铅胶体金免疫层析试纸条研制及其在小龙虾中的应用

目的 利用胶体金免疫层析技术对重金属铅检测试纸条进行研制,并探究其在小龙虾样品中的应用。方法 使用胶体金和重金属铅单克隆抗体制备免疫探针。优化反应体系,构建重金属铅免疫层析检测试纸条。验证该试纸条的检测限、特异性、准确性和稳定性,并对小龙虾样品进行检测。结果 所研制的重金属铅胶体金免疫层析试纸条的检测限为6 ng/mL,检测时间为15 min。该试纸条可特异性识别铅,而对其他常见重金属无交叉反应。结论 本实验研制的试纸条性能良好,能够准确判定小龙虾中重金属铅是否超标。     

单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制

以单增李斯特菌(LM)内化素A蛋白(InlA)单克隆抗体为基础,研制其胶体金免疫层析检测试纸条。方法 采用DNAStar软件对LM inlA全长基因编码蛋白进行抗原表位分析,截取部分inlA基因片段构建原核表达质粒,诱导表达和纯化获得重组蛋白。以该蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性、稳定性进行评价。结果 筛选到2株高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体属于IgG1亚类,小鼠腹水抗体效价为1∶64000;研制的试纸条可与LM发生阳性反应,而与非LM李斯特菌、链球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O157∶H7等食源性致病菌均不发生阳性反应;LM纯培养物敏感性为2.4×10^5cfu/ml,模拟猪肉样品敏感性为4.0×10⁶ cfu/ml;4℃保存期可达16周以上。结论 研制的胶体金免疫层析试纸条具有快速、特异、敏感等优点,可以用于样品中LM的快速检测。     

纺织品中镉的胶体金免疫层析试纸条快速检测法

基于重金属镉单克隆抗体,研制了一种能简便快速筛查和检测纺织样品中镉的胶体金免疫层析试纸,优化了确定试纸的监测条件,并阐述该试纸的灵敏度、特异性和稳定性。结果表明,该试纸对纺织品中总镉含量和汗液中可萃取镉含量的检测限分别达到1 mg/kg和0.1 mg/kg,可在3~5 min内完成样品的定性或半定量测试;其灵敏度、特异性和稳定性均能满足实际样品的测试要求,适用于样品现场快速筛查和检测。     

草甘膦胶体金免疫层析试纸条的研制

基于竞争抑制免疫层析原理,开展茶叶中草甘膦快速检测试纸条的研制.采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了 20 nm胶体金颗粒,然后以胶体金为标记物制备草甘膦单克隆抗体-胶体金偶联物,以硝酸纤维素膜为固相载体,包被草甘膦半抗原-卵清蛋白偶联物为检测线、羊抗兔二抗为质控线,建立草甘膦的胶体金快速检测试纸条.同时优化了胶体金最适pH...     

T-2毒素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,研制出一种快速检测T-2毒素的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备20 nm胶体金,标记抗T-2毒素多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗兔二抗分别结合于硝酸纤维素膜上,经过试纸条层析条件优化,依次将样本垫、金标结合释放垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条。测试结果表明T-2毒素快速检测试纸条的灵敏度为50μg/L,检测时间为10 min,批内和批间重复性好,保存期为3个月。使用简单方便,非常适合现场快速检测T-2毒素。     

荧光免疫层析试纸在水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测中的应用

目的 建立一种快速检测水产品中呋喃唑酮代谢物的荧光免疫层析试纸。方法 以紫外灯下呈鲜亮红色的铕荧光微球为抗体标记物, 通过调试荧光微球-抗体复合物的工作液配方, 优化检测线和控制线, 改善试纸反应性能和荧光显色梯度, 提高试纸灵敏度。结果 结果显示, 通过肉眼判断本试纸对呋喃唑酮代谢物的最低检出限为0.25 mg/kg, 特异性良好, 在冷藏条件下其稳定性可达1年。在40批次不同品种水产品的检测中, 试纸检测结果与液相色谱-串联质谱法的检测结果符合程度为100%。结论 呋喃唑酮代谢物荧光免疫层析试纸具有快速简单、准确灵敏、成本低的优势, 其结果易于判定, 无需专门的检测仪器, 适用于大规模筛查、多环节质控和风险评估, 具有广阔的应用前景。     

