淋病奈瑟氏菌培养基和保护剂的研究

本文报告了淋病奈瑟氏菌生长培养基、糖发酵生化培养基、保存培养基和真空干燥保护剂的研究。应用27株淋病奈瑟氏菌进行试验表明,全部菌株在特殊蛋白胨血琼脂和多种蛋白胨血琼脂上24小时生长良好;26株菌在NGCM-1生化培养基中发酵葡萄糖产酸(96.3％),保存培养基在27℃可保存菌种30天左右,10％脱脂奶粉作为保护剂真空干燥菌种可保存20个月以上。     

淋病奈瑟菌外膜蛋白Ⅰ的分离提纯及鉴定

在CaCl2存在下，以CTB提取淋球菌的OMP，再以Z3，14萃取PI，然后经DEAESepharoseCl－6B层析柱提纯，获得纯PI10．97毫克。SDS－PAGE显示纯PI为单一蛋白区带，分子量为35KD，经可见光扫描，其纯度达96.21％。用ELISA间接法检测证明，纯PI保持完好的抗原活性。亚类特异性鉴定证实为WI群PIA。     

淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、细小脲原体多重荧光定量PCR检测方法的建立及临床应用

目的建立淋病奈瑟菌(Neisseria agonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、细小脲原体(Ureaplasma parvum,UP)多重荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测方法。方法选择NG保守基因porA、解脲支原体(Ureaplasma urealytieum,UU)保守基因ure及CT保守基因trp作为目标检测基因,设计引物及TaqMan探针,制备重组质粒标准品,绘制标准曲线,建立多重FQ-PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性。用建立的方法对203份泌尿生殖道感染NG、CT、UP的临床样本进行同步检测,并与单重FQ-PCR法、常规PCR法及基因测序结果进行比较。结果重组质粒标准品经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;建立的标准曲线起始DNA拷贝数与Ct值之间的线性关系良好,相关系数为0.998~1.000;该方法检测NG、CT和UP的灵敏度均可达102copies/ml,检测范围可达109~102copies/ml,相关系数分别为1.000、0.999和0.995;不与生殖道其他菌群如阴道霉菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、人型支原体、单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型及人乳头瘤病毒(16/18型)发生交叉反应;检测的203份样本中,多重FQ-PCR检测NG、CT、UP的阳性检出率分别为34.48%、30.54%、18.71%,与单重FQ-PCR法、基因测序法比较,差异无统计学意义(P0.05),3种方法阳性检出率均高于常规PCR法;与基因测序法相比,多重FQPCR法灵敏度为100%,3种病原体检测特异性均高于98.50%。结论已成功建立NG、CT、UP多重FQ-PCR检测方法,该法检测时间短,特异性强,灵敏性高,适合于临床快速诊断。     

B群脑膜炎奈瑟菌疫苗的研究进展

随着A、C、W135、Y群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)多糖疫苗和多糖-蛋白结合疫苗的接种使用,相应菌群引起的流行性脑膜炎的发病率和死亡率均得到有效控制,而B群等其他群别引起的流行性脑膜炎发病率有所增加。因B群Nm的荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)或多糖-蛋白结合物免疫原性均较低,目前采用常规方法尚未生产出有效的B群Nm疫苗。本文对B群Nm CPS疫苗、外膜囊泡(Out membrane vesicles,OMV)疫苗、脂寡糖(Lipooligosaccharide,LOS)疫苗和重组蛋白疫苗的研究进展作一综述。     

脑脊液标本脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides)鉴定程序的探讨

目的探讨可疑Neisseria meningitides感染标本,菌种鉴定和药物敏感试验的最佳程序。方法采用巧克力琼脂平板培养、生物化学反应、血清学鉴定以及PCR方法,分离培养和菌种鉴定。结果分离培养、生物化学反应、血清鉴定能够鉴定菌种。PCR方法鉴定方法与形态学结合,确定Neisseria meningitides敏感性和特异性结果相似。结论在Neisseria meningitides菌种鉴定的理论教学与临床存有差异,PCR方法与传统方法相结合能够提高鉴定程序的效率。     

