圆弧青霉碱性脂肪酶发酵和纯化的研究

圆弧青霉变异株ＰＧ３７产酶最适条件：碳源用豆油;氮源用豆饼粉;装液量５０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶,摇瓶转速２５０ｒ／ｍｉｎ,培养温度及时间分别为２８℃和９６ｈｒ,起始ｐＨ７．５。发酵至第３６、５４和７２ｈｒ各流加０．４％豆油,发酵结束脂肪酶１５００Ｕ／ｍｌ。经过滤,硫酸铵盐析以及Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃｌ－４８Ｂ、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｏｌｗ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７     

圆弧青霉产碱性脂肪酶的中试发酵

圆弧青霉PG3 7是碱性脂肪酶的高产菌 ,在摇瓶和 2 5L发酵罐小试的基础上进行 3M3发酵罐中试 .适合的发酵条件为 :发酵培养基 (% )　豆饼粉 3 .0 ,玉米浆 3 .0 ,磷酸氢二钾 1 .0 ,硫酸镁0 .1 ,大豆磷脂 0 .5,柠檬酸钠 0 .0 5,花生油 0 .2 ;发酵起始 pH值为 8.0 ,发酵温度 2 9± 1℃ ,接种量8%～ 1 0 % ,通风量 0 .8L/ (L·min) ,搅拌转速 2 4 0r/min ,发酵周期 72h ,期间于 3 0、4 2、54h分别各流加 0 .4 %花生油 .在上述条件下 ,圆弧青霉PG3 7发酵酶活达 2 0 0 0 μmol/ (min·mL)     

圆弧青霉PG37碱性脂肪酶的发酵工艺条件

研究了圆弧青霉PG3 7碱性脂肪酶的发酵工艺条件 ,优化了PG3 7的摇瓶最适产酶条件 .其中 ,发酵培养基的组成为 (g/dL) :豆饼粉 3 .0 ,玉米浆 3 .0 ,磷酸氢二钾 1 .0 ,硫酸镁 0 .1 ,大豆磷脂0 .5,柠檬酸钠 0 .0 5,花生油 0 .2 ;发酵培养基起始 pH 7.5,发酵温度 (2 9± 1 )℃ ,摇床转速 2 50r/min ,发酵周期 96h ,发酵期间于 3 6,54,72h分别流加 0 .4 g/dL花生油 .在此条件下 ,PG3 7的脂肪酶产率为 2 0 60 μmol/ (min·mL) .PG3 7在 2 5L的实验室小罐中的产酶水平为 1 90 0 μmol/ (min·mL) .     

圆弧青霉PG37碱性脂肪酶的研究

圆弧青霉突变株ＰＧ３７是一株高产碱性脂肪酶生产菌，摇瓶酶活为５０５２ｕ／ｍｌ，作者对ＰＧ３７发酵产酶工艺及脂肪酶的酶学特性等进行了系统的研究。结果表明圆弧青霉ＰＧ３７的摇瓶最适工艺条件为：装液量５０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶；摇瓶转速２５０ｒｐｍ；培养温度及时间分别为２８℃和９６小时；起始ｐＨ７．５；发酵过程中第３６、５４和７２小时洛流加０．４％棉籽油。ＰＧ３７肥肪酶的最适作用ｐＨ为１０．０－１０．５     

海洋青霉碱性脂肪酶液态发酵和部分酶学性质研究

从海洋菌中分离筛选到1株碱性脂肪酶产生菌H-19,对该菌产脂肪酶的液态发酵条件进行了优化,优化后的培养基组成(%):葡萄糖0.5,大豆油1.0,蛋白胨1.0,(NH4)2SO40.5,NaCl 2.75,KCl 0.1,MgCl20.5,MgSO4.7H2O 0.2,CaCl20.05;发酵培养基起始pH8.0,发酵温度28℃,摇床转速180 r/min,发酵周期48 h,脂肪酶的活力可达17.43 IU/mL。酶的最适反应pH为9.4,最适温度36℃,半失活温度为60℃。     

碱性脂肪酶同工酶的分离纯化

对经疏水层析 (PhenylSepharoseCL 4L)和阴离子交换层析 (DEAE FastFlow)等部分纯化的样品 ,采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步将其分离纯化 ,获得了PG3 7碱性脂肪酶的 3种同工酶LipaseⅠ、LipaseⅡ和LipaseⅢ .用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和SephadexG 1 50凝胶色谱法分别测得同工酶的相对分子质量为 2 750 0和 2 90 0 0 .测定了LipaseⅠ的等电点为 5.4 ,动力学常数Km 和Vmax分别为 4 .54g/dL和 5.56μmol/ (min·μg) .     

圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达

圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的 2 8SrRNA和 18SrRNA条带 .根据PG37所产碱性脂肪酶 (LipPC)N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在 3’端具有poly(A)等所提供的生物信息 ,采用RT PCR技术扩增了LipPC成熟肽和 3’非编码区的cDNA片段 ,并将该PCR产物直接克隆至pUCm T载体中 .序列分析表明 ,LipPC含有 2 5 8个氨基酸残基 ,其中保守的五肽序列为Gly His Ser Leu Gly .进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCRcDNA文库构建试剂盒 ,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段 ,从而完成了LipPC完整cDNA的分析测定 .最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至 pGEX 5X 3表达载体中 ,SDS PAGE检测结果表明 ,大肠杆菌BL2 1所表达的GST LipPC融合蛋白质分子质量约为 5 3ku .     

重组毕赤酵母发酵生产扩展青霉碱性脂肪酶的优化

通过毕赤酵母工程菌表达碱性脂肪酶,对表达条件进行了优化。先进行单因素实验,筛选出对碱性脂肪酶表达影响较大的4个因素:诱导时间、初始pH、甲醇添加量和接种量;在单因素实验的基础上设计四元线性回归实验,利用SPSS18数据处理软件进行数据优化,结果表明,诱导时间为96h、初始pH为6.0、甲醇添加量为0.5%、接种量为150mL时有最佳的表达效果,碱性脂肪酶活力为242.7U/mL。     

圆弧青霉脂肪酶基因序列的生物信息学分析

从圆弧青霉PG37中克隆了碱性脂肪酶(Lip I)基因,并采用生物信息学分析了PG37 Lip I基因携带的遗传信息.序列分析结果表明:Lip I DNA序列全长1 480 bp,不存在重复序列,含有5个内含子,5' 端存在TATA box和多个转录因子结合位点;cDNA序列全长1 128 bp,包含了转录起始位点、5' 和3' 非编码区及858 bp的开放阅读框架;Lip I编码区对TGC、GAC、TTC、CAC、AAG、AAC和TAC这7种密码子使用频率最高;比对Lip I基因与Pichia pastoris基因组中的密码子使用频率,其中有21个密码子使用频率的比值相差较大.     

圆弧青霉BD26碱性脂肪酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以圆弧青霉BD26总RNA为模板,扩增出774 bp cDNA片段,将该基因片段克隆到表达载体pET-28a(+)上并转化Escherichia coil BL21(DE3),得到重组菌株BL21/ Lip PD。经IPTG诱导,菌体在固体琼脂显色平板上形成明显透明圈。SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子质量约为27 ku。表达条件优化结果表明,当工程菌培养至OD_(600)为0.5时,加入IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,在32℃诱导培养1 h,比酶活达29.30 U/mg。     

不同酵母菌发酵产油脂及脂肪酶的研究

通过摇瓶发酵研究了健强地霉、伯顿拟内孢霉、发酵性丝孢酵母油脂积累及脂肪酶活力.考察并比较了不同酵母菌的油脂合成及脂肪酶活力差别,通过酸热法破碎细胞提取油脂,采用橄榄油法测定发酵液和细胞中的脂肪酶活力.     

