进行了研究,并用该酶水解菊芋,制成果糖含量达８７％的果糖浆。原料低廉、工艺简单,产品风味纯正、口感清爽,极具工业化生产前景。     

菊粉酶的酶学特性与分子生物学

菊粉酶是一类能水解菊粉生产果糖和果聚糖的酶.目前,已有许多关于各种霉菌、酵母和细菌生产菊粉酶的报道.但这些不同微生物来源的菊粉酶在生物物理、生物化学性质方面存在着相当大的差异.本文对菊粉酶的酶学性质、基因和基因工程的最新研究成果进行了综述.     

黑曲霉Aspergillus niger No．26菊粉酶的研究

通过筛选菌种，分离出３株菊粉酶活力较高的菌株，对其中Ｎｏ．２６菌株经过培养基组成的研究，酶活力达３７．１ｕ／ｍｌ。比原活性６．７ｕ／ｍｌ提高５．５倍。经纸上层析鉴定，在菊粉水解过程中，果糖逐步增加，未见中间产物生成，并有很强的水解蔗糖为果糖和葡萄糖，以及水解棉子糖为果糖和蜜二糖的能力。因此该酶主要为外切型菊粉水解酶。该酶在５５℃以下较稳定，最适ｐＨ为３～５，其低而宽的ｐＨ范围有防止微生物污染的能力，具备工业应用的良好性能。     

左聚糖降解酶的研究进展

左聚糖来源于单子叶植物和微生物,在细菌中分布最广泛。左聚糖是由β-2,6-糖苷键连接的D-果糖残基作为主链,以一些β-2,1-糖苷键连接作为支链组成的果聚糖。左聚糖降解酶分为3种类型：左聚糖酶(levanase)[EC3.2.1.65]、左聚糖生物水解酶(β-2,6-fructan 6-levanbiohydrolase, LF2ase)[EC3.2.1.64]和左聚糖果糖转移酶(levan fructotransferase, LFTase)[EC4.2.2.16]。左聚糖降解酶能将左聚糖催化生成低聚果糖、果二糖、双果糖酐IV等,是食品及医药领域的潜在资源。文章介绍了左聚糖降解酶的来源、酶学性质、结构,概述了左聚糖降解酶在食品领域的应用,对其发展趋势和研究方向进行了展望。     

固定化菊粉酶的研究

报道了克鲁维酵母突变株（ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ－ＵＶ－Ｇ－４０－３）所产菊粉酶的固定化及固定化酶的性质，并用固定化菊粉酶酶解洋姜提取液生产果糖，在分批式反应器中，当底物和固定化酶体积比为３．５∶１时，２．５ｈ水解率达到９２．４％，产率为２８．７ｇ／Ｌｈ，在连续填充床反应器中，在稀释率为０．５ｈ－１，转化率达９３．６％，产率为１５．７ｇ／Ｌｈ，半衰期达１１０ｄ以上。     

菊粉酶解及其酶解液对实验性糖尿病动物血糖影响的研究

以10％菊粉提取液为原料,在固定化酶与底物体积比为1：5、pH45、温度50℃、搅拌速度148r／min的条件下,用固定化菊粉酶酸解3h,转化率可达87％。酶解产物中,果糖占76％,葡萄糖占13％,低聚果糖占11％。此酶解液用于实验性糖尿病大鼠试验,证明血糖基本保持不变,而对照组大鼠的血糖升高30％左右。且酶解液中所含的低聚果糖又是对健康有益的双歧杆菌生长因子。故此酶解液可望开发为适合糖尿病患者饮用的产品。     

菊粉酶的研究及应用

许多菊科植物中含有丰富的菊粉 (菊糖 ) ,利用菊粉酶的作用可将菊粉转化为果糖、低聚果糖 ,在食品工业中具有重要应用价值和良好应用前景。文章就菊粉酶的来源、性质、应用及研究进展进行了简要综述     

微生物源菊粉酶的研究进展

菊粉作为新资源食品和食品原料,近年来以菊粉为目标,开展微生物源菊粉酶生产高果糖浆、低聚果糖和酒精研究成为热点。本文综述了近几年来国内外微生物源菊粉酶的研究现状,主要论述了产酶微生物菌株的筛选、产酶条件、工程菌株的构建及应用等研究的进展。     

酶处理促进龙眼果汁中蔗糖的转化和低聚果糖的生成

为了降低龙眼果汁中的蔗糖含量和制备一种富含低聚果糖的龙眼果汁,本研究以龙眼果汁为原料,探讨底物浓度、底物pH、果糖基转移酶添加量、酶处理温度和时间等单因素对果汁中蔗糖的转化和生成低聚果糖的影响。采用液相色谱法(HPLC)分析酶转化前后果汁中蔗糖、果糖、葡萄糖、低聚果糖含量的变化。结果表明,底物浓度、pH、酶用量、温度和处理时间等因素对龙眼果汁蔗糖转化和低聚果糖的生成有显著影响(p0.05)。在底物浓度30 oBrix、pH 6.0、酶用量9 U/g、55℃下转化7 h的龙眼果汁,蔗糖含量从164.36 mg/m L减少至22.34 mg/m L,生成的低聚果糖含量为97.88 mg/mL,占果汁中总糖的38.21%。利用果糖基转移酶处理龙眼果汁,能有效降低果汁中的蔗糖含量,获得一种低热量且富含低聚果糖的功能性果汁。     

