白菜型油菜和诸葛菜远缘杂交的子房培养及杂种鉴定

对白菜型油菜和诸葛菜正反属间杂交及杂交子房培养进行了研究。结果表明,以授粉后7d取子房进行离体培养其子房存活率和结籽率均较高。对于所使用的4种培养基,培养基A（MS＋2．0mg·L^-16-BA＋0．2mg·L^-1NAA＋500mg·L^-1水解酪蛋白＋0．5％活性炭）显示较好的效果,在杂交组合澧临白菜×诸葛菜中,其最高结籽率达2．56％。适宜的母本结合授粉后恰当的子房离体时间和合适的培养基成分有利于提高杂种的获得频率。通过子房培养,从杂交组合澧临白菜×诸葛菜获得的1株杂种植株,形态上显示出双亲的中间型。细胞学研究显示,该杂种小孢子和花粉发育呈现异常现象,花粉育性低。形态学和SSR分子鉴定表明,该杂种植株为真杂种。因此,通过有性杂交结合子房培养能够将诸葛菜的有益性状转入白菜型油菜中。     

甘蓝型油菜与Brassica maurorum的异源六倍体后代及BC_2细胞学分析

将甘蓝型油菜品种中油821（2n=38,AACC）与芸薹属野生资源Brassica maurorum（2n=16,MM）的三倍体杂种进行染色体加倍,得到异源六倍体（2n=54,AACCMM）。该多倍体雄性高度不育,雌性育性极低。在其花粉母细胞的减数分裂终变期,染色体平均配对构型为1.17Ⅰ＋20.71Ⅱ＋0.56Ⅲ＋2.25Ⅳ＋0.08Ⅴ＋0.06Ⅵ。用甘蓝型油菜与该多倍体连续回交2次,均需借助幼胚培养才得到后代植株,BC1、BC2植株均雄性不育,雌性育性很低。BC2植株的形态特征接近甘蓝型油菜,但各植株形态有明显差异。基因组原位杂交分析表明,BC2植株含有2～5条M基因组的染色体,甘蓝型油菜染色体多配对形成二价体,附加的染色体多以单价体形式存在,或与甘蓝型油菜染色体发生联会配对。     

甘蓝型油菜小孢子离体培养条件改良

应用低含油量甘蓝型油菜品系1064与高含油量品系H105杂种F1花蕾进行小孢子培养,研究了两个种植地点的油菜小孢子产胚率的影响。对长度在0.4cm～0.6cm,0.6cm～0.8cm以及0.8cm以上的胚分别培养,并比较了秋水仙碱悬浮处理离体小孢子、浸根和滴芽3种染色体加倍方法的加倍效率。结果表明,种植在西宁的材料小孢子产胚率比南京高,为8.6枚/皿;0.6cm～0.8cm大的胚转接到B5固体培养基,其成苗率高达48.53%;3种加倍处理方法中以50mg/L秋水仙碱悬浮小孢子48h染色体加倍效率最高,达到46.23%。本研究构建了含有123个株系的DH群体,可用于油菜含油量性状的QTL分析。     

甘蓝型油菜DH植株创建及其倍性的流式鉴定

以甘蓝型油菜大粒品系和小粒品系的小孢子为试验材料,研究取样时期、花蕾大小、培养基类型及添加成分对小孢子产胚率的影响,利用流式细胞仪对小孢子再生植株及加倍植株进行了准确、快速的倍性分析。结果表明,始花期为最佳取蕾时期,花蕾大小在2.5~3.5mm为宜,培养基以液体培养基最好。培养基中加入0.1mg/L6-BA可以促进小孢子胚的发生,而活性炭对小孢子培养没有明显的促进作用。流式细胞仪倍性检测显示小孢子再生植株加倍后的双单倍体（doubled haploid,DH）占49%,还存在少量的三倍体（11.3%）、四倍体（1.1%）及嵌合体（27.3%）植株。本研究为油菜材料的快速纯合及其DH系群体的构建等提供了新的经验。     

奥迪亚无核与玫瑰香型葡萄杂交胚挽救技术研究

为了培育玫瑰香型、无核、大粒葡萄新品种,以二倍体奥迪亚无核葡萄做母本,以二倍体玫瑰香葡萄和四倍体巨玫瑰葡萄作父本杂交以及奥迪亚无核自交胚珠为材料,进行不同父本、取样时期、发育培养基、萌发培养基、激素对无核葡萄胚挽救效果影响的研究。结果显示:杂交组合奥迪亚无核×玫瑰香的胚发育率和胚萌发率较奥迪亚无核×巨玫瑰的要高;奥迪亚无核×玫瑰香、奥迪亚无核×巨玫瑰的杂交胚珠和奥迪亚无核自交胚珠均在授粉后54 d取种的胚发育率最高;适于杂交组合奥迪亚无核×玫瑰香、奥迪亚无核×巨玫瑰杂交胚发育的培养基为:Nitsch+1.5 mol/L IAA+0.5 mol/L 6-BA+0.5 mol/L GA3+60 g/L蔗糖+5 g/L琼脂+1 g/L活性炭;1/2MS和WPM均可作为奥迪亚无核×玫瑰香的胚萌发培养基;0.1 mg/L 6-BA浓度是奥迪亚无核×巨玫瑰的杂交肧萌发的最佳浓度。     