多重PCR法用于脑膜炎奈瑟菌血清群分群鉴定的适用性

目的应用多重PCR法鉴定脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)A、B、C、W135、Y 5个血清群,验证在基因水平鉴定疫苗用菌种血清群的适用性,并与实验室经典细菌培养法和血清凝集试验进行比对。方法提取标准Nm血清群A、B、C、W135、Y的基因组DNA,针对5个血清群Nm荚膜多糖合成基因上的特异序列,应用多重PCR方法对目的片段进行扩增,根据PCR扩增产物的碱基片段大小不同区分这5个血清群;采用PCR方法鉴定7株Nm分离菌种的血清群;并与实验室传统细菌培养法和血清玻片凝集试验比对。结果多重PCR方法能够鉴定Nm,并同时完成血清分群鉴定。该方法特异性和灵敏度(最低检测限为基因组DNA 0.1 ng)均较高。7株Nm分离菌种PCR检测结果与实验室经典培养法和血清玻片凝集试验结果一致,其中1株为血清群A群,1株B群,2株C群,1株W135群,2株Y群。结论多重PCR方法对Nm检测的特异性和灵敏度均优于传统细菌培养法和血清玻片凝集试验,可同时检测Nm菌种的种特异基因和群特异基因,提高了分群鉴定的准确性。此外,试验结果客观,且可长期保存和追溯性查询,有利于疫苗用菌种的...     

分光光度法测定W135群脑膜炎奈瑟菌生物量

目的建立快速准确测量W135群脑膜炎奈瑟菌(Neissria meningitidis)生物量的紫外分光光度法。方法取W135群脑膜炎奈瑟菌发酵液进行系列浓度稀释,利用紫外-可见光分光光度法在最适吸收波长处测定各稀释度发酵液的A值,同时测定各浓度下细菌数、菌体干湿重,建立W135群脑膜炎奈瑟菌A值与菌体干湿重、细菌数间的关系曲线,利用所建立的回归方程计算细菌生物量。取4组不同浓度的W135群脑膜炎奈瑟菌培养液,采用建立的方法测量细菌生物量并与实际测量值对比,验证该方法的准确性。结果 W135群脑膜炎奈瑟菌A_(450)值与菌体干湿重、细菌数呈线性关系,R~2分别为0.990、0.980和0.926。利用所建立的回归方程得到的生物量结果与实际测量结果无统计学差异(P0.05)。结论利用所建立的A值与生物量的关系方程可快速简便地检测到W135群脑膜炎奈瑟菌生物量的变化。     

肺炎克雷伯氏菌培养工艺的研究

本文研究了肺炎克雷伯氏菌的培养工艺，得到了实验范围内最佳的培养基组成和培养条件；葡萄糖1％（质量分数，下同），大豆胨1．5％，牛肉浸膏0．2％，酵母粉0．2％，蛋白胨0．5％，氯化钠0．5％，K2HPO4 0．35％，KH2PO4 0．15％。2％接种量，转速160r/min和20％的摇瓶装填量是适宜的。     

云南省保山市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌犬况调查

目的 调查云南省保山市学校聚集的健康人群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)带菌率,为分析保山市流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的发展趋势提供依据.方法 在保山市18～ 22岁年龄段健康人群中采集1076份咽拭子样本,常规分离培养鉴定及PCR鉴定和分型.结果 1076份咽拭子样本中,分离出17...     

A、C、Y、W135群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法的建立及其验证

目的建立A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法 (serum bactericidal assay,SBA),并进行验证。方法对SBA中活菌收获时间、靶菌的制备、反应时间及补体进行优化,并确定质控血清Men10的质控范围。对优化后的方法进行特异性、线性、精密度验证。结果确定A600值为0.5~0.8时为收获细菌最佳收获时间;冻存菌种可替代新鲜制备菌种作为靶菌;最佳杀菌反应时间为60 min;17830和84321N批补体均可用于试验。质控血清Men10的质控范围A群为521~4 689,C群为1 047~9 423,W135群为1 779~16 008,Y群为1 416~12 741。A、C、W135和Y同群多糖吸收血清样品后能够抑制≥80%的同群SBA滴度,而异群多糖则20%;血清样品稀释倍数与对应的SBA滴度呈显著负相关,斜率在-0.90~-1.10之间,Pearson相关系数在0.90~1.0之间,P均0.001;同一实验内相同样品检测结果 CV≤25%,实验间相同样品的95%的检测结果落在检测值中位数3倍(一个稀释度)的范围内,CV≤40%,不同实验室间相同样品的检测结果至少有70%落在美国CDC公布结果的3倍(一个稀释度)范围内。结论建立了标准化的具国际间可比性的A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌SBA,该方法特异性、线性和精密度良好。     

