泥鳅肉酶解物对羟自由基的清除作用

为了探讨深度开发泥鳅蛋白制备功能性肽的可能性,采用比色法研究泥鳅肉酶解物对Fenton 体系产生的羟自由基的清除效果,从复合风味蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶5 种酶中,筛选出菠萝蛋白酶作为酶解泥鳅肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适宜水解酶。用响应面分析法(RSM)对该酶的酶解条件进行优化,并采用Sephadex G-15 凝胶层析测定最佳酶解条件下制得的酶解液中活性肽的相对分子质量分布。结果表明,菠萝蛋白酶的最佳酶解条件为：固液比1:4、加酶量0.2%、pH6.47、温度54.48℃、酶解时间59.97min,酶解物对羟自由基的清除率为99.03 %,IC50 值为0.57mg/mL。酶解液中活性肽的相对分子质量范围为1129～2344。     

酶解双孢菇蛋白制备抗氧化肽的研究

为建立木瓜蛋白酶酶解双孢菇蛋白制备抗氧化肤的最优工艺,采用响应面分析法研究酶解时间、酶与底物比([E]/[S])和酶解温度对工艺的影响.以羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2ˉ·)的清除率为响应值,最终确定酶解双孢菇蛋白制备抗氧化肽的最佳条件是:时间4.11 h,[E]/[S] 3.79％,温度54.76℃.在此条件下酶解液的·OH清除率和O2ˉ·清除率分别为89.61％和60.63％,与理论预测值90.41％和61.43％的相对误差均在1％以内,说明所建模型具有较好的拟合性.酶解液抗氧化肽经Sephadex G-50凝胶层析法分析,相对分子质量主要分布在600～2600之间.     

鲤鱼肉酶解物清除羟自由基的研究

通过测定鲤鱼肉酶解物对Fenton体系产生的·OH的清除效果,从木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶和复合风味蛋白酶中,筛选出复合蛋白酶作为酶解鲤鱼肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的水解酶.用响应面分析法(RSM)对该酶的水解条件进行优化,得到最佳酶解条件为:温度55℃、酶解时间1.5 h、pH=6.5、酶加量为250 U/g底物、底物质量分数为25%,在此条件下酶解物的水解度为4.5%.利用Sephadex G-15凝胶层析测定酶解物分子量分布,结果显示,活性肤分子量为477 u～1 058 u.     

酶解鱼鳞蛋白制备抗氧化肽的研究

以鱼鳞蛋白为原料,采用Neutrase蛋白酶酶解鱼鳞蛋白制备抗氧化活性肽,结合单因素实验筛选关键因子,通过响应面分析法,以·OH自由基的清除率为响应值,确定制备鱼鳞抗氧化活性肽的最佳工艺条件为:酶解时间5h、酶解温度50℃、底物浓度5.51%、pH5.64、酶用量4.12%,该务件下得到的鱼鳞抗氧化活性肽对·OH的清除率达78.82%.     

鱿鱼酮体酶解液抗氧化活性研究

以秘鲁鱿鱼酮体为原料,制备稀释的匀浆液.使用721分光光度计检测吸光度,对4种蛋白酶作用后的酶解液进行清除羟自由基(·OH)能力研究.结果表明:鱿鱼匀浆经酶解后,清除羟自由基能力显著提高;不同蛋白酶的酶解液对羟自由基清除率不同,其中木瓜蛋白酶酶解液清除能力最强.通过单因素试验与正交优化试验确定酶解液具有最 佳抗氧化性的酶解条件,底物浓度为4%,木瓜蛋白酶用量为18000U/g蛋白质,酶解温度65℃,pH=8,作用时间为0.5 h的鱿鱼酮体匀浆酶解液具有最高的清除羟自由基活性.验证实验显示在该条件下羟自由基清除率可达29.92%.方差分析结果表明温度、pH值、酶添加量以及底物浓度4种因素对于羟自由基(·OH)清除率影响差异均极显著.     

