双酶级联生物合成D-赖氨酸

建立了氨基酸消旋酶和赖氨酸脱羧酶双酶级联高效生产D-赖氨酸的方法。利用氨基酸消旋酶全细胞催化消旋L-赖氨酸得到DL-赖氨酸,去除氨基酸消旋酶后再加入赖氨酸脱羧酶,将消旋产物中的L-构型脱羧生成1,5-戊二胺和CO2,剩下D-赖氨酸;最终,通过阳离子交换树脂吸附洗脱得到D-赖氨酸。经考察双酶级联催化的最佳条件为:反应温度40℃,0.2 mol/L磷酸钾缓冲溶液(p H=5.8),底物L-赖氨酸质量浓度为50 g/L,氨基酸消旋酶全细胞和赖氨酸脱羧酶全细胞质量浓度均为10 g/L,4 mmol/L磷酸吡哆醛,0.1 g/L Triton X-100,反应时间12 h,其中消旋反应2 h和脱羧反应10 h,最终D-赖氨酸收率达42%,对映体过量值(e.e.值)=98%。     

青霉素酰化酶法制备D-丙氨酸

报道了青霉素酰化酶法制备D-丙氨酸的研究结果,为D-丙氨酸的制备提供了一种方法。考察了pH、温度、DL-丙氨酸与苯乙酰氯的摩尔比、反应时间对制备结果的影响。确定了制备N-苯乙酰-DL-丙氨酸的最佳反应条件:pH=9.5,n(DL-丙氨酸)∶n(苯乙酰氯)=1.1∶1;酶促反应最佳条件为:pH=7.5,温度37℃条件下反应6h,其产物为N-苯乙酰-D-丙氨酸和苯乙酸的混合物。该混合物用c(HC l)=6 mol/L的盐酸高温回流6 h得D-丙氨酸盐酸盐,再经717阴离子树脂处理得D-丙氨酸。光学纯度为95.3%,总收率为72.5%。     

精氨酸酶转化生产D-精氨酸和L-鸟氨酸

以L-精氨酸为原料,经水杨醛催化消旋反应得到DL-精氨酸,在精氨酸酶的作用下,定向地将L-精氨酸转化为L-鸟氨酸和尿素,并经进一步分离纯化得到D-精氨酸和L-鸟氨酸盐酸盐。该文通过水杨醛对L-精氨酸进行消旋化,反应2.5 h,消旋率可达74.5%;同时,对L-精氨酸酶促反应条件进行了优化,结果表明,最佳反应条件为:37℃,pH=10,反应时间24 h,底物质量浓度40 g/L,酶质量浓度0.2 g/L,在该条件下转化率可达98.0%。经该法制备得到的产物D-精氨酸和L-鸟氨酸盐酸盐纯化后光学纯度可达99.0%。     

巨大芽孢杆菌酶法转化制备D-苯丙氨酸

以DL-苯丙氨酸为底物,利用巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)AS1.127苯丙氨酸脱氨酶光学异构选择性,仅对L-苯丙氨酸专一氧化脱氨,而不作用于D型,从而高效制备D-苯丙氨酸。考察了影响酶促反应的几种因素,得到了最佳酶促反应条件,结果表明,该转化反应最适温度37~40℃。最适pH 5.8,0.2%磷酸缓冲液可提高脱氨酶活力,在反应液中加入表面活性剂0.2%吐温-80或10-5mol/L K 能显著提高脱氨酶活力。转化率与底物浓度、菌体用量有关,在此反应体系中,底物DL-苯丙氨酸浓度0.09 mol/L,菌体用量0.03 g/mL,转化时间18 h,L-苯丙氨酸转化率最高达98%以上。转化液经脱色、减压浓缩和等电点结晶后得D-苯丙氨酸,比旋光为[a]2D0= 32.4°,光学纯度达到95%以上。     

双酶偶联生物合成L-酪氨酸

多酶偶联催化是酶法制备手性药物中间体的重要方法之一。该文采用双酶偶联体系,利用天冬氨酸转氨酶全细胞催化L-天冬氨酸转氨至苯丙酮酸,生成L-苯丙氨酸,同时得到中间产物丙酮酸;反应体系中的酪氨酸酚裂解酶全细胞催化丙酮酸、苯酚和氨酶法合成L-酪氨酸。经考察确定了双酶偶联反应的最佳条件为:温度40℃,pH=8.5,底物苯丙酮酸质量浓度为25 g/L,苯丙酮酸与L-天冬氨酸摩尔比1∶1.2,天冬氨酸转氨酶与酪氨酸酚裂解酶细胞质量比1∶1,4 mmol/L PLP,0.1 g/L吐温80。30 g/L的氯化铵对双酶偶联反应有促进作用。双菌双酶偶联生物法合成L-酪氨酸,充分利用了反应副产物丙酮酸得到附加值较高的产品,对资源合理利用及绿色合成工艺具有参考意义。     

