青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB与luxCDABE在大肠杆菌中表达与发光特性比较

目的对比淡水发光细菌——青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE在新的表达体系中的表达,为构建特异性检测毒性的重组菌提供基础。方法设计引物扩增得到青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE,将其分别与表达载体pET-22b连接,转化大肠杆菌DH5α测序,阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。检测两种重组菌的发光特性及重金属离子对其毒性影响。结果通过测定重组菌的相对发光强度(RLU)和OD600值可知:luxAB和luxCDABE重组菌在癸醛和IPTG浓度均为1μL/mL培养基里培养第1小时后达到最大RLU,值分别为750618.5和140901.5。检测重金属离子Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cr~(6+)对重组菌的毒性,EC_(50)(半有效浓度)值分别为:luxAB重组菌:5.160、5.129、7.097 mg/L;luxCDABE重组菌:6.137、7.643、7.736mg/L。结论在相同培养条件下,luxAB重组菌比luxCDABE重组菌获得了更大的RLU,说明lux AB表达效果更好。重金属对重组菌的毒性影响检测,luxAB重组菌得到了更低的EC_(50)值,进一步论证了这个观点。     

pfs基因原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

以植物乳杆菌KLDS1.0391的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增得到pfs基因,与Gen Bank中的序列对比发现同源性为99%。将目的基因与表达载体p QE-30连接,并将重组质粒p QE-30-pfs转化到E.coli M15中。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE分析,在全菌体蛋白中含有一条明显的特异性蛋白条带,大小约为27.4ku。经Ni-NTA纯化系统纯化后,在SDS-PAGE凝胶电泳图上获得纯化产物的条带。结果表明,原核表达载体p QE-30-pfs构建成功,且Pfs蛋白在大肠杆菌中成功表达,采用Ni-NTA纯化系统成功纯化了重组蛋白Pfs,为体外合成AI-2（Autoinducer-2）奠定了基础。      

重组人活性蛋白C的基因克隆、表达载体构建以及在哺乳动物细胞中的高效表达

目的研究重组人活性蛋白C的基因克隆、表达载体构建以及在哺乳动物细胞中的表达。方法用RT-PCR法从人胎肝中克隆出人蛋白C轻重链基因,用PCR突变法获得人活性蛋白C的全基因,将所得全基因连接入哺乳动物细胞表达载体,并转染293细胞研究其表达和活性。结果成功得到重组人活性蛋白C基因,并成功构建哺乳动物细胞表达载体和转染293细胞获高效表达以及相关活性数据。结论通过以上方法可以获得重组人活性蛋白C基因,并实现了在哺乳动物细胞中的高效表达。     

蓖麻毒蛋白A链基因克隆与重复表达载体构建

利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pBI-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的研究奠定基础。     

抗菌肽在大肠杆菌中融合表达的载体蛋白

抗菌肽是天然免疫系统的主要成分,能有效抵御病原微生物的侵害。目前其作为新型药物受到人们很大的关注,由于从天然资源中分离或化学合成成本较高,因此应用基因重组技术生产抗菌肽很迫切。本文主要讨论了抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达、融合表达中常用的载体蛋白及新的融合载体SUMO（小泛素修饰因子）的主要性能。     

玉米醇溶蛋白作为传递载体研究进展

玉米醇溶蛋白(Zein)是植物来源天然疏水性大分子,在纯醇水溶液中可自组装形成微球、纳米球、纳米颗粒等结构,是营养物质的良好载体。制备Zein-微胶囊的传统方法有相分离法、喷雾干燥法,新型制备方法有超临界反溶剂法、电喷雾法、静电纺丝、涂膜粉碎法等。利用Zein的结构、理化特性,通过多种方法可进行Zein微粒的制备来包埋营养物质,如油脂、多酚、益生菌及活性肽等。     

基于pyrF的乳酸乳球菌食品级表达载体的构建

基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L. lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L. lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产。首先,利用NZ3900 pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900ΔpyrF突变株;然后,分别以来源于L. lactis的repA和repC基因为复制元件、pyrF基因为筛选标记、P₃₂和P₈为启动子、以及Tusp₄₅和TpepN为终止子,构建食品级表达质粒pLD;最后以绿色荧光蛋白ZsGreen为报告基因,验证ZsGreen在NZ3900ΔpyrF突变株的表达及pLD-ZsG的遗传稳定性。实验结果表明,原养型ZsGreen阳性转化子可在普通Elliker培养基中正常生长,在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光信号;此外,PCR和Western blotting也证实ZsGreen能在NZ3900中表达且能稳定传代至30代,说明pLD食品级表达载体构建成功且使得外源蛋白在L. lactis中稳定表达。综上所述,基于pyrF营养...     

