棒曲霉毒素对人胚肾细胞增殖与诱导其凋亡的研究

本文研究了棒曲霉素抑制人胚肾细胞增殖与诱导其凋亡的作用。不同浓度的棒曲霉素作用于人胚肾细胞293后,采用乳酸脱氢酶释放检测棒曲霉素对细胞增殖的抑制作用。通过扫描电镜和荧光显微镜观察了细胞形态学的变化,Annexin V-EGFP/PI标记检测细胞凋亡率,JC-1线粒体膜电位荧光探针检测了细胞线粒体膜电位的变化。实时荧光定量PCR测定了线粒体相关基因FIS1、ASL、SLC25A6、COX17的表达水平。结果表明,棒曲霉素可显著抑制人胚肾细胞293增殖并诱导凋亡,具有明显的量效关系,2.5、5、7.5、10和15μM棒曲霉素对人胚肾细胞293的抑制率分别为8.1%、18.2%、31.0%、42.2%和63.1%;5μM棒曲霉素处理0、3、10、24 h,细胞的存活率分别为94.2%、78.1%、47.4%。5μM和10μM的棒曲霉素处理8h后,细胞凋亡率分别为16.4%,和20.1%。线粒体膜电位和线粒体相关基因的表达水平的变化表明棒曲霉素可能通过线粒体途径引起人胚肾细胞293凋亡。     

高效液相色谱法检测浓缩苹果汁中的棒曲霉毒素

介绍了采用高效液相色谱法对浓缩苹果汁中棒曲霉毒素的检测。结果表明,该方法操作简单、快速、准确灵敏,检出限为10μg／L,满足标准限量的要求。     

齐墩果酸拮抗赭曲霉毒素A诱导的HEK293T细胞自噬性死亡

目的:探索齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的肾细胞毒性的拮抗机制。方法:将实验分为6组(对照组、OTA组、OA组、OA预处理组、OA和OTA同时处理组和OA后处理组)处理人胚肾上皮细胞(HEK293T),通过测定细胞存活率确定OA的拮抗剂量为1 μmol/L,并进一步通过OA和OTA对活性氧簇(ROS)含量和自噬相关蛋白表达影响的研究,探明OA拮抗OTA诱导的HEK293T细胞毒性的机制。结果:低浓度的OA(1 μmol/L)能够显著提高细胞存活率(p<0.05)。虽然1 μmol/L OA不会明显诱导ROS产生和激活自噬(p>0.05),但是能够通过调节p-mTOR、p-p70S6K、p-Beclin1和LC3的表达来不同程度缓解OTA诱导的HEK293T细胞的自噬性死亡,OA后处理方式效果最为明显(p<0.05)。结论:摄入含OA的食品能够对OTA诱导的肾细胞毒性有一定的拮抗作用。     

黄曲霉毒素M_1与赭曲霉毒素A联合作用诱导分化Caco-2细胞凋亡的机制

目的:研究了黄曲霉毒素M_1(Aflatoxin M_1,AFM_1)和赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)交互作用诱导分化人结肠癌Caco-2细胞凋亡及其作用机制。方法:AFM_1和OTA单独及联合作用于分化的Caco-2细胞后,通过阿尔玛蓝(Alamar-Blue)法测量细胞存活率,研究AFM_1和OTA对细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术检测细胞凋亡率,活性氧荧光探针检测细胞活性氧(ROS)释放量,JC-1线粒体膜电位荧光探针检测细胞线粒体膜电位变化。蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达水平。结果:AFM_1和OTA可抑制分化的Caco-2细胞增殖并诱导其凋亡,单独使用12μmol/L AFM_1和6μmol/L OTA作用于细胞存活率分别为95.59%和93.14%,联合作用下细胞存活率为81.57%,提示联合作用具有协同作用;AFM_1和OTA单独处理细胞24 h后,细胞的凋亡率分别为25.68%和33.7%,联合作用细胞的凋亡率为37.4%;AFM_1和OTA单独作用下细胞ROS的释放量分别是空白对照组的1.37倍和1.79倍,交互作用是空白对照组的6.21倍,交互作用对活性氧的释放量明显增加。结论:线粒体膜电位和线粒体相关凋亡蛋白的表达水平变化,说明AFM_1和OTA可能通过线粒体途径诱导分化的Caco-2细胞凋亡。     

高效液相色谱法测定浓缩苹果汁中棒曲霉毒素

利用全自动凝胶渗透色谱净化系统净化、在线浓缩样品,采用高效液相色谱分离,紫外检测器检测建立了浓缩苹果汁中棒曲霉毒素的检测方法。样品经乙酸乙酯:环己烷(1:1)提取,凝胶渗透色谱(GPC)净化,在线浓缩并定容,采用C18柱分离,以乙腈:水(体积比为10:90)为流动相,流速1.0ml/min;检测波长276nm。浓度0.01～10.0mg/L时线性关系良好,加标回收率为83%～107%,相对标准偏差为7.8%～11.4%,检出限0.005mg/kg。该方法操作简单、灵敏度高、重复性好。     

高通量基因表达谱的应用

基因表达谱可以描绘特定情况下组织、细胞中所表达的全套基因及其丰度,它从mRNA水平上反映出组织或细胞特异性表型和表达模式.目前基于高通量的基因表达谱主要有基因芯片和数字基因表达谱(DGE).本文主要介绍了基因芯片和DGE的原理、特点,并对其在作物科学、动物科学和乳品科学中的应用做了简要列举.     