一种多氯联苯胶体金免疫快速检测试纸条的研制

该研究制备了多氯联苯（PCB118）半抗原,基于该半抗原研制出一种能够检测饲料中多氯联苯的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试剂条检测限为10 μg/kg,检测时间约为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与多氯联苯PCB52、PCB101、PCB28、PCB138、PCB153、PCB180等药物无交叉反应,特异性较好,12个月内稳定性指标均符合要求,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》对快速检测产品的要求,该试纸条适用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

一种异丙威胶体金免疫快速检测试纸条的研制

农产品的农药残留检测方法较多,异丙威作为速效性农药,应用较为广泛,但是检测异丙威的快速检测方法极少。该研究通过制备异丙威半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中异丙威的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试纸条对蔬菜、水果等农产品中异丙威的最低检出限为10 μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与甲草胺、亚胺菌、乙霉威和异丁草胺等药物无交叉反应,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。该试纸条检测快速、便捷,能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

三甲氧苄氨嘧啶胶体金免疫层析检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测食品中三甲氧苄氨嘧啶(TMP)的方法.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗TMP单克隆抗体并冻干于聚苯乙烯微孔中,TMP-OVA和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条.测试结果表明,TMP快速检测试纸条的灵敏度为50 μg/L,检测时间为5min,特异性高,批内和批间重复性良好,与ELISA试剂盒方法和LC-MS/MS方法符合率为100％.使用简单方便,适合现场快速检测TMP.     

胶体金免疫层析试纸条快速检测水和玉米中阿特拉津的残留

本文以胶体金作为抗体标记物,建立了一种检测阿特拉津残留的免疫层析试纸条快速检测方法.该方法的检出限为2ng/mL,10min内可以得到检测结果.本文以自来水和玉米作为样品进行了添加回收实验,水样不需要任何前处理直接检测,水样的检出限为2 ng/mL;玉米样品经简单前处理后检测,玉米样品的检出限为40 ng/g,且该方法的检测结果与间接竞争ELISA方法的结果一致.该方法具有成本低、操作简单、灵敏度高、检测快速,结果易于判定等优点,适用于大量样品的现场筛选.     

胶体金试纸条同时检测鲤鱼中7种苯并咪唑类药物的残留

为检测鲤鱼中苯并咪唑类药物残留,降低其对人体造成的危害,本文基于单克隆抗体之上建立胶体金试纸条检测方法。首先以2-甲氧基羰基氨基-3H-苯并咪唑-5-羧酸为半抗原,用活化酯法偶联蛋白质制备免疫原,免疫小鼠,进行细胞融合制备单克隆抗体,而后用合成的胶体金标记单克隆抗体制备胶体金试纸条。通过间接竞争ELSIA法(ic-ELISA)测得阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的半抑制浓度(IC50)分别为0.44、0.16、3.47、5.62、0.62、0.10、5.77 ng/mL。胶体金试纸条在鲤鱼中的阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的检测限分别为4、2、50、100、10、1、100 ng/g,检测时间为15 min。因此,该方法灵敏度高、成本低、速度快且无需仪器辅助,适宜现场大量鲤鱼样本的快速检测。     

基于胶体金免疫层析技术的赤霉素快筛试纸条的研制

研制快速检测豆芽中赤霉素的快筛试纸条。采用免疫层析技术,以胶体金为标记物制备赤霉素单克隆抗体-胶体金偶联物,以竞争抑制模式制备赤霉素胶体金免疫层析试纸条。该试纸条对豆芽中赤霉素的检测限为100 μg/kg,灵敏度为98%,特异性为97%,假阴性率为2%,假阳性率为3%。该方法操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,可广泛应用于豆芽中赤霉素残留的现场筛查和检测。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

双酚A快速检测胶体金试纸的研制

为建立一种快速检测双酚A(BPA)的方法,本论文建立以胶体金为基础的免疫层析法(GICA)。首先通过BPA人工抗原免疫Balb/c小鼠,然后利用正常的杂交瘤技术制备BPA的单克隆抗体,所制备的抗体经过辛酸-硫酸铵(CA-AS)沉淀法纯化后并鉴定为IgG2b亚型。胶体金是由柠檬酸三钠还原氯金酸而制得,通过紫外扫描光谱和透射电镜检测,结果表明胶体金在530 nm有单一吸收峰、粒径约为30 nm。用其标记BPA单克隆抗体,制备金标抗体。本研究所制备的胶体金免疫层析试纸条的检测限为100 ng/mL,检测时间为10 min,交叉反应表明,试纸条和BPA的结构类似物双酚酸、任基酚和辛基酚无交叉反应,有良好的再现性。该方法能够方便、快捷、有效的检测环境中的BPA,免疫层析试纸的研制为BPA进行现场快速的检测奠定了基础。     