亲和-超滤载体对His标记重组AxCeSD吸附特性的研究

采用金属螯合亲和层析技术纯化了N-末端组氨酸(His)标记的重组蛋白Ax Ce SD。以2000 ku的水溶性葡聚糖Dextran T2000为基质,亚氨基二乙酸(IDA)作为螯合剂,Cu2+做亲和配基制备了能特异性吸附重组蛋白His标记的水溶性葡聚糖亲和-超滤载体,并探讨了p H、离子浓度、吸附时间以及温度等因素对水溶性葡聚糖亲和-超滤载体吸附重组蛋白Ax Ce SD的影响。结果表明,在一定范围内,随着p H和温度的升高亲和-超滤载体对Ax Ce SD吸附量增加,而随着离子浓度的增加其对Ax Ce SD吸附量减少;亲和-超滤载体对Ax Ce SD的吸附在30 min内能够达到平衡。应用Langmuir方程拟合了等温条件下亲和-超滤载体对Ax Ce SD的吸附曲线,得到最大理论吸附量为125.15 mg/g,解离常数为3.259×10-6 mol/L,说明亲和-超滤载体对His标记的重组Ax Ce SD的吸附为以螯合作用为主的特异性吸附。     

丝素蛋白基药物载体的应用研究进展

为拓展和推动丝素蛋白材料在医药领域的临床应用,综述了近年来丝素蛋白在药物递送系统中的最新研究进展,重点阐述了丝素蛋白药物递送载体的种类、制备方法、主要的药物负载类型及其应用性能。通过分析发现：丝素蛋白除具有出色的生物相容性和可控降解性外,其大分子独特的亲疏水链结构还赋予丝素蛋白聚集态结构自组装的调控基础;以丝素蛋白为基材所构建的微球、水凝胶和微针等多种形貌的药物载体表现出高效的药物负载能力和可控的释放速率,从而达到患者减少服药次数和提高治疗效率的目的。除负载小分子化学药物,丝素蛋白载体还可改善蛋白和基因类药物易降解和半衰期短的缺点。由于丝素蛋白的这些优异特性,将其用于研制靶向与特异性药物载体可实现对不同类型疾病的针对性治疗,从而提高药物利用度和降低副作用。最后指出使用丝素蛋白作为药物载体存在的问题和重要的发展方向。     

用于文库筛选的植物瞬时表达载体的构建

利用绿色荧光蛋白基因可以指示目的基因表达,因此本实验构建了含有稀有酶切位点的植物瞬时表达载体,并且目的基因和绿色荧光蛋白基因有各自独立的表达框架。目前在大果型的离体番茄果实上尚未有进行EGFP 的瞬时表达研究,本实验利用农杆菌介导的瞬时表达技术在烟草叶片和大果型离体番茄果实上瞬时表达了绿色荧光蛋白,验证了载体进行瞬时表达的可行性。     

乳酸菌质粒基因表达载体系统

乳酸菌是一类重要的工业菌株。近年来对于乳酸菌的遗传学和分子生物学的研究成为热点，并在一些方面取得了突破性成果。本文介绍了乳酸菌食品级表达载体的安全要求和食品级选择标记以及乳酸菌质粒的研究进展。     

基于支持向量机的织物悬垂性能评估分析

针对织物悬垂性评估中存在非线性建模困难及评估精度不高等问题,结合织物悬垂性参数数据的特点,基于Mercer核函数的性质,构建Mercer核函数的织物悬垂性评估模型。通过实验,认为其评估精度有了相应的提高,说明基于Mercer核函数的织物悬垂性评估模型是可行的。同时,通过改变参数值进行实验,结果表明这些参数的取值不同对评估结果有影响,且不同参数对评估结果影响的程度也不同,这对基于支持向量机的织物悬垂性评估过程有重要的指导作用。     

基于迁移学习与支持向量机的服装舒适度评估

针对传统服装舒适度评估需要直接试穿服装导致的舒适度评估精确度不高和评估过程耗时的问题,提出一种从试穿服装数据库学习服装舒适度评估模型的方法,可以快速准确地评估服装舒适度。首先,采集试衣模特尺寸和试穿样板图,并利用迁移学习改善试穿样板图构建试穿服装数据库,同时提出基于虚拟试衣技术的舒适度标签获取方法,为数据库中对应的试穿样板图添加舒适度标签;然后,提取试穿样板图的局部二值模式为服装样板特征,并融合试衣模特尺寸数据形成服装试穿特征向量;最后,提取试穿服装数据库的融合特征训练支持向量机,得到服装舒适度评估模型。实验结果表明,该方法的准确率和系统时间分别为0.8344和12 s,具有较高的精确度和效率。     