菊粉酶酶解菊芋提取液的试验

报道黑曲霉ＡＬ－１５４菊粉酶产生和酶解菊芋提取液的适宜条件：５％菊芋提取液,２％玉米浆、０．３％酵母膏的基本培养基,该酶活力达１４６．４ｕ／ｍｌ,是适培养条件为：ＰＨ４．５－５．０,３０℃,时间４８ｈ,酶解菊芋提取液的最适工艺条件为：ＰＨ５．０,６０℃,底物总糖浓度为１０－２０％,酶用量３．０ｕ／ｇ菊糖,酶解时间１０ｈ,底物降解率达９７．２％,酶解产物中果糖占总糖的８６．１％。     

黑曲霉Uγ-2菊粉酶酶制剂的生产工艺

菊粉酶水解菊粉产生果糖.用菊粉酶水解菊芋,可以生产果糖产品.在工业酶制剂中微生物菊粉酶的重要性已受到关注.本文探讨菊粉酶固体酶制剂和液体酶制剂的生产工艺,使用1:(1.5～2)的乙醇沉淀酶蛋白,冷冻干燥得到酶活力为6 437.38 U/g的粉状固体酶制剂.通过超滤浓缩添加适量的防腐剂和保护剂,制得液体酶制剂,酶活力为378.01 U/mL,其贮存稳定性好,为酶制剂的工业化生产奠定基础.     

米曲霉GX0015β-果糖基转移酶分离纯化及酶学性质研究

β-果糖基转移酶是由蔗糖生产低聚果糖所必需的酶。从米曲霉GX0015菌株分离纯化β-果糖基转移酶,并对该酶酶学性质进行了研究。     

重组高异构化率葡萄糖异构酶酶学性质的研究

葡萄糖异构酶催化D-葡萄糖形成D-果糖的异构化反应，是工业上制备高果糖浆的关键酶。介绍一种新型重组葡萄糖异构酶（rGI）的酶学性质。rGI的最适作用温度为90℃～100℃，最适作用pH为7．0。rGI具有较好的热稳性，90℃下的酶活半衰期约为5h。rGI酶活表达依赖二价金属离子。在90℃、pH7．0和5h下，rGI异构化30％（w／v）葡萄糖液为果糖的异构化率达到54．8％。     

黑曲霉产菊粉酶的条件及其酶学性质的研究

对黑曲霉SL-09在摇瓶条件下产菊粉酶的奈件及其酶学性质进行了研究。结果发现,接种量和装瓶量对产酶影响不大,而pH值影响较为显著,最佳产酶pH值为6．0;在对催化条件的研究中发现最佳反应温度、底物浓度和pH值分别为60℃、60g/L和6．0;锰离子对酶活有较强的激活作用,最适浓度为1．5×10mol／L;同时发现该酶存在着严重的产物抑制现象,当果糖浓度大于1％时,菊粉酶活力将大幅度下降。     

D-阿洛酮糖3-差向异构酶的异源表达和酶学性质

克隆了来源于Clostridium bolteae ATCC BAA-613的D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因,利用重叠延伸PCR技术在Cb-dpe基因的上游加入了P43启动子,形成P43-Cb-dpe,再将P43-Cb-dpe连接到p MA5载体上构建出双启动子表达载体,并导入到Bacillus subtilis WB800中进行表达;与单启动子表达系统相比,双启动子表达载体能够显著提高Cb-dpe的表达量。对重组Cb-DPE酶进行了分离纯化和酶学性质的研究,结果表明:重组Cb-DPE的最适温度为55℃,最适pH为7.0,在温度30~40℃范围内和pH 6.5~7.5之间有良好的稳定性;Co~(2+)、Mn~(2+)可显著增强酶活;D-阿洛酮糖为底物时,K_m为26.68 mmol/L,小于果糖的61.80 mmol/L,说明该酶对D-阿洛酮糖的亲和性比对D-果糖的高。而在动力学参数方面,以D-阿洛酮糖为底物对应的催化效率K_(cat)/K_m为95.8 L/(mmol·min),大于以果糖作为底物时的54.1 L/(mmol·min)。     

菊芋酶解制备低聚果糖糖浆的工艺优化及功能评价

菊芋块茎富含菊糖,是制备低聚果糖（Fructooligosaccharides,FOS）的主要原料之一,新鲜菊芋块茎直接酶法加工用于功能性糖浆的制备可以丰富菊芋综合加工的应用。本研究以新鲜菊芋块茎为原料,通过系统研究菊芋内源酶、菊粉内切酶、葡聚糖内切酶、木聚糖酶、聚半乳糖醛酸酶和单宁酶在鲜菊芋酶法加工制备低聚果糖糖浆中的作用规律和酶解效果,建立并优化了酶法制备低聚果糖糖浆的工艺。结果表明,最优酶解工艺如下：菊芋浆在50℃和pH5.0条件下,加入0.08 U/g单宁酶酶解4 h,再加入0.08 U/g葡聚糖内切酶、0.08 U/g木聚糖酶、0.07 U/g聚半乳糖醛酸酶和12 U/g菊糖内切酶组合酶解8 h,酶解液浓缩2倍后获得低聚果糖糖浆成品。成品中低聚果糖和单宁的含量分别为53.72和3.11 g/L,DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和总抗氧化能力分别为82.23%、30.47%和2.78μmol/mL。以制备的低聚果糖糖浆为唯一碳源替代MRS培养基中的葡萄糖,植物乳杆菌、嗜热链球菌和副干酪乳杆菌的生长速率较未经酶解的菊芋原浆作为MRS培养基的唯一碳源时,分别提高了33.33%...