流感嗜血杆菌的培养、检定及免疫血清的试制

用氯化血红素及辅酶I作为X、V因子来源、用心脑没液作为基础液制备的培养基，所试12个菌株6个血清型流感嗜血杯曲均生长良好，该培养基适于大量培养。应用该培养基培养新分离的三株流感嗜血杆菌，均生长良好，与b型血清产生凝集，属b型。采用死菌抗原（b～f型）及新鲜死菌加佐剂方法免疫（a型）健康家兔，获得较高抗体水平，每种抗原各制备三批血清，其抗体滴度基本上一致。     

Heat-Inactivation of Human Serum Destroys C1 Inhibitor,Pro-motes Immune Complex Formation,and Improves Human T Cell Function

Heat-inactivation of sera is used to reduce possible disturbing effects of complement factors in cell-culture experiments, but it is controversially discussed whether this procedure is appropriate or could be neglected. Here, we report a strong impact of heat-inactivation of human sera on the activation and effector functions of human CD4+ T cells. While T cells cultured with native sera were characterized by a higher proliferation rate and higher expression of CD28, heat-inactivated sera shaped T cells towards on-blast formation, higher cytokine secretion (interferon γ, tumor necrosis factor, and interleukin-17), stronger CD69 and PD-1 expression, and increased metabolic activity. Heat-inactivated sera contained reduced amounts of complement factors and regulators like C1 inhibitor, but increased concentrations of circulating immune complexes. Substitution of C1 inhibitor reduced the beneficial effect of heat-inactivation in terms of cytokine release, whereas surface-molecule expression was affected by the addition of complex forming anti-C1q antibody. Our data clearly demonstrate a beneficial effect of heat-inactivation of human sera for T cell experiments but indicate that beside complement regulators and immune complexes other components might be relevant. Beyond that, this study further underpins the strong impact of the complement system on T cell function.     

抗狂犬病血清致过敏反应及血清病的探讨

128例犬咬伤患者注射抗狂犬病血清后,过敏反应发生率为3.91％(5/128);血清病发生率为11.72％(15/128)。过敏反应的主要症状为头晕、恶心、面色苍白;血清病的主要症状为局部及周身荨麻疹、表浅淋巴结肿大、恶心、食欲不振等。血清病有明显的年龄特点,0～19岁儿童和青少年发生率为4.0％,20岁以上成年人为13.59％,二者差异显著。     

基于ANFIS的一类免疫聚类建模方法的研究

针对复杂的非线性系统较难建立精确的数学模型这一难题,提出一种基于模糊推理系统的(ANFIS)自适应方法方法对系统进行建模。建模过程中为了给ANFIS赋合适初始值,选用人工免疫聚类算法对输入数据进行处理。最后利用MATLAB离线对一种非线性系统的进行实验仿真,仿真结果表明了该方法的有效性。     

牛血清白蛋白单克隆抗体的筛选与双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的筛选高效抗牛血清白蛋白(BSA)单克隆抗体细胞株,并建立BSA抗原检测的双抗体夹心ELISA法。方法分别采用辛酸-硫酸铵法和葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化单抗,并进行抗体类型、腹水效价、特异性和相对亲和力测定;应用纯化的单抗建立BSA双抗体夹心ELISA检测法,并进行初步应用。结果筛选出4株可稳定分泌抗BSA单抗的杂交瘤细胞株,抗体类型为IgG,抗体滴度均可达10-6,特异性良好,相对亲和力较高。建立的双抗体夹心ELISA法线性范围为1.25～20ng/ml,R2>0.98,灵敏度为1.25ng/ml。结论已筛选出高效抗BSA的单抗,并建立了BSA双抗体夹心ELISA检测方法。     