花生胚小叶的离体再生及筛选压力选择

以花生胚小叶为外植体优化离体再生条件,通过对再生苗进行筛选,为外源基因的遗传转化提供实验依据。研究表明,不同基因型胚小叶的再生能力差异显著,在供试基因型中以中花8号不定芽诱导率和成苗率最高,且外植体状态最好。中花8号胚小叶再生的最佳诱导培养基为MSB（MS无机盐＋B5有机成分）＋6-BA（4.5mg/L）＋NAA（1mg/L）＋AgNO3（2mg/L）,最佳诱导培养时间为21d。对中花8号再生苗进行筛选浓度实验,草丁膦（PPT）为20mg/L时,可筛选出抗性苗;300mg/L的卡那霉素（Km）可用于较小幼苗筛选,而对较大幼苗则需将Km的浓度提高至400mg/L以上。     

芸薹属远缘杂交试管苗快繁培养基的优化

为了优化芸薹属远缘杂交试管苗的快繁培养基,探讨基因型、培养时间等因素对试管苗分化率的影响,实验对甘蓝型油菜与甘蓝以及白菜型油菜与甘蓝两种远缘杂交方式的试管苗,在10种添加了不同浓度的6-BA和NAA的培养基上进行快繁培养。采用SAS软件对培养后第20d和第30d的分化率进行分析处理,结果如下：（1）白菜型油菜与甘蓝5个杂交组合间,以及白菜型油菜与甘蓝、甘蓝型油菜与甘蓝两种杂交类型间的试管苗分化率无显著差异;除甘蓝型油菜与甘蓝杂交的试管苗在培养第30d时的分化率无显著差异外,其它情况下培养基间的诱导分化率差异均达到显著或极显著水平;（2）添加3．0mg·L^-1 6-BA（6-苄基嘌呤）和0．2mg·L^-1 NAA（萘乙酸）的MS培养基对试管苗的诱导分化效率显著或极显著高于其它快繁培养基;（3）不同培养基培养的试管苗在培养20d和30d时的分化率呈高度正相关,但前20d的日平均分化率显著高于20～30d的日平均分化率。     

‘红宝石无核’与玫瑰香型葡萄杂交胚挽救技术研究

为了培育玫瑰香型、无核、大粒葡萄新品种,以二倍体‘红宝石无核’葡萄做母本,二倍体‘玫瑰香’葡萄和四倍体‘巨玫瑰’葡萄作父本杂交,进行不同父本、发育培养基、萌发培养基对无核葡萄胚挽救效果影响的研究。结果显示:杂交组合‘红宝石无核’ב玫瑰香’的胚发育率和胚萌发率较‘红宝石无核’ב巨玫瑰’的要高;适于杂交组合‘红宝石无核’ב玫瑰香’‘红宝石无核’ב巨玫瑰’杂交胚发育的培养基为:Nitsch+1.5 mol/L IAA+0.5 mol/L 6-BA+0.5 mol/L GA3+60 g/L蔗糖+5 g/L琼脂+1 g/L活性炭;1/2MS和WPM均可作为‘红宝石无核’ב玫瑰香’的萌发培养基,其中1/2MS作为‘红宝石无核’ב玫瑰香’的萌发培养基效果较好。     

紫薯愈伤组织诱导和培养条件优化及绿原酸类化合物的积累

以紫薯叶片为外植体,通过筛选培养基和培养条件建立了紫薯愈伤组织培养体系。研究6-苄基氨基嘌呤(6-BA)及萘乙酸(NAA)不同浓度组合对紫薯愈伤组织诱导的影响,之后分别考察基础培养基MS、1/2MS、B5、WPM、White及NAA、6-BA、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)三种激素对紫薯愈伤组织继代生长的影响。确定最适基础培养基后,对激素进行单因素实验后再做正交实验。结果表明1/2MS基本培养基中添加1.5 mg/L 6-BA和0.4 mg/L NAA适合紫薯愈伤组织诱导,诱导率为81.82%。MS为优选基础培养基,通过正交实验优化的激素配比组合为1.0 mg/L NAA,0.4 mg/L 6-BA,1.0 mg/L 2,4-D。最佳继代培养基为MS+1.0 mg/L NAA+0.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+6 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,此优化激素条件下愈伤组织的生物量增长倍数为23.46倍,3-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰宁酸、4,5-二咖啡酰宁酸三种绿原酸类化合物含量分别为0.30%、1.91%、1.10%,三者总含量3.31%,因此,通过紫薯愈伤组织培养生产绿原酸类化合物是可行的。     

