蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究

进行了蜜环菌胞外糖分离纯化及性质的研究，得到如下结果：发酵液浓缩，三倍体积乙醇沉淀、75%乙醇洗涤、Sevage法除蛋白、20%H2O2脱色，得到的粗多糖上DEAE-纤维素（OH^-）柱层析，用蒸馏水、0.05-0.5mol/L的NaCl梯度洗脱，可以得到中性多糖和几咱酸性多糖。中性多糖上SephadexG-150柱层析，用蒸馏水洗脱，得到一种多糖A，多糖A为纯多糖。在400-4000cm^-1范围内摄得多糖A的红外光谱清明其含有β-糖苷键。多糖A的完全酸水解液用硅胶GF254薄层层析，氯仿-甲醇（60：40）与丙酮-水（96：4）展层，以及纸层析，丙酮-水（96：4）展层，苯胺-二苯胺显色，证明其组成单糖为葡萄糖。考马斯亮兰G-250反应阴性、茚三酮反应阴性、双缩脲反应阴性，聚丙烯酰胺凝胶电泳后、考马斯亮兰R-250染色无蛋白质带，都证明其不含蛋白质。     

蜜环菌多糖生产培养基的研究

进行了蜜环菌深层发酵产胞外多糖的培养基的研究,研究结果表明：以豆粕粉作氮源时,菌丝得率最高,以麸皮作氮源时,多糖产量最高;红薯粉为蜜环菌菌丝生长和多糖产量的最适碳源,最适培养基配方为：红薯粉3%,葡萄糖1%,豆粕粉1.5%,KH2PO40.15%,机械搅拌对菌丝的生长和多糖的产生都不利;接种后当即上摇床比接种后静置一段时间再上摇床的菌丝干重及多糖含量都多;培养基中加1%的乙醇对菌丝的生长和多糖的产生都不利;600ml发酵试验中,发酵液多糖含量可达0.485mg/ml,菌丝干重可达20.8g/L。当发酵液pH降为5.0左右,颜色开始变为棕褐色,菌丝亮光由强变弱时,即可终止发酵。     

蜜环菌多糖Am -Ⅰ的部分理化性质及结构研究

液体培养的蜜环菌水溶性胞外粗多糖经纯化得Am-Ⅰ,再经Sephadex G-200柱层析和醋酸纤维薄膜电泳鉴定Am-Ⅰ为均一性组分。采用凝胶色谱法得Am-Ⅰ相对分子量约为6.65×105Dal,旋光法得[α]D25为+100°,苯酚-硫酸法、Folin-酚法、Dische反应法测其糖含量、蛋白质含量和糖醛酸含量分别为91.51%、4.78%和2.81%。气相色谱分析表明:Am-I的单糖组成为D-葡萄糖、D-岩藻糖、D-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-鼠李糖、D半乳糖、摩尔比为:17.05:0.33:0.36:1:0.42:13.67。红外光谱、纸色谱、Smith降解分析表明:Am-I是一种含半乳糖醛酸的酸性多糖,其结构主要由吡喃型单糖通过β(1→4)键和β(1→6)键连接而成。β-消去反应表明这种糖蛋白是非O-型糖肽键。     

固体发酵蜜环菌多糖提取工艺的研究

研究了从固体发酵蜜环菌菌丝体中提取水溶性多糖的工艺。通过比较,证明了冷冻能提高多糖的提取效率;通过单因素实验,确定水溶性多糖的提取工艺;正交试验进一步优化提取工艺：即浸提时间2．5h、浸提90℃、固液比1：5为最佳提取条件。     

蜜环菌多糖提取工艺的优选

探讨采用热水浸提法和超声波提取法提取蜜环菌多糖的工艺条件。研究结果表明:水提法的最佳工艺参数为:料液比1:50,温度40℃,提取时间6h。此条件下,得率为5.96%;超声波提取法的最佳工艺参数为:料液比为1:30,功率为360W,超声35min,超声提取的得率为5.38%。由此可知,热水浸提法优于超声波提取法。     