基于小波变换和矢量量化的指纹图像压缩算法

提出一种用于指纹图像压缩的矢量量化算法．该算法在对图像多级小波变换后，利用三个方向上各自小波系数之间的相关性，构造符合图像特征的跨频带矢量．并采用了基于人眼视觉特性的加权均方误差准则和基于成对最近邻算法的LBG算法进行矢量量化，提高了图像的编码效率和重构质量．仿真结果表明，该算法实现简单，在较低的编码率下，可达到较好的压缩效果．     

Rapid homogeneous immunoassay of peptides based on bioluminescence resonance energy transfer from firefly luciferase

A sensitive homogeneous immunoassay is needed in the field of clinical diagnostics. Here we propose a rapid and potentially sensitive homogeneous immunoassay of peptide epitope based on the bioluminescence resonance energy transfer (BRET). A GST peptide tag fused to the N-terminus of firefly luciferase, and Cy3 or Cy3.5-labeled anti-peptide antibody were prepared to detect BRET from the hybrid luciferase to the fluorolabeled antibody. By measuring the spectral change due to BRET, the amount of c-myc peptide was successfully determined in a short period.     

基于支持向量机的牛肉嫩度等级评价模型研究

目的 利用VIS/NIR反射光谱建立基于支持向量机的生鲜牛肉嫩度等级的评价模型。方法 以牛肉背最长肌为研究对象, 选取样本58个, 在牛肉新鲜切口处采集波长范围400~1700 nm的反射光谱信息, 使用肉类嫩度测量仪测量牛肉剪切力值, 应用支持向量机(SVM)模型评价牛肉嫩度等级。结果 应用SVM模型可以较好地实现对牛肉嫩度等级的评价。尤其是经主成分分析降维预处理, 结合径向基核函数SVM, 对牛肉训练集嫩度等级的回判率达到95%, 对样品校正集判别的准确率进一步提高至83.3%。结论 SVM模型对牛肉嫩度等级评价结果较好, 进行主成分分析后, 判别结果有所提高。     

基于支撑矢量机的织物疵点识别算法

为了使用机器对织物疵点进行有效地检测和分类,提出了基于直方图统计和支撑矢量机的织物疵点识别算法。该算法运用直方图统计的方法,由概率统计生成直方波形,基于波形特征参数对比能准确定位织物纹理结构的异常位置,正确识别织物疵点,并将其作为支撑矢量机的输入参数,用于训练特征样本集,以获得支撑矢量,对待识对象进行识别,得到识别结果,在识别结果中寻找最优匹配,将待识图像归入最匹配类中。实验结果表明,该算法用于织物疵点检测是可行、有效的,可得到满意的识别结果。     

一种基于切向量的非线性ternary插值细分法

针对光滑曲线的构造,提出了一种基于切向量的非线性ternary插值细分方法.该细分法通过沿相邻两点的切向量方向产生偏移量来计算新点,其中偏移量可由参数进行控制.文中对该细分格式的性质进行了分析.结果表明该细分格式生成的极限曲线具有G1连续性和保凸性,且在参数合适的取值范围内,极限曲线可以避免自交.     

基于近红外光谱的大米蛋白质含量快速检测

针对国标化学检测方法耗时耗力、成本昂贵的问题,分析了近红外光谱（NIRS）结合化学计量学进行大米蛋白质含量检测的可行性。基于变量选择、特征提取和非线性建模的策略,将反向区间偏最小二乘（BiPLS）与主成分分析（PCA）和支持向量机（SVM）相结合,构建了BiPLS-PCA-SVM模型,用于提高蛋白质回归模型的性能。在BiPLS-PCA-SVM模型中,将蒙特卡罗交叉验证与预测残差平方和相结合进行最佳主成分个数的选择,通过遗传模拟退火算法对模型参数进行优化。为了评估BiPLS-PCA-SVM模型的性能,建立了Full-PLS、BiPLS和BiPLS-SVM 3种模型,并系统分析了上述模型的预测精度和鲁棒性。BiPLS-PCA-SVM模型在预测蛋白质含量方面显示的性能高于其他模型,使用最佳主成分和优化后的SVM参数建立的模型具有更高的鲁棒性和准确性。对于BiPLS-PCA-SVM模型,验证集的决定系数、均方根误差和剩余预测偏差分别为0.928 9、0.196 7%和4.024 6。结果表明,NIRS与BIPLS-PCA-SVM模型相结合,可作为替代策略实现大米中蛋白质含量的快速检测。