食物中食源性病原菌检测技术研究进展

食源性病原菌的检测技术对维持我国的食品安全至关重要,目前所使用的检测技术主要包括传统的培养鉴定方法和以免疫学和分子生物学为主的快速检测方法。对以上方法的技术特点和应用情况进行综述,同时对食源性病原菌检测技术发展面临的困难和研究方法进行分析。     

食源性大肠杆菌PCR检测技术的研究进展

大肠杆菌主要附着在人或动物的肠道内,属于正常菌群。食品中检出大肠杆菌意味着食品直接或间接的受到了粪便的污染。为了保障食品的食用安全性,需要对食品中的大肠杆菌进行检测。传统的检测方法存在耗时长、灵敏度低等问题,PCR技术可以很好的解决这些问题。PCR又称作聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),该方法是在体外快速扩增特定基因或DNA序列,从而对病原微生物进行快速检测的方法。PCR技术因具有快速、特异性高、成本低等优点而广泛的应用于快速检测中。本文对应用在食源性大肠杆菌上的几种主要的PCR检测技术的研究现状进行综述。      

多重PCR技术在食源性致病菌检测中应用的研究进展

食源性致病菌的多重PCR检测技术是指能够同时扩增得到同种或多种致病菌的不同基因片段的技术。因该技术特异、灵敏且分析效率高,现已被广泛应用于食源性致病菌的检测工作中。本文介绍了多重PCR在食源性致病菌检测中应用的研究近况,并对影响因素及存在的问题进行了阐述。      

FTA滤膜与多重PCR结合检测肉中3种食源性致病菌

采用FTA滤膜从肉中直接提取模板DNA,根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的IpaB基因、福氏志贺氏菌的ipaH基因设计3对特异性引物,进行多重PCR检测.结果表明,3对引物能特异性扩增出210、280、393bp大小的目的条带;在不增菌的情况下,多重PCR同时检测肉中3种致病菌的灵敏度均为102 cfu/g,检测时间6 h.该检测方法准确、快速、高效,为同时检测肉中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、福氏志贺氏菌奠定了基础.     

多重PCR快速检测婴幼儿奶粉中的病原菌

为了建立同时检测婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌的多重PCR方法,根据阪崎肠杆菌ompA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、蜡样芽孢杆菌hblA基因分别设计3对引物进行多重PCR扩增,并对反应条件进行优化。结果多重PCR扩增出长度为514、156、235bp的特异性目的条带。不增菌的情况下,多重PCR同时检测3种病原菌的灵敏度是103cfu/mL,3种病原菌在奶粉中的检出限是104cfu/g。建立的多重PCR反应准确、快速、高效,为同时检测婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌提供了新方法。     

食源性致病菌多重PCR快速检测研究进展

食品安全问题现在备受关注,食品中致病菌的污染造成的食物中毒事件时常发生,传统的食源性致病菌检测方法操作繁琐,耗时长,未能及时检验出食品中的致病菌,这些缺点限制了此方法的广泛应用。聚合酶链式反应(PCR)满足了快速检测致病菌的要求。主要介绍多重PCR快速检测食源性致病菌的原理、特点、检测体系的组成及其应用。多重PCR具有特异性强、灵敏度高、操作简便、可同时检测多种致病菌的优点,同时多重PCR技术可结合荧光定量PCR、基因芯片技术等建立一个更加完善的体系。     

食品中病原菌检测技术研究进展

介绍了许多食品安全检测新技术和新方法,包括生化检测技术、免疫学技术、PCR检测技术、生物芯片技术、传感器技术、流式细胞术和基因探针技术,并且阐述了食品安全检测技术的发展趋势,这些技术的发展将会在食品卫生检验方面起到越来越重要的作用,最终将达到预防肠道传染病和食物中毒发生的目的。     