蜜环菌水溶性多糖的抗氧化活性研究

目的:通过蜜环菌水溶性多糖对·OH、O2-·和DPPH·三种自由基清除作用,评价其抗氧化性能,为蜜环菌药物制剂的活性研究及其产品的质量检测标准提供重要参考。方法:经热水浸提、除蛋白等步骤分离纯化到水溶性多糖,以抗坏血酸和TBHQ为对照,采用分光光度法评定其抗氧化特性。结果:蜜环菌水溶性多糖对三种自由基均有不同程度的清除活性,对三种自由基的清除能力是DPPH·>·OH>O2-·,当清除率达到90%以上时,清除DPPH·、·OH和O2-·的所需的多糖浓度分别为1.0、5.0、6.0mg·mL-1,蜜环菌多糖的清除能力显著。结论:蜜环菌水溶性多糖在体外具有较明显的抗氧化活性,在实验浓度范围内,抗氧化效果与浓度呈显著的线性相关。作为一种重要的天然活性物质,蜜环菌多糖的抗氧化活性和抗衰老作用将具有较高的应用价值。     

蜜环菌水溶性多糖的抗氧化活性研究

目的:通过蜜环菌水溶性多糖对·OH、O2-·和DPPH·三种自由基清除作用,评价其抗氧化性能,为蜜环菌药物制剂的活性研究及其产品的质量检测标准提供重要参考。方法:经热水浸提、除蛋白等步骤分离纯化到水溶性多糖,以抗坏血酸和TBHQ为对照,采用分光光度法评定其抗氧化特性。结果:蜜环菌水溶性多糖对三种自由基均有不同程度的清除活性,对三种自由基的清除能力是DPPH·>·OH>O2-·,当清除率达到90%以上时,清除DPPH·、·OH和O2-·的所需的多糖浓度分别为1.0、5.0、6.0mg·mL-1,蜜环菌多糖的清除能力显著。结论:蜜环菌水溶性多糖在体外具有较明显的抗氧化活性,在实验浓度范围内,抗氧化效果与浓度呈显著的线性相关。作为一种重要的天然活性物质,蜜环菌多糖的抗氧化活性和抗衰老作用将具有较高的应用价值。      

蜜环菌对硒的富集及多糖中硒的分布

采用不同的硒浓度对蜜环菌进行了补硒培养,研究了蜜环菌对硒的积累和存胞内外多糖中的分布.结果表明:菌丝体硒含量与多糖硒含量随着硒处理浓度的增加而增加,但硒积累量达到20mg/L后趋于稳定,胞内多糖的硒积累量达到10mg/L后趋于稳定,而胞外多糖硒积累量在硒处理浓度超过5mg/L后仍有增长趋势.     

天麻水溶性多糖分离纯化及理化性质研究

本实验研究云南野生天麻（GastrodiaelataBlume）多糖的分离纯化及理化性质,实验结果表明,天麻粗多糖提取的最佳工艺条件为温度50℃、浸提时间3h、料液比1：10（w／v）,乙醇浓度80％。在该条件下天麻粗多糖得率约为9．67％（干重）。天麻水溶性多糖（WPGB）经Sevag法脱蛋白、透析、乙醇沉淀、DEAE．52纤维素层析及SephadexG-100层析分离纯化得到WPGB．A．H和WPGB—A．L,经高效液相色谱仪分析证明,WPGB．A．H为纯品,且得率为0．824％（干重）,经过其理化性质鉴定表明,WPGB．A．H不含蛋白质、核酸、糖醛酸,为非淀粉类多糖,其平均分子质量为28840D。     

蜜环菌水溶性多糖的分离鉴定与发酵条件优化

目的:筛选出产蜜环菌多糖和菌丝体生长的最适碳氮源,对蜜环菌水溶性多糖进行结构和组成分析。方法:改变蜜环菌发酵的不同种类碳氮源,测定多糖含量和菌体干重,经热水浸提、除蛋白等步骤分离纯化到水溶性多糖,利用紫外、红外光谱、气相衍生化法分析其基本结构信息。结果:红薯粉和豆粕的组合最适合产多糖,玉米浆和玉米粉的组合菌丝体得率最高;多糖结构由吡喃葡萄糖组成。结论:在富含天然类成分的培养基中,蜜环菌菌丝体生长和产多糖能力较高;提取到的水溶性多糖,成分单一;糖醇乙酸酯气相衍生化法可简便、准确地测出蜜环菌多糖中所含的各种单糖。     