大豆异黄酮糖苷酶的发酵和纯化

大豆异黄酮糖苷酶可水解大豆异黄酮的糖基使其生成苷元,从而提高大豆异黄酮的生物活性。实验中筛选得到了大豆异黄酮糖苷酶产酶菌株 Absidia sp．R,确定了该菌株发酵产酶培养基。采用硫酸铵沉淀和离子交换法对该酶进行了纯化,并初步确定了其分子质量。     

一株毛霉菌产脂肪酶特性及发酵条件研究

文中观察了一株产脂肪酶毛霉(Mucor sp.)菌株在橄榄油罗丹明B鉴定平板上的菌落形态,对其产脂肪酶进行了酶学特性研究,并探讨了该菌株产脂肪酶的发酵条件,优化了产酶发酵培养基和产酶发酵条件,得出了该菌产酶的最佳发酵条件为以1%全脂大豆粉为氮源,1%玉米浆为碳源,添加0.5%橄榄油和0.1% Tween-80,控制起始pH值为6.0.     

碱性脂肪酶预防高血脂的实验研究

脂肪酶（Lipase）是脂类化合物分解、合成及交互脂化的生物催化剂，已广泛应用于脱脂、化工产品生产及医药等行业[1-3]。从1996年开始国产碱性脂肪酶投入批量生产，并应用于洗涤剂行业，但其他应用有待开拓，为了探讨在预防高血脂症的效果，我们进行了研究。实验中进行了大鼠血脂水平的测定和血液粘度和红细胞聚集性等的检测，以期取得确切的实验结果，为国产碱性脂肪酶在保健食品、医药卫生中的应用提供依据。1材料和方法1．1动物分组及饲养采用白求恩医大实验动物部提供的Wistar健康雄性大鼠，体重230。209，按体重随机分成3组，每组10只…     

低温脂肪酶的分离纯化及酶学性质

苏云金芽胞杆菌CZW001脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、超滤离心、DEAE-纤维素-52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为75.5倍,活性回收率为37.6%,12%SDS-PAGE电泳估计其相对分子质量约40 000。对纯化后的脂肪酶进行酶性质研究表明:酶的最适作用温度为25℃,对热敏感,60℃处理30 min仅残留30%酶活性;酶的适宜作用pH范围在7～9,最适pH为8;该脂肪酶的水解活性对Ca2+表现明显的依赖性,Al3+、Zn2+和Fe2+对脂肪酶有显著的抑制作用;脂肪酶对醇类有机溶剂的耐受性随碳链增加而减小;脂肪酶对豆油表现出显著的特异性,而蓖麻油抑制脂肪酶水解活力。     

Nisin的发酵生产条件和纯化研究

本从培养基、发酵条件等方面研究了Nisin的发酵生产，并对分批发酵和连续发酵生产之间、自由细胞和固定化细胞生产之间分别作了比较，最后对多种纯化Nisin的方法进行了讨论。     

枯草杆菌溶栓酶的液体发酵工艺和分离纯化研究

以产溶栓酶的枯草芽孢杆菌SBS为出发菌株,采用单因子试验和正交试验研究了液体发酵培养条件和培养基组成对酶活性的影响.发酵液经硫酸铵分段盐析、离子交换色谱、凝胶过滤色谱等手段得到了电泳纯级别的溶血栓酶.结果表明,产溶栓酶的最佳液体培养基组成为:10g/L米糠、25g/L大豆分离蛋白、0.2g/L CaCl2;最佳发酵培养条件为37℃,初始pH 8.0,15L发酵罐,发酵时间为70h,酶活性达到542U/mL,SDS-PAGE测得其分子量为32kDa.     

解脂假丝酵母脂肪酶的纯化及性质研究

通过采用盐析和透析等提纯方法,对解脂假丝酵母(Candidalipolytica)脂肪酶进行了纯化,比活提高了2.69倍,回收率45%.该酶反应的最适pH值为7.5,最适温度为38℃,pH稳定范围为6.0～7.5,温度稳定性较差,以2mol/L的蔗糖作保护剂效果较好.该酶为金属酶,5mmol/L的钙离子有较好的活化效果.     

液体碱性脂肪酶稳定性的化学动力学研究

从多方面考察了碱性有肪酶超滤浓缩液的稳定性，推导出液体碱性脂肪酶失活动力学方程，得到了液体碱脂肪酶的失活级数为１．３６级。