甜叶菊毛状根的诱导培养及茉莉酸甲酯对其绿原酸类物质积累的影响

以发根农杆菌ACCC10060诱导甜叶菊毛状根,建立毛状根培养生产绿原酸类物质体系,研究茉莉酸甲酯对绿原酸类化合物积累的影响。经发根农杆菌ACCC10060侵染的甜叶菊叶片外植体,共培养14 d后产生毛状根。聚合酶链式反应检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rol B和rol C基因已成功整合到甜叶菊毛状根基因组中。MS液体培养基较B5、WPM更利于甜叶菊毛状根生长及绿原酸类物质的积累,培养35 d后,干质量增加约30倍,绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸最高含量分别为3.47、11.47、3.04 mg/g。毛状根在MS液体培养基中培养至第3周时分别添加15、45、100μmol/L的茉莉酸甲酯进行诱导,处理后第1、2、4、8天收获,毛状根的生长量和绿原酸类物质含量均有提高,其中以45μmol/L茉莉酸甲酯的促进作用最为显著,3种绿原酸类物质的总产量是对照组的2.68倍(P0.01)。以上结果表明,甜叶菊毛状根培养可用于绿原酸类物质的生产,经茉莉酸甲酯处理可显著提高绿原酸类物质的产量。     

甜叶菊毛状根绿原酸类化合物对α-淀粉酶的抑制作用

本文建立了微量α-淀粉酶抑制剂体外活性检测模型,并以此模型研究了甜叶菊毛状根绿原酸类化合物对α-淀粉酶的抑制作用效果及其动力学特征。优化后的α-淀粉酶抑制剂活性检测模型的主要参数如下:酶浓度为1.25 U/m L,底物浓度范围为0.05⁶ mg/mL,反应时间为30 min。以此模型检测了由ACCC10060、R1601、A4三种发根农杆菌所诱导的甜叶菊毛状根总绿原酸提取物对α-淀粉酶的抑制效果,发现三者均对α-淀粉酶具有较强的抑制作用,其IC50分别为12.43、18.31和21.08 mg/mL。高效液相色谱检测结果表明,ACCC10060所诱导的甜叶菊毛状根的总绿原酸提物主要含绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸三种成分,含量分别为6.88、19.90和1.50 mg/g。酶抑制动力学检测结果显示,该三种绿原酸类化合物均对α-淀粉酶有较强抑制作用,以该三种绿原酸标品复配模拟毛状根总绿原酸提取物,发现其对α-淀粉酶的抑制作用与总绿原酸提取物无显著性差异。以上研究结果表明,甜叶菊毛状根绿原酸类化合物对α-淀粉酶有很好的抑制作用,其有效成分为绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸,可利用该毛状根生产以绿原酸类物质为主要活性成分的餐后血糖抑制剂。      

不同产地甜叶菊绿原酸类成分含量分析及质量评价

不同产地的甜叶菊受气候、地理位置等因素的影响,其含有的绿原酸类成分也不尽相同.对不同产地甜叶菊中的绿原酸类成分进行测定,结果显示不同产地的甜叶菊中绿原酸类成分的区别主要体现在5-CQA和异绿原酸的含量差异上.用数值量化的方式建立了质量评价方程,对每个样品进行计算,得出反映质量情况的分数,该分数能够有效并直观地表示不同产...     

外源诱导姬松茸麦角甾醇的合成

为提高姬松茸中麦角甾醇含量,本研究借助液体培养,通过添加外源诱导物提高菌丝中麦角甾醇含量.分别以茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和水杨酸(salicylic acid,SA)为外源诱导物,对其添加量、添加时间以及诱导时长进行优化,并通过荧光定量PCR对诱导条件下参与麦角甾醇合成的相关基因表达量进...     