与环境友好的化学-生物法制备D-精氨酸和L-瓜氨酸

L-精氨酸在水溶液中利用自身所产生的碱性溶液,用n(水杨醛):n(1-精氨酸)=0.1:1的水杨醛为催化剂,L-精氨酸可以快速消旋为DL-精氨酸.后以DL-精氨酸为底物,利用粪链球菌(streptococcus faecalis)精氨酸脱亚胺酶对L-精氨酸的专一脱亚胺作用,同时制备D-精氨酸和L-瓜氨酸,分别以92.3%、94.2%产率获得光学纯的D-精氨酸和L-瓜氨酸.     

色氨酸酶重组基因表达及其酶法合成L-色氨酸

为实现色氨酸酶高效、低成本催化合成L-色氨酸,利用p ET30a为载体在宿主细胞E.coli BL21(DE3)中重组表达了产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)来源的色氨酸酶,以丙酮酸、吲哚和氨为底物,探究其酶学性质,考察了反应温度、起始p H、底物摩尔比对酶促反应的影响,并利用丙酮酸发酵液为底物酶法合成L-色氨酸。结果表明,色氨酸酶重组表达成功,色氨酸酶最佳反应条件为:温度35℃,起始p H=9.0,底物摩尔比n(吲哚)∶n(丙酮酸)=0.6∶1,底物丙酮酸浓度为0.17 mol/L。利用重组色氨酸酶全细胞催化100 m L浓度为0.57 mol/L丙酮酸发酵液,流加浓度为4.27 mol/L吲哚酒精溶液6.5 m L,反应28 h后,L-色氨酸浓度达0.25 mol/L,吲哚摩尔转化率达91.8%。     

氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸

用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:pH=7.5,温度50℃,反应时间6h,Co2+离子浓度5×10-4mol/L,在该条件下,D-丙氨酸产率为87.2%,光学纯度为98.0%。     

三酶偶联全细胞生物合成L-酪氨酸

通过将醛缩酶(ALD)、D-丝氨酸脱水酶(SDH)和酪氨酸酚裂解酶(TPL)三酶偶联,催化甘氨酸、甲醛和苯酚合成L-酪氨酸(L-Tyr)。并以L-Tyr的质量浓度为指标对转化工艺进行了考察。结果表明:三酶偶联最佳反应条件为pH=8.5、温度35℃、乙酸铵质量分数6 g/L、磷酸吡哆醛(PLP)质量浓度0.1 g/L、3种酶细胞配比m(ALD)∶m(SDH)∶m(TPL)=6∶3∶5。当甘氨酸加量为50 g/L,利用上述工艺进行10000 L放大,反应11 h,L-Tyr质量浓度可达117 g/L,苯酚转化率为97%,转化体系放大后苯酚转化率提高4%,收率为85%。     

Bacillus subtilis NX-2合成g-聚谷氨酸的立体构型调控机理

探讨了在Bacillus subtilis NX-2发酵生产g-聚谷氨酸(g-PGA)过程中，Mn2+对g-PGA结构中D-和L-谷氨酸组成的影响及其与催化L-谷氨酸生成D-谷氨酸的两个相关酶?谷氨酸消旋酶和D-氨基酸转氨酶之间的关系. 当Mn2＋浓度由0增加到0.09 g/L时，D-谷氨酸比例从18%增加到77%；谷氨酸消旋酶活性从0.200 U/mg变为0.441 U/mg，提高了1倍多，D-氨基酸转氨酶活性则几乎没有变化. 说明谷氨酸消旋酶参与了L-到D-谷氨酸的转化过程，且Mn2+是通过改变谷氨酸消旋酶的活性来调节产物g-PGA的立体组成的，这与目前报道的枯草芽孢杆菌合成g-PGA过程中Mn2+浓度与g-PGA中D-, L-构型比无关的结果不同. 当Mn2＋浓度为0.03 g/L时，发酵过程中生成的g-PGA中D-谷氨酸比例不变，维持在75%左右.     