Immune Response among Patients Exposed to Molds

Macrocyclic trichothecenes, mycotoxins produced by Stachybotrys chartarum, have been implicated in adverse reactions in individuals exposed to mold-contaminated environments. Cellular and humoral immune responses and the presence of trichothecenes were evaluated in patients with mold-related health complaints. Patients underwent history, physical examination, skin prick/puncture tests with mold extracts, immunological evaluations and their sera were analyzed for trichothecenes. T-cell proliferation, macrocyclic trichothecenes, and mold specific IgG and IgA levels were not significantly different than controls; however 70% of the patients had positive skin tests to molds. Thus, IgE mediated or other non-immune mechanisms could be the cause of their symptoms.     

6C型肺炎链球菌抗血清的制备及鉴定

目的制备6C型肺炎链球菌抗血清,并进行鉴定。方法将经美国单克隆抗体方法鉴定为6C型的肺炎链球菌制成菌体抗原免疫家兔,制备抗血清;将抗血清与6A、6B和6C型肺炎链球菌进行荚膜肿胀和凝集试验;用6A、6B及6A和6B型肺炎链球菌吸附血清后,再次检测其与各型肺炎链球菌的凝集效价。结果免疫前的兔血清与6A、6B和6C型肺炎链球菌均未出现荚膜肿胀及凝集反应。免疫后的血清与6A、6B和6C型的凝集效价分别为1∶64、1∶32和1∶64;经6A或6A和6B型吸附后,与6A、6B和6C型的凝集效价分别为(-)、(-)和1∶8;经6B型吸附后,与6A、6B和6C型的凝集效价分别为1∶16、(-)和1∶16。结论6C型为新的肺炎链球菌血清型,已成功制备出6C型抗血清,可用于血清分型研究。     

铁皮石斛多糖抗癌及免疫活性研究

研究了铁皮石斛多糖的抗癌及免疫活性。水提醇沉法提取铁皮石斛多糖,将其作用于癌细胞株(HepG2、A549、F9、NCCIT)和小鼠脾脏细胞、腹腔巨噬细胞,观察细胞形态变化,并用MTT法分析其对细胞增殖的作用。结果表明:铁皮石斛多糖能抑制癌细胞的增殖并促进脾脏细胞生长,铁皮石斛多糖具有一定的抗癌活性及免疫活性。     

偶氮硝羧与血清蛋白质反应的分光光度研究

在pH3.0的BrittonRobinson缓冲介质中,红色的偶氮硝羧与蛋白质形成蓝紫色复合物[1],其最大吸收波长约为680nm,比试剂本身红移140nm,表观摩尔吸光系数达2.60×105Lmol·cm(牛血清白蛋白),线性范围为20～140μgmL。实验制定的几种蛋白质的标准工作曲线,其线性范围与牛血清白蛋白一致,灵敏度高。用于人血清样品测定,方法可靠。     

Interaction of Aqueous Bovine Serum Albumin with Silica Aerogel Microparticles: Sorption Induced Aggregation

Mesoporous silica aerogels have a wide range of potential applications in biotechnology, the food industry, pharmacy and medicine. Understanding the nature of the interactions of biomolecules with these porous nanostructured materials is essential for achieving optimum performance in the targeted applications. In this study, the well-characterized bovine serum albumin (BSA) was chosen as a model protein to probe protein–aerogel interactions in the solution phase. Aqueous BSA was mixed with suspended silica aerogel microparticles, and the colloid system was monitored on-line by UV–vis spectrophotometry and turbidimetry. The global mathematical analysis of the time-resolved data reveals that the fast sorption of the protein on the aerogel microparticles follows a multistep binding mechanism. The extensive sorption of the protein eventually induces the aggregation of the covered aerogel due to the alteration of the electrical double layer of the particles. The interaction of BSA and silica aerogel is the strongest between pH = 4 and 5, because their native surface charges are the opposite in this pH range, as indicated by their respective zeta potentials.