外源喷施茉莉酸甲酯类对‘黑比诺’葡萄及葡萄酒香气品质的影响

茉莉酸甲酯（Methyl Jasmonate,MeJA）和二氢茉莉酸甲酯（Methyl Dihydrojasmonate,MDJA）是常见的茉莉酸甲酯类植物生长调节剂。本试验在转色初期对‘黑比诺’葡萄进行0.1、1.0、5.0、10.0、15.0 mmol/L浓度MeJA和MDJA的叶面喷施处理,采用HS-SPME-GC-MS技术分析采收期果实及酒样中挥发性香气化合物含量。结果表明,茉莉酸甲酯类处理后‘黑比诺’葡萄中挥发性香气化合物总含量均提升,经脂肪酸代谢产生的香气化合物总含量显著提升（P<0.05）,所有处理中1.0 mmol/L MDJA效果最佳。结合热图、主成分、偏最小二乘法和香气轮廓对酒中香气化合物分析表明,MeJA处理后葡萄酒体花香味提升,其中贡献突出的是癸酸乙酯、乙酸异戊酯、苯乙醇、苯甲醇、壬醛与辛酸乙酯,且在0.1 mmol/L浓度处理效果最佳;MDJA处理后酒体的果香味更突出,影响较大的是癸酸乙酯、乙酸异戊酯、辛酸乙酯与1-辛醇,且在1.0 mmol/L处理效果最佳。本研究从多元统计视角明确了不同浓度的MeJA和MDJA对‘黑比诺’葡萄及葡萄酒中挥发性香气化合物...     

水杨酸、茉莉酸甲酯及超声波对北沙参愈伤组织生长及产香豆素的影响

研究水杨酸（salicylic acid,SA）、茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,MeJA）和超声波对北沙参愈伤组织生长的影响,并利用高效液相色谱法测定了经诱导处理后愈伤组织中香豆素（欧前胡素、异欧前胡素及补骨脂素为主要指标）含量的变化。结果表明：SA和MeJA均对北沙参愈伤组织的生长具有抑制作用,而一定时间的低强度超声波处理则能够促进北沙参愈伤组织生物量的增长;同时,结果表明此3 种诱导因子均能够不同程度地促进香豆素合成,即当SA质量浓度达到8 mg/L时,欧前胡素的含量达到最大值,为对照的3.8 倍;SA质量浓度为16 mg/L时,补骨脂素含量达最大值,为对照的1.70 倍;当SA质量浓度在28～30 mg/L之间时,异欧前胡素的含量达到最大值,此范围内总香豆素含量也达最大值,约为对照的2.33 倍;当MeJA浓度达400 μmol/L时,补骨脂素和异欧前胡素含量达到最大值,分别为对照的6.09 倍和5.53 倍,总香豆素含量也达最大值14.86 μg/g,为对照的5.11 倍;当超声波处理30 min时,愈伤组织中欧前胡素和异欧前胡素的含量达最大值5.51 μg/g和3.69 μg/g,分别为对照的5.15 倍和4.20 倍;总香豆素含量也达最大值11.90 μg/g,为对照的3.55 倍;而补骨脂素含量则在超声处理10 min后达到最大值3.60 μg/g,为对照的1.50 倍。综上,比较3 种诱导子对北沙参愈伤组织诱导处理后香豆素含量的变化发现,与SA和超声波相比,MeJA更能够有效地促进北沙参中次生代谢产物--香豆素的合成。     

金铁锁毛状根生物总碱的提取及抑菌活性评价

通过L16(45)正交试验对生物碱提取工艺中的五个因素进行优化,建立一个有效的金铁锁毛状根生物碱分离提取方法;并使用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、浑球链霉菌和铜绿假单胞菌作为指示菌对提取产物的抗菌活性进行评价.结果表明,最佳提取条件:以70％乙醇(pH 3.0)为提取剂、料液比30∶1、提取时间120min、提取温度80℃...     

茉莉酸甲酯对草莓果实采后腐烂、苯丙烷类代谢及抗氧化活性的影响

为研究茉莉酸甲酯处理(Methyl jasmonate,MeJA)对草莓果实采后腐烂、苯丙烷类代谢及抗氧化活性的影响,将果实先于20℃下以10μmol/L MeJA熏蒸处理6h,然后转入(1±1)℃下贮藏12d,每隔3d测定果实腐烂率、苯丙烷类代谢相关酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、对香豆酰-CoA连接酶(4-CL)、肉桂酸羟化酶(C4H)和二氢黄酮醇还原酶(DFR)活性以及总酚、总花色苷和酚类和花色苷类单体物质含量,并且同时测定果实DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)自由基清除率和总还原力。结果显示,MeJA处理可显著抑制草莓果实贮藏期间腐烂率的上升;同时MeJA可诱导PAL、4-CL、C4H和DFR活性的上升,从而有效延缓了酚类和花色苷类物质含量的下降,提高了果实DPPH自由基清除率和总还原力,维持了果实的抗氧化活性。这些结果表明,MeJA处理在草莓果实保鲜中具有较好的应用前景。     