天冬氨酸酶基因工程菌固定化细胞制备L-天冬氨酸合成条件优化

以反丁烯二酸和氨水为原料,采用天冬氨酸酶基因工程菌固定化细胞生物催化法合成L-天冬氨酸。通过响应面法考察反丁烯二酸浓度、温度、p H对合成L-天冬氨酸的影响。结果表明,固定化天冬氨酸酶基因工程菌合成L-天冬氨酸最佳条件为:底物反丁烯二酸的质量浓度为300 g/L,反应温度为37℃,底物p H为7.5,L-天冬氨酸的产率为96.7%。固定化细胞可连续使用10批次。通过电镜观察发现天冬氨酸酶基因工程菌均匀分布于载体,天冬氨酸酶基因工程菌固定化细胞具有良好的稳定性。     

聚天冬氨酸的合成与表征

以L-天冬氨酸为原料,热缩合成聚天冬氨酸酐,水解得到聚天冬氨酸。采用凝胶色谱法(GPC)测定了聚天冬氨酸的分子量,并用核磁共振(NMR)对其进行了表征。     

二次正交旋转组合设计优化腐植酸液肥饱和溶解复配工艺的研究

用腐植酸钠、尿素、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等原料,采用回归旋转组合设计对腐植酸液肥饱和复配进行调整,以期提高腐植酸液肥中腐植酸和营养元素的含量。试验结果表明,饱和复配腐植酸液肥其营养元素总量（N-P2O5-K2O）稳定在350.25g/L以上的组合方案为：配置100mL液肥,需质量分数为50%腐植酸钠30.98～33.87mL,磷酸二氢钾15.34～16.51g,尿素48.89～50.22g,磷酸氢二钾12.75～16.08g。     

高效液相色谱测定氰乙酸的含量

采用高效液相色谱法以C18柱(phenom enonex C18色谱柱250mm×4.6mm,4μm)为色谱柱对样品中氰乙酸的含量进行定量分析。实验条件:流动相为0.02mol/L磷酸二氢钾水溶液-甲醇(体积比90:10),用磷酸调溶液PH至2.0;检测波长228nm;流速1.0mL/min;进样量20uL。结果表明,本方法的线性相关性系数为0.9999,标准偏差为0.20,变异系数为0.21%,平均回收率为99.78%。     

腐植酸钠-丙烯酸接枝共聚物的合成研究

采用水溶液聚合方法,以过硫酸钾为引发剂,腐植酸、丙烯酸为原料接枝共聚。考察了丙烯酸中和度、引发剂用量、物料比、反应温度和反应时间等因素对合成腐植酸钠-丙烯酸接枝共聚物的影响。结果表明,最佳聚合工艺条件为：丙烯酸中和度90%,反应温度60℃,反应时间8h,加入引发剂浓度为4.0%（AA单体为参照）,丙烯酸与腐植酸钠物料比...     

聚天冬氨酸膜修饰电极测定茶饮料中茶多酚

在0.025 mol/L、pH 6.8Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液中,采用电聚合方法将天冬氨酸修饰到玻碳电极表面,此氨基酸聚合膜修饰电极通过氢键作用有效地提高了荼多酚在电极表面的吸附浓度,显著提高了茶多酚的电化学信号强度.研究了pH、富集时间和扫描速度等因素的影响,建立了水溶液中荼多酚的快速检测方法.在0.9...     

胶束电动色谱在线Sweeping技术测定化妆品中水杨酸

采用在线富集Sweeping技术建立了胶束电动色谱法测定化妆品中水杨酸含量的方法,考察了缓冲溶液pH值、SDS浓度、进样时间和样品基体组成对富集效果的影响。结果表明,在电泳缓冲溶液为15mmoL/L磷酸盐+30mmoL/L十二烷基硫酸钠(PH=7.00),紫外检测波长214nm,分离电压18KV时,富集倍数可达700倍以上。本方法不需复杂的样品预处理,操作简单,快速,成本低,在快速分离与检测方面有很好的应用前景。     

反相高效液相色谱法测定苹果醋中的有机酸

用反相高效液相色谱法测定了苹果醋饮料、苹果原醋等样品中的主要有机酸含量。通过C18柱进行分离和测定,以0.01 mol/L磷酸氢二铵-磷酸缓冲溶液作流动相,流速1.0 mL/min,紫外检测器210 nm处进行检测。实验表明,苹果原汁中的有机酸含量最高,样品回收率为90.8%～99.5%之间。证明该方法的准确性较高,完全适用于苹果醋中有机酸的检测分析。     

分光光度法测定药物制剂中抗坏血酸的含量

建立了一种简单、灵敏检测抗坏血酸的分光光度新方法.研究表明,酸性介质中,抗坏血酸可将铁(Ⅲ)还原成铁(Ⅱ),生成的铁(Ⅱ)可与铁氰化钾生成蓝色的复合物,其最大吸收波长为698 nm.抗坏血酸的浓度在0.21～ 18.00 mg/L范围内与吸光度呈良好线性关系,线性方程为A=0.293 8ρ - 0.010 8 (mg/...