胶体金免疫层析技术快速检测沙丁胺醇残留

建立胶体金免疫层析检测法,用于动物组织或饲料样品中沙丁胺醇残留的快速检测。采用胶体金免疫竞争法,将兔抗沙丁胺醇多克隆抗体-胶体金标记物包被在胶体金聚酯结合垫上,并将沙丁胺醇-BSA抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线,与待测试样中的沙丁胺醇竞争结合胶体金标记的兔抗沙丁胺醇多克隆抗体,从而判断试样中是否有沙丁胺醇存在。本文优化了检测试剂,可检测出猪肉等组织和饲料试样中沙丁胺醇的低限浓度为2 ng/mL,与盐酸克伦特罗的交叉反应率为2.67%,且试验在3 min内完成,肉眼可判断结果。本检测方法检测沙丁胺醇,灵敏度高,特异性好,可用于现场的快速检测和筛查。     

除草剂扑草净胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备了扑草净胶体金免疫层析检测试纸条,建立了水样中扑草净的快速检测方法.采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备胶体金,对胶体金免疫层析方法的工作条件(NC膜的封闭条件、金标垫的处理方法)进行优化.最终建立的方法检出限为5 ng/mL,5min内可以通过目测进行结果判断.河水样品不需要任何处理可以直接进行检测,检出限为5 ng/mL.本研究建立的快速免疫检测方法适用于水中扑草净残留的现场检测.     

胶体金免疫层析试纸条技术及其在食品安全检测中的应用研究进展

本论文介绍了胶体金免疫层析试纸条技术的基本原理和制备方法,并概述了该技术在医疗检测、食品检测和重金属检测领域的应用研究进展,展现了胶体金免疫层析技术所具有的敏感性和特异性高、操作便捷及可快速判读结果等特点,同时也提出了此项技术目前所存在的一些局限性,并探讨了其在未来研究应用中的发展方向,为我国食品安全快速定量检测技术发展提供文献支持。     

呋喃西林代谢物单克隆抗体及荧光免疫层析试纸条的制备

为建立一种基于荧光免疫层析技术的呋喃西林代谢物的快速检测方法,采用活性酯法合成呋喃西林代谢物（氨基脲盐酸盐）（semicarbazide hydrochloride,SEM）人工抗原,并获得SEM的单克隆抗体,通过将量子点微球（quantumdot submicrobeads,QBs）与SEM偶联,得到QBs探针,制备荧光免疫层析试纸条。结果表明：SEM免疫荧光层析试纸条检测鱼肉组织的检测限为0.247 μg/L,不同添加质量浓度的回收率均在70%～120%之间,批内、批间变异系数均在15%以下,符合我国动物源食品中兽药残留检测方法相关指导文件的规定,且在2～8 ℃条件下可以保存6 个月以上,稳定性良好。     

幽门螺杆菌单克隆抗体的制备及其检测应用

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种定居于人胃部及十二指肠的微需氧革兰氏阴性菌,其长期感染导致胃炎、胃及十二指肠溃疡与胃癌。幽门螺杆菌感染主要始于儿童期,其自发性清除非常少见,及早通过检测发现并加以抗生素治疗可有效降低成人感染率。本文通过体外培养Hp标准菌株ATCC43504,将其裂解液作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过常规技术路线制备杂交瘤细胞。经间接ELISA法筛选和多次有限稀释法亚克隆得到21株稳定分泌抗Hp抗原的杂交瘤细胞株,制备腹水并用辛酸硫酸铵联合沉淀法纯化单克隆抗体。将得到的单克隆抗体在胶体金免疫层析平台上进行配对和样品检测,获得多组灵敏度和特异性相对较高的单克隆抗体组合,其中以2-18E1作为包被抗体,2-9H5或2-17E9作为标记抗体检测细菌培养裂解物的最低限为25 ng/m L,为Hp抗原检测试剂的研发提供了基础。