杏仁蛋白酶解工艺以及抗氧化活性研究

以提取精油后的杏仁渣为原料,烘干挥发尽有机溶剂后,制备匀浆液.使用722型分光光度计检测吸光度,对4种蛋白酶作用后的酶解液进行清除羟自由基(·OH)能力研究.结果表明:脱脂杏仁匀浆液经酶解后,清除羟自由基能力显著提高;不同蛋白酶的酶解液对羟自由基清除率不同,其中碱性蛋白酶酶解液清除能力最强.通过单因素试验与正交优化试验确定酶解液具有最佳抗氧化性的酶解条件.极差分析结果显示,影响杏仁水解液抗氧化性的酶解工艺条件的主次顺序依次为温度、底物浓度、酶添加量、初始pH值.方差分析结果表明在试验设计范围内,温度、pH值、酶添加量以及底物浓度4种因素对于羟自由基(·OH)清除率影响差异均极显著.杏仁蛋白水解液具有最高抗氧化活性的酶解工艺条件为,底物浓度2.5%,碱性蛋白酶用量20000 U/g以蛋白质计,酶解温度70℃,pH=9,作用时间0.5 h.验证试验显示在该条件下羟自由基清除率可达63%.     

鸡肉蛋白的酶解特性及酶解产物的抗氧化性研究

利用碱性蛋白酶(Alcalase)酶解鸡肉蛋白,在单因素的基础上,运用响应面(RSM)以水解度为响应值对最佳工艺进行分析,探讨最佳酶解条件.结果表明:各因素对提高水解度的重要性依次为酶的添加量>酶解温度>酶解时间＞液固比;最佳实验条件为:酶的添加量5μL/g(鸡肉)、反应时间5h、温度47.3℃、pH=8.5、液固比=5,此时水解度为25.53%.对不同水解度的酶解液进行羟自由基(·OH)清除能力和抗氧化能力(AOV)研究,发现酶解产物具有明显的清除羟自由基(·OH)活性和较大的抗氧化能力(AOV),且在一定范围内抗氧化活性随着水解度的增加而增大.     

松仁肽的制备及抗氧化活性研究

以松子分离蛋白为原料,水解度为评价指标,通过单因素和响应面法优化松仁肽的酶解工艺,并以羟自由基清除能力和DPPH清除率评价松仁肽的抗氧化活性。试验结果表明,松仁肽制备的最佳工艺条件为酶解温度52℃、底物浓度3.2%,pH 9.1,酶解时间3 h、加酶量9 000 U/g。在此酶解条件下,水解度可达0.329 7。制备的松仁肽在浓度24 mg/mL时能清除全部羟自由基;在10 mg/mL时对DPPH的清除率达到75%。此时的松仁肽表现出一定的抗氧化活性。     

大豆11S球蛋白水解肽的制备及抗氧化研究

以大豆11S球蛋白为原料,通过胰蛋白酶水解制备活性肽,在单因素试验的基础上,采用响应面法确定最佳酶解条件,并检测大豆肽溶液的体外抗氧化性。结果表明,底物浓度2 mg/mL时的最佳水解条件为:酶和底物比4 900 U/g,pH8.1,温度44℃,水解时间2.6 h,此条件下经验证试验得到大豆肽的水解度为89.25%。大豆肽溶液对超氧阴离子自由基(O_2~-·)和羟自由基(·OH)都具有良好的清除效果,随着大豆肽溶液浓度的增加,O_2~-·和·OH的清除率也随之增加。当肽液浓度为12 mg/mL时,对O_2~-·的清除率最高达到46.86%;当肽液浓度为0.5 mg/mL时对·OH的清除率最高,达到33.73%。     

鱿鱼肌肉蛋白肽的制备工艺优化及其抗氧化活性

以鱿鱼肌肉为原料,先考察了酶解时间、温度和加酶量对鱿鱼蛋白肽清除羟自由基的影响,再采用BoxBehnken实验设计和响应面分析对鱿鱼肌肉酶解工艺条件进行优化。同时采用清除自由基和小鼠体内抗氧化活性对抗氧化肽的抗氧化活性进行了研究。结果表明:酶解时间、加酶量对羟自由基清除率影响最为显著(p0.01),最佳工艺条件为:酶解时间6 h,加酶量0.07 g/10 g,酶解温度55℃。在该条件下,羟自由基清除率的验证值为90.31%±0.54%。鱿鱼抗氧化肽对DPPH·、OH·和O-2·的EC50分别为8.8、16.5和10.3 mg/m L。鱿鱼抗氧化肽高低剂量组的小鼠体内SOD活性分别比空白组高19.2%和14.2%。抗氧化肽高低剂量组小鼠体内的GSH比空白组提高了23.4%和14%。鱿鱼抗氧化肽具有较强的抗氧化活性。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