食源性致病菌多重PCR快速检测研究进展

食品安全问题现在备受关注,食品中致病菌的污染造成的食物中毒事件时常发生,传统的食源性致病菌检测方法操作繁琐,耗时长,未能及时检验出食品中的致病菌,这些缺点限制了此方法的广泛应用。聚合酶链式反应（PCR）满足了快速检测致病菌的要求。本文主要介绍了多重PCR快速检测食源性致病菌的原理、特点、检测体系的组成及其应用。多重PCR具有特异性强、灵敏度高、操作简便、可同时检测多种致病菌的优点,同时多重PCR技术可结合荧光定量PCR、基因芯片技术等建立一个更加完善的体系。     

不对称PCR技术及其在食源性致病菌检测中应用的研究进展

不对称PCR技术是获取单链DNA的一种重要方法。将不对称PCR技术与常用核酸检测方法结合,具有较高的灵敏度和较强的特异性,已被广泛应用食源性致病菌检测中。本文对不对称PCR技术进行简介,综述近年来其在食源性致病菌检测中的应用概况,并对其存在的问题进行了简单阐述。      

噬菌体在检测食源性病原菌中的应用研究进展

食源性病原菌是导致食源性疾病的主要原因之一,现代食品工业的迅猛发展对食品中病原菌的快速检测提 出了更高的要求。噬菌体作为地球上种类最丰富的微生物之一,能够侵染细菌。研究表明,噬菌体不仅具备结构简 单、特异性强、价格低廉等特性,而且具有能够区分活细菌和死细菌的能力,以及容易与其他传统检测方法相结合 等优势,噬菌体及其产物为食源性病原菌的检测提供了新的思路。近年来,噬菌体与免疫学、分子生物学和纳米科 学等学科结合形成的新型快速检测方法已成为国际研究热点。本文就噬菌体检测食源性病原菌的原理及应用进行分 类综述和分析。     

双正交优化多重PCR检测食源性致病菌的研究

为了建立快速检测食源性致病菌的多重PCR检测方法,根据沙门氏菌fimY基因、单增李斯特氏菌hlyA基因和小肠结肠炎耶尔森氏菌ail基因设计3对特异性引物,利用双正交法分别对多重PCR反应体系中的3对引物比进行L9(33)正交优化和Taq酶、dNTPs、镁离子、混合引物的添加量进行L16(44)正交优化,并对Buffer的反应浓度进行优化。结果扩增出了3条特异性目的条带,建立的多重PCR方法具有很好的特异性。人工污染食品,9h富集培养增菌后的检出限可达100cfu/g。因此,该检测方法具有较强的实际应用价值,为检测多种食源性致病菌提供了有效的方法参考。     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法 本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立鸭源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。     

Semiquantitative detection of male pork tissue in meat and meat products by PCR

Consumer awareness has increased concerning castration of piglets without analgesia or anaesthesia. On the other hand the occurrence of boar taint is not tolerated by consumers. Currently no reliable methods exist for the on-line detection of boar taint in the slaughterhouse or for genetic sexing of pigs. Therefore, as an alternative the detection of male pork meat was sought. Based on detection of a length polymorphism of the sex chromosomal amelogenin gene a reliable, specific and highly sensitive PCR method for qualitative and semi-quantitative determination of male pork tissue in meat and meat products was determined. A set of 25 male and 25 female meat samples could be correctly identified and mixtures with as little as 0.1% male meat content could be detected. Therefore the method can be used for production and control of specific meat products containing low amounts of male pork meat and thus avoiding boar taint.     

实时荧光定量PCR技术在肉及肉制品中的应用

实时荧光定量PCR技术作为一种DNA定量检测的工具,可应用于肉制品种类鉴别和定量分析中。相比于传统感官和理化的鉴别方法,该技术具有灵敏性高、特异性强、操作简便、省时省力等特点。使用Taq Man荧光探针和荧光染料可以直接测定PCR循环后产物的总量,确定扩增DNA片段的种类及数量,从而确定肉品种类及添加量。因此,可以将该技术应用到肉制品成分及安全的检测中。本文介绍了实时荧光定量PCR技术的基本原理,主要综述了该技术在肉品种类鉴定方面的应用,简述其在肉制品细菌污染检测的应用,并对该技术在肉类研究中的应用进行展望。      