培养基和外源激素对银杏愈伤组织诱导、生长及叶绿素含量的影响

以银杏胚为外植体,通过应用MS、WS、White培养基和不同组合的外源激素研究对愈伤组织的诱导及其叶绿素的含量.结果表明:MS培养基诱导效果最好;外源激素对银杏愈伤组织叶绿素含量的影响程度为KT＞6-BA＞NAA＞2,4-D;1/4MS NAA2 mg/L KT 3 mg/L组合由于有很高的诱导率、较高的生长量、最高的叶绿素含量成为最适宜的培养基.     

芥蓝与菘蓝族间原生质体融合及杂种愈伤分析

运用聚乙烯乙二醇（PEG）和二甲基亚砜（DMSO）共同诱导融合的方法,成功获得芥蓝与菘蓝原生质体融合的再生愈伤。利用9对SRAP随机引物对亲本和再生愈伤DNA进行扩增以鉴别再生愈伤的基因组成,结果表明：在再生愈伤的DNA条带中,与供体菘蓝相同的带占93．07％～94．16％,与受体芥蓝相同的条带占70．24％～75．78％,并有少量新增带和缺失带出现,再生愈伤的DNA带型为双亲的叠加,为真正的族间杂种愈伤。类平均法（UPGMA）聚类分析表明,5个杂种愈伤明显聚在一起,其遗传组成十分相似,与菘蓝的遗传关系较近,而与芥蓝的遗传关系稍远。     

甘蓝型油菜隐性核不育上位基因抑制作用专一性研究

将甘蓝型油菜隐性上位互作核不育系9012A的临时保持系12-148-204-F14TAM、204TAM分别与双隐性核不育系5A杂交,研究隐性上位抑制基因rfrf对5A中不育基因ms1ms1ms2ms2的抑制作用。结果表明rfrf基因对ms1ms1ms2ms2的不育性表达没有抑制作用,而对9012A中不育基因ms3ms3ms4ms4具有专一抑制作用。     

欧洲野生甘蓝的核质遗传多样性和群体遗传结构分析

为了解欧洲野生甘蓝遗传背景,以栽培甘蓝、甘蓝型油菜和白菜型油菜作对比,对引进的7个生态地理群体共80份野生甘蓝材料进行了核质遗传多样性和群体遗传结构分析。利用10对特异性SSR引物分析叶绿体基因组多样性,获得8个差异性标记,将参试94份材料划分为3类,即甘蓝（含栽培和野生甘蓝）、甘蓝型油菜和白菜型油菜;包括6种单倍型,其中野生甘蓝2个,甘蓝型油菜3个,白菜型油菜1个。利用6对SRAP引物对核基因组多样性进行分析,获得75个多态性标记;聚类及遗传结构分析表明7个野生甘蓝群体中,F、D、G三个群体聚为独立的亚类,E群体大部分单株归于G亚类。其它3个群体A、B、C则相互混杂在一起。野生甘蓝群体Nei＇s基因多样性指数（H）和Shannon’s指数（I）分别为0.301 3和0.461 1。分子方差分析（AMOVA）表明野生甘蓝以群体内变异为主,占80%;群体间变异仅占20%。结果显示引进的野生甘蓝群体核质遗传多样性丰富。     

二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L．）品种浙双758为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0．5—1．5mg／L2,4-D的MS培养基上预培养3d或7d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3mg／LBA和0．15mg／LNAA及添加或不添加2．5mg／LAgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96．1％,96．7％和96．7％。     

花瓣色素定量法对甘蓝型油菜白花性状的质量-数量遗传模型分析

采用无水乙醇提取油菜花瓣色素,在439nm波长下测定提取液的吸光度,实现对甘蓝型油菜白花性状的量化观察,并应用植物数量性状主基因＋多基因混合遗传模型多世代联合分析法,对甘蓝型油菜杂交组合（HW 243×HZ 21-1）和（HW 243×中油821）的P1、P2、F1、F2、B1和B2世代群体进行分析,研究花瓣颜色的遗传特性。结果显示：甘蓝型油菜白花性状表现为数量性状,其遗传符合2对加性-显性-上位性主基因＋加性-显性-上位性多基因遗传模型（E-O）,以主基因作用为主,多基因的作用相对较小;2对主基因的加性、显性和上位性效应均具有较大的作用;主基因的遗传力较高;受环境影响较小。在F2群体中主基因的遗传率为95.51%和96.35%,多基因遗传率为3.65%和2.43%;在B1群体中主基因的遗传率为53.00%和49.59%,多基因遗传率分别为39.93%和39.84%;在B2群体中主基因的遗传率为97.38%和95.51%,多基因遗传率分别为2.17%和1.57%。