基于乳清蛋白粉水解产物抗氧化活性优化酶解工艺

通过提高乳清蛋白粉水解产物(Whey protein powder hydrolysate,WPPH)的抗氧化活性,对乳清蛋白粉的酶解工艺进行优化。首先以WPPH水解度及抗氧化活性(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、羟自由基清除率、总抗氧化能力)为指标,从4种蛋白酶中筛选得到酶解效果较好的胰蛋白酶和菠萝蛋白酶。然后通过单因素与正交试验确定双酶协同水解乳清蛋白粉的最适酶解条件。结果表明:复合酶最优酶解条件为菠萝蛋白酶和胰蛋白酶以1:1的比例同时添加,pH6.0、温度50℃、酶底比0.3%、底物浓度3 g/100 mL、酶解时间2.5 h,在此条件下WPPH水解度达到34.24%,分子量低于1000 Da的肽段占比在50%以上,DPPH自由基清除率91.42%±0.51%、羟自由基清除率80.85%±0.47%、总抗氧化能力(46±0.65)μmol/L。在本研究确定的酶解工艺条件下,乳清蛋白粉水解产物具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

黑蚂蚁蛋白的酶解优化及抗氧化肽的超滤膜分离

本文研究了酶量、温度、pH和时间四个因素对黑蚂蚁蛋白的碱性酶法水解的影响。通过响应面设计,以各个抗氧化活性为指标,优化了超氧自由基清除率,DPPH自由基清除率,羟基自由基清除率,还原力和亚油酸自氧化抑制作用最强的酶解工艺条件。验证实验证实方程的准确率达95%以上。采用超滤膜及离子交换色谱对酶解产物进行了分离,发现5-10 kDa和1-3 kDa组分的抗氧化能力最强,碱性肽对超氧自由基清除能力、羟基自由基清除能力、亚油酸自氧化抑制作用贡献较大,酸性肽对DPPH自由基清除能力及还原力的贡献较大。     

奇亚籽蛋白酶解制备抗氧化肽的工艺优化

以奇亚籽粗蛋白为原料,酶解法制备抗氧化肽并通过响应面法优化工艺。同时以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基清除率为指标,通过单因素试验,筛选最佳酶并考察加酶量、pH值、时间、温度等对产物抗氧化能力的影响。在单因素试验基础上,通过响应面分析法对酶解工艺进一步优化,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。结果表明:中性蛋白酶为最适酶,酶解最佳工艺为:加酶量3170 U/g,pH 6.9,酶解时间4.9 h,酶解温度50℃,此时DPPH自由基和羟基自由基清除率分别为54.90%、41.03%,与理论值无显著差异,回归模型较可靠,抗氧化能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)值为(0.53±0.03)μmol TE/mg,表明奇亚籽抗氧化肽具有良好的抗氧化活性。     

基于Plackett-Burman设计和响应面法优化羊肝抗氧化肽的制备工艺

以羊肝为原料,分别测定5种蛋白酶酶切羊肝所得的酶解液的羟基自由基清除率和肽得率。结果表明,风味蛋白酶羟自由基清除率（84.50%）和肽得率（22.49%）最好。在单因素试验基础上,以羟基自由基清除率为评价指标,采用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,羊肝抗氧化肽制备的最佳酶解条件为料液比1∶3（g∶mL）、加酶量2 400 U/g、酶解温度50 ℃、pH7.50、酶解时间2.8 h。在此优化条件下,测得实际羟自由基清除率为93.70%,与模型理论值相接近。羊肝酶解产物中总氨基酸含量为57.23 g/100 g,其中疏水性氨基酸和必需氨基酸占总氨基酸含量分别为46.47%和41.63%,表明以风味蛋白酶酶解羊肝产物具有较高的抗氧化活性和营养价值。     