Quantitative detection of soybean in meat products by a TaqMan real-time PCR assay

In the present work, we propose a normalised real-time quantitative PCR assay to determine the addition of soybean to meat products. The method proved to be a powerful tool for the quantification of soybean protein (dry basis) in the range of 0.01% to 6%, being successfully in-house validated. Its application was effective in the analysis of several meat products, indicating 2% of non-compliance with the food allergen labelling legislation, and some inconsistencies when comparing the declared with estimated amounts of soybean. This work highlights the importance of efficient tools to assess labelling statements of meat products, avoiding fraudulent practices.     

食源性人兽共患病病原检测方法研究进展

食源性人兽共患病是指摄入被人与脊椎动物共同病原微生物污染的食物后,在人与脊椎动物之间相互传播的疾病.随着饮食习惯及畜牧业的发展,食源性人兽共患病对食品安全、人类公共卫生安全及畜牧业的持续发展发起了更加严峻的挑战.近几年全球范围内食源性人兽共患病的传播,正是由人类的不良饮食习惯、对人与自然和谐共处意识的缺乏、对公共卫生风...     

应用PCR技术快速检测禽肉中弯曲菌

采集超市、农贸市场生鸡、鸭肉样品,通过弯曲菌富集培养基培养48h,应用PCR技术进行弯曲菌的检测。结果显示,169份禽肉样品中分离出42株弯曲菌,阳性检出率为24.85%,表明市售禽肉中有不同程度弯曲菌的污染,且存在弯曲菌病的可能性。PCR技术对弯曲菌的检测具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点。     

PCR法快速检测三种食源性致病菌的研究

目的 探讨用PCR方法快速检测食品中沙门氏菌(Salmonella spp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和志贺氏菌(Shigella spp.)的实用性。方法 采用能力验证实验和超市样品检测实验对PCR方法与传统检测方法进行比较。结果 与传统检测方法相比, PCR方法检测以上三种食源性致病菌的结果准确率达到99%以上, 假阳性率低于1%, 假阴性率为0。结论 PCR检测方法具有检测周期短等优点, 可以在当前的食品安全检测工作中应用推广。     

干燥型荧光PCR试剂盒检测食源性致病菌研究

目的研究干燥型荧光PCR试剂盒检测副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单增李斯特菌3种食源性致病菌的灵敏度、特异性和检测人工污染样品情况。方法目标菌和非目标菌接种至血平板, 36℃培养过夜,目标菌比浊至0.5 McF(麦氏单位), 10倍连续稀释后提取DNA,进行灵敏度研究;非目标菌直接提取DNA后检测,进行特异性研究;用高、中、低3个浓度目标菌液人工污染食品样品,按国标方法培养后用干燥型荧光PCR试剂盒检测。结果副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单增李斯特菌的最低检测浓度分别为140、380和7900 CFU/mL。3种目标菌人工污染食品样品的最低检测浓度分别为1.2 CFU/25 g、5.1CFU/25 g、10 CFU/25 g。每种试剂盒仅对目标菌株的检测结果呈阳性,非目标菌株均呈阴性。结论新型干燥型荧光PCR检测试剂盒具有较好的灵敏度和良好的特异性,适用于食品中副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单增李斯特菌的检测。     

基于实时荧光PCR对肉制品中羊肉的精确定量

该研究将实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescence quantitative PCR,r PCR)与微滴式数字PCR技术(micro-droplet digital PCR,dd PCR)相结合,利用dd PCR建立拷贝数和羊肉质量的函数关系,确立了基于r PCR定量检测羊肉含量的方法。特异性实验结果表明,除绵羊和山羊外,非目标物种DNA未出现特异性扩增;灵敏度实验结果表明,该方法的最低检出限为0. 01 ng/μL;通过对已知成分的混合样品和市售样品的检测表明,该方法能够对含量在5%以上的羊肉进行准确定量。因此,该方法在肉制品中羊肉含量检测和掺假鉴别方面具有较好应用潜力。