超声波辅助酶法提取榛蘑多糖

目的:为了研究榛蘑中多糖的提取条件,以榛蘑多糖得率为指标,采用超声波辅助复合酶(纤维素酶、木瓜蛋白酶)法进行实验。方法:通过单因素实验研究了酶解温度、超声功率、超声时间、液料比、酶解时间、复合酶比例以及加酶量对榛蘑多糖得率的影响,在此基础上进行响应面优化实验。结果:通过单因素实验,确定了酶解温度50℃、超声功率360 W、超声时间20 min;通过响应面优化实验,确定了最佳提取条件:加酶量1.9%、复合酶比例2:1、酶解时间138 min、液料比30:1(mL/g)。结论:在此条件下,榛蘑多糖得率为40.56%。      

固态发酵生产蜜环菌饮料

以蜜环菌固态发酵物为原料制得一种蜜环菌饮料。以蜜环菌固态发酵物为原料,提取其中的多糖等营养和药效成分,进行风味调配,通过正交试验和感官评价的方法确定蜜环菌饮料的配方。该发酵饮料的培养基配方为:白砂糖1.5%,大米80%,黄豆1%,麸皮10%,红薯7.5%;饮料配方为:蜜环菌发酵液添加比例为30%、白砂糖为20 g/L、柠檬酸0.6 g/L、黄原胶0.2 g/L,测得成品饮料中各成分的含量为:多糖0.049 mg/mL,还原糖0.042 mg/mL,蛋白质53.0 mg/mL,氨基酸1.226 mg/mL。饮料的感官指标、理化指标和微生物指标均达国家标准。     

榛蘑多糖的分离鉴定及其清除氧自由基作用研究

榛蘑烘干后经热水提取,乙醇沉淀得粗多糖。粗多糖经Sevag法除蛋白后上DEAE-纤维素(OH-)柱层析,分离得到五种多糖组分Am-I、Am-II、Am-III、Am-IV和Am-V,SepharoseCL-4B测得Am-I分子量为1.46×104,红外光谱和NMR波普分析表明Am-I为含有葡萄糖醛酸的主要以β(1,3)糖苷键和β(1,6)糖苷键连接的D-吡喃葡聚糖。邻苯三酚自氧化法测定榛蘑粗多糖和Am-I均具有清除氧自由基的作用。     

山榛蘑多糖提取工艺研究

以山榛蘑为原料,采用热水浸提法提取山榛蘑多糖。在单因素实验的基础上,通过正交实验进一步优化提取工艺条件,确定影响山榛蘑多糖提取率的主次因素分别是料液比、浸提时间、浸提次数和浸提温度。结果表明,最佳工艺条件是料液比1∶25,浸提温度95℃,浸提时间5h,浸提次数3次,多糖得率达4.81%。     

蜜环菌液体培养基及多糖提取条件的优化

筛选最优菌株,确定最佳液体发酵培养时间和碳源、氮源的组合,采用L16(45)正交试验设计优化蜜环菌水提和超声提取多糖的工艺。用苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果表明:最优菌株M7的最佳发酵时间为7d,最适碳源、氮源组合为糊精+红薯粉、蚕蛹粉+玉米浆。水提蜜环菌多糖的最优工艺是水提温度100℃、料液比1:20、水提时间1.5h、水提4次。在最优水提优化的基础上最佳超声工艺是水提时间90min、超声时间10min、超声功率90%、超声2次。水提优化比普通方式提取多糖,多糖得率增加104.27%。在水提优化的基础上进行超声优化,多糖得率增加5.86%,可将超声波法作为蜜环菌多糖提取的辅助手段。     

不同蜜环菌菌株酯酶同工酶及过氧化物同工酶的研究

研究不同来源蜜环菌菌株的酯酶同工酶及过氧化物同工酶图谱的变化规律;采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法;同一菌株在不同的培养天数同工酶谱带的条数不同,但具有一定数量迁移率(Rf)相同的谱带贯穿于整个培养时间。不同蜜环菌菌株具有各自特征性谱带。结果表明,同工酶谱带的多少及活性与菌丝的生产速度及代谢的强弱成正相关。     

高速逆流色谱法分离蜜环菌发酵上清液乙醇提取物条件的研究

利用高速逆流色谱法分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位,筛选其最佳溶剂体系分离条件。结果表明:溶剂体系为正丁醇-乙酸乙酯-水、且体积比为1:4:5的条件下,能得到最佳分离效果,最终分离出4个峰,效果较好,4个峰的提取率分别为51.10%、1.47%、0.86%、1.80%。