根癌农杆菌拮抗真菌的筛选、鉴定及发酵条件研究

从多种植物根际土壤中分离到52株真菌菌株,通过琼脂柱法初筛及摇瓶复筛,筛选出1株对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens T-37)有明显抑制效果的菌株xj,经分类鉴定确定为黑曲霉(Aspergillus niger),并对之发酵条件进行了研究,结果表明:以2%果糖、3%牛肉膏为液体发酵培养基,10%装液量,起始pH6.0,25℃,140r/min,发酵5d,抑菌圈直径可达到35.28±0.32mm。     

紫薯愈伤组织诱导和培养条件优化及绿原酸类化合物的积累

以紫薯叶片为外植体,通过筛选培养基和培养条件建立了紫薯愈伤组织培养体系。研究6-苄基氨基嘌呤（6-BA）及萘乙酸（NAA）不同浓度组合对紫薯愈伤组织诱导的影响,之后分别考察基础培养基MS、1/2MS、B5、WPM、White及NAA、6-BA、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）三种激素对紫薯愈伤组织继代生长的影响。确定最适基础培养基后,对激素进行单因素实验后再做正交实验。结果表明1/2MS基本培养基中添加1.5 mg/L 6-BA和0.4 mg/L NAA适合紫薯愈伤组织诱导,诱导率为81.82%。MS为优选基础培养基,通过正交实验优化的激素配比组合为1.0 mg/L NAA,0.4 mg/L 6-BA,1.0 mg/L 2,4-D。最佳继代培养基为MS+1.0 mg/L NAA+0.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+6 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,此优化激素条件下愈伤组织的生物量增长倍数为23.46倍,3-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰宁酸、4,5-二咖啡酰宁酸三种绿原酸类化合物含量分别为0.30%、1.91%、1.10%,三者总含量3.31%,因此,通过紫薯愈伤组织培养生产绿原酸类化合物是可行的。      

培养液匀浆人参发根抗氧化、抗黑色素瘤作用

以培养液匀浆人参发根为实验材料,选用Cu2＋螯合能力、多酚氧化酶活力、总抗氧化能力3 种方法对其 抗氧化能力进行测定;采用流式细胞术对黑色素瘤细胞A375凋亡、细胞周期进行测定。结果表明：随着质量浓 度的增大,培养液匀浆人参发根的Cu2＋螯合率逐渐提高,在100 mg/mL时与VC差异不显著（P＞0.05）;40、 60、80、100 mg/mL时培养液匀浆人参发根与VC的多酚氧化酶活力差异不显著（P＞0.05）;培养液匀浆人参 发根的总抗氧化能力具有质量浓度依赖性,在100 mg/mL时达到0.877 4 mmol FeSO4/g。与对照组相比培养液匀 浆人参发根组细胞凋亡显著（P＜0.05）;S、G2/M期比例升高,G0/G1期比例下降。结论：人参发根具有抗氧 化、抗黑色素瘤作用。     

甜叶菊有效成分动态积累分析及水提液澄清工艺初探

为了探索甜叶菊有效成分积累规律,本研究采用高效液相色谱法测定了在2018年7月24日至10月16日甜叶菊谱星6号叶中甜菊糖苷、绿原酸类和类黄酮含量的变化;采用壳聚糖季铵盐、壳聚糖盐酸盐、白色聚合氯化铝、黄色聚合氯化铝、硫酸亚铁+氢氧化钙等5种絮凝剂对甜叶菊水提液进行澄清处理,通过分析水提液澄清率及3种甜菊糖苷和6种绿原酸类在澄清液中的保留率,探索甜叶菊水提液的澄清方法。结果表明,甜叶菊叶片生物量积累呈上升趋势;各甜菊糖苷的含量变化幅度小;绿原酸类及类黄酮成分的积累与生长期密切相关,含量呈现降低-升高-稳定-降低的动态变化趋势。甜菊糖苷、绿原酸类和类黄酮的含量在9月18日至10月2日时段达到最高值,分别为168.74、73.78和14.88 mg/g。结合产量和有效成分两方面因素,确定新疆巴州甜叶菊最佳采收期为9月中旬至10月初。不同的絮凝剂对甜叶菊水提液的澄清效果不同,采用壳聚糖盐酸盐絮凝处理水提液中9种有效成分的保留率最高,以0.45 g/L壳聚糖盐酸盐在45 ℃条件下澄清率达到89.39%。壳聚糖盐酸盐可以作为适宜的絮凝剂应用于甜叶菊水提液中甜菊糖苷和绿原酸类的分离纯化。     