响应面优化虾头壳酶促水解清除DPPH自由基活性的研究

以碱性蛋白酶水解虾头壳蛋白质,在影响水解条件单因素研究基础上,采用响应面方法中心组合设计,建立以DPPH自由基清除率为指标的水解模型,优化得出最佳酶解条件,并测定水解液中多肽的相对分子质量分布。结果表明,最佳酶解条件为pH7.2、温度50.5℃、加酶量415U/g、时间120min。在此条件下水解,水解度达21.8%,DPPH自由基清除率为66.9%,平均肽段长度为4.6,酶解液中大部分肽的相对分子量低于6500u。     

复合酶制备鱼蒸煮液水解肽及其抗氧化活性研究

目的:研究鳀鱼蒸煮液的最佳酶解工艺条件,并分析所制备水解肽的分子量分布和抗氧化特性。方法:以三氯乙酸氮溶解指数(Trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI)为酶解效率的评价指标,在单因素实验基础上,运用中心组合设计法优化水解肽的制备工艺,并对酶解产物的分子量分布及抗氧化活性进行分析。结果:鳀鱼蒸煮液的最佳酶解条件为酶解时间45 min、酶解温度54.5 ℃、酶解pH8.2、碱性蛋白酶与中性蛋白酶比例1:1,在此条件下TCA-NSI可达76.51%。所制备的水解肽中分子量低于1500 Da的多肽含量可达81.941%。水解肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率的IC₅₀分别为2.45、1.37和3.45 mg/mL,表明其具有较强的抗氧化活性。结论:采用复合酶法可高效酶解鳀鱼蒸煮液,并获得具有较强抗氧化活性的水解肽,可为鳀鱼蒸煮液高值化利用及活性肽产品开发提供理论依据。     

亚麻籽粕抗氧化肽制备工艺的响应面法优化

以亚麻籽粕蛋白为原料,酶解制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为实验指标,通过单因素实验,筛选最佳蛋白酶并考察底物浓度、酶添加量、温度、pH及时间等对酶解物抗氧化能力的影响。在单因素实验基础上,采用响应曲面法进行酶解工艺条件的优化。结果表明:采用胰蛋白酶作为最适酶,酶解的最佳工艺条件为:底物浓度2%,温度37 ℃,酶解时间3.00 h,加酶量为4000 U/g,pH8.5,在该条件下,1 mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率及超氧阴离子自由基清除率分别为(63.64%±0.023%)和(19.98%±0.098%),0.5 mg/mL酶解产物的ABTS自由请清除率为(88.11%±0.059%)。说明亚麻籽粕抗氧化肽具有良好的抗氧化活性。     

体外消化对金瓜籽抗氧化肽抗氧化活性的影响

本实验以金瓜籽为原料,以还原力、羟自由基清除率、DPPH自由基清除率为考察指标,采用响应面试验探讨了制备金瓜籽抗氧化肽的工艺参数,并研究了其经体外模拟人体胃肠道消化后的游离氨基酸组成、分子质量分布及抗氧化活性变化。结果表明：制备金瓜籽抗氧化肽的最优工艺条件为底物（金瓜籽粕）质量分数为6%、添加碱性蛋白酶3%、在pH?8.5的体系中55?℃酶解90?min,此条件下所得羟自由基清除率、DPPH自由基清除率、还原力分别为（58.19±0.80）%、（60.27±1.73）%和0.49±0.01;分子质量小于3?kDa、3～5?kDa及大于5?kDa的抗氧化肽经体外模拟胃肠道消化后分别含游离氨基酸41.72%、36.94%和33.93%,其主要为分子质量小于500?Da的肽段,占比分别为73.50%、60.15%和53.30%;与消化前相比,消化产物对羟自由基的清除能力分别提高了26.04%、29.06%和34.43%,还原力分别提高了50.98%、64.53%、67.35%。该研究可为金瓜籽抗氧化肽作为功能性抗氧化剂的生产和应用提供参考。