高效液相色谱法测定青梅花、枝、叶中绿原酸类化合物

目的：建立反相高效液相色谱法同时测定青梅非果部位(花、枝、叶)中新绿原酸(NCA)、绿原酸(CA)及隐绿原酸(CCA)3 种绿原酸异构体的含量。方法：采用高效液相色谱法梯度洗脱,使用Luna C18 色谱柱,以体积分数2% 乙酸溶液和乙腈为流动相,二极管阵列检测器在波长328nm 处进行检测。结果：该方法线性范围宽,3种绿原酸异构体的线性范围均为5～200μg/mL,NCA、CA、CCA 的检出限分别为0.21、0.16、0.29μg/mL,定量限分别为0.76、0.50、0.98μg/mL,测得青梅花、枝、叶的30% 乙醇提取物中3 种绿原酸异构体的总含量分别为(48.26 ± 0.11)、(10.82 ± 0.04)、(21.33 ± 0.08)μg/g。结论：该方法简便、快速、准确,青梅花、枝、叶是优良的绿原酸类化合物天然资源。     

不同培养条件对黄栀子愈伤的生长和绿原酸类物质积累的影响

本文以生长指数、绿原酸类物质含量和每升培养基中绿原酸的产量为评价标准,研究了培养基种类、碳源、蔗糖浓度、光照条件及水解酪蛋白(CH)浓度对黄栀子愈伤组织的生长及其次级代谢产物绿原酸类物质积累的影响,旨在为生产绿原酸类物质提供依据。研究显示,培养条件对黄栀子愈伤组织生长状况和绿原酸类物质积累有显著影响,适合生长的培养条件与适合绿原酸类物质积累的条件并不一致;适合黄栀子愈伤组织生长的最佳培养条件为:以MS为基础培养基,麦芽糖+蔗糖为碳源、糖浓度为3%、半光照条件下鲜重增长指数最大,达到47.11%。适合绿原酸类物质积累使得总产量达到最大的最佳培养条件为:MS培养基、蔗糖为碳源、蔗糖浓度为5%、不添加水解酪蛋白、半光照条件下培养,最高产量达每升培养基含35.55 mg绿原酸类物质。     

茉莉酸甲酯处理对采后葡萄果实酚酸合成和抗氧化活性的影响及其机理研究

以‘巨峰’葡萄果实(Vitis vinifera L.× V. labrusca L. cv. ‘Kyoho’)为试材,研究了10μmol/L茉莉酸甲酯(methyljasmonate,MeJA)熏蒸处理对采后葡萄果实在1℃贮藏期间酚酸含量和抗氧化活性的影响,并从苯丙烷类代谢角度分析了相关机理。结果显示：10μmol/L MeJA处理可显著抑制葡萄果实贮藏期间腐烂率和落粒率的上升,诱导苯丙烷类代谢关键酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸羟化酶(C4H)和查耳酮合成酶(CHS)活性的上升并延缓对香豆酰-CoA连接酶(4-CL)活性的下降,同时显著提高果实主要酚酸(没食子酸、咖啡酸、原儿茶酸、丁香酸和p-香豆酸)和总酚含量并维持了DPPH自由基清除率和总还原力。结果表明：MeJA可通过调控葡萄果实苯丙烷类代谢相关酶系的活性,从而有效诱导果实中酚酸的合成并维持果实贮藏期间抗氧化活性,最终提高了果实采后食用和营养品质。     

甲酯化方法对甘油三脂和游离型脂肪酸混合物的脂肪酸分析的影响

在重组解脂耶氏酵母催化红花籽油合成共轭亚油酸的过程中,大量的红花籽油与游离型亚油酸及共轭亚油酸以混合物的形式存在于发酵液上清。为了通过气相色谱准确分析催化过程中底物及产物的含量,确定甘油三脂和游离型脂肪酸混合物的最佳甲酯化方法至关重要。本文选择盐酸-甲醇法、盐酸-甲醇（甲苯）法、三氟化硼-甲醇法、氢氧化钠-甲醇法、酸碱综合法和重氮甲烷法6种方法,对红花籽油、游离型共轭亚油酸和二者混合物分别进行甲酯化,通过气相色谱定量分析,比较甲酯化效率。结果表明盐酸-甲醇（甲苯）法甲酯化程度高,且操作简便、安全、经济,是样品为甘油三酯和游离型脂肪酸混合物的最适甲酯化方法。