枸杞多糖对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的影响

目的：研究枸杞多糖(LBP)对顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞(HEK293)凋亡的影响,并探讨其可能机理。方法：体外培养HEK293,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察LBP对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,流式细胞仪检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡率的变化：Western blotting检测LBP对CDDP诱导HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：LBP能够拮抗CDDP诱发的细胞毒性,并且随着质量浓度的不同而产生变化。流式细胞仪检测表明随着LBP质量浓度的增加,细胞凋亡率随之减少;Western blotting表明,加入LBP后能够使Bax基因的表达减少而Bcl-2基因的表达增加。结论：LBP对CDDP诱导人胚肾细胞凋亡有抑制的作用,其作用机理可能与其下调Bax及上调Bcl-2蛋白表达有关。     

黄曲霉毒素B1与杂色曲霉素对HepG2细胞的联合毒性

研究了黄曲霉毒素B1(AFB1)和杂色曲霉素(ST)对人肝癌细胞Hep G2的细胞毒性及其联合毒性。体外培养人肝癌细胞Hep G2,用不同浓度梯度的AFB1(0.1、1、5、10μmol/L)和ST(0.5、2.5、5、7μmol/L)单独和联合作用于Hep G2细胞24 h或48 h,分别测量细胞活性、ATP含量、DNA受损程度、线粒体膜电位,以及活性氧含量的变化,通过统计分析得到两种毒素对Hep G2细胞的联合毒性作用。结果显示,AFB1和ST对Hep G2细胞的IC50分别为16.989μmol/L和7.258μmol/L,细胞增殖力、ATP、DNA、线粒体膜电位、活性氧等指标的理论加和值与实际值无显著性差异(P0.05)。同时,这两种毒素及其混合物对Hep G2细胞的作用终点均可分为3类:第一类为细胞增殖力的降低;第二类包括ATP含量、DNA含量变化;第三类为活性氧含量变化和线粒体膜通透性变化。表明AFB1和ST对Hep G2细胞的联合毒性作用为加和作用。     

黄曲霉毒素B1致癌毒性相关基因的生物信息学分析

黄曲霉毒素是广泛存在于食品中的对人类危害最大的、最常见的霉菌毒素,其中黄曲霉毒素B1是致癌毒性最强的一种。为了筛选与黄曲霉毒素B1致癌作用密切相关的基因,利用生物信息学技术对从GEO数据库中下载的三组相关的人基因组芯片实验数据集作系统的聚类分析,并对候选基因进行初步的数据库检索。首先选取数据集中表达比值相差2倍以上的基因做聚类分析,然后对聚集结果中表达趋势最为接近的差异基因作生物信息学数据库的检索,最后发现KRT15、PCNA、MMP1等多条基因与黄曲霉毒素B1关系紧密。通过对三组基因组芯片数据的生物信息学分析,找出了多条可能是黄曲霉毒素B1致癌毒性相关的关键基因,为进一步研究黄曲霉毒素诱导癌症发生、发展的具体机理提供了新的思路。     

白藜芦醇对玉米赤霉烯酮毒素致人胚肾HEK293细胞毒性的干扰作用

玉米赤霉烯酮毒素(ZEA)是一种非甾体霉菌毒素,存在于霉变的谷物中,具有类其雌激素样作用,能引起生殖机能异常。但是关于ZEA的肾脏毒性研究的比较少。白藜芦醇(RSV)是在红酒、葡萄中存在的一种多酚化合物,具有抗氧化作用。通过不同浓度梯度的ZEA(3、15、75、150、300μM)、RSV(0、0.01、0.1、1、10、100μM)和DL-α-lipoic acid(LA)(0、1、10、100、1000μM)作用于人胚肾HEK293细胞24 h,细胞活性的测定显示ZEA对HEK293细胞的IC50为80μM,而RSV(10μM)和LA对细胞无明显损伤。利用RSV和LA对细胞进行预处理24 h之后,再将ZEA作用于细胞24 h,通过细胞增殖力、ROS、MDA、SOD、Mn SOD指标的检测,表明RSV/LA能提高细胞的抗氧化性,减轻ZEA产生的细胞毒性和氧化损伤。同时,ZEA可引起促凋亡基因Bax的显著表达,但对于SIRT1和抗凋亡基因Bcl-2的表达没有影响,而RSV预处理能显著提升SIRT1和Bcl-2的表达,降低Bax的表达,发挥抗凋亡作用。     

人参皂苷F2干预NF-κB通路抑制H2O2诱导的细胞凋亡

本研究通过测定人参皂苷F2对凋亡细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率和线粒体膜电位的影响,运用qRT-PCR和Western blot检测F2对NF-κB凋亡信号通路中p65蛋白的影响.发现H2O2损伤细胞的LDH释放率较对照组的有明显提高42.72％;线粒体膜电位下降,损伤组的相对荧光值较对照组降低44.03％; NF-κ...     

A mathematical model of in vivo bovine blastocyst developmental to gestational Day 15

Bovine embryo growth involves a complex interaction between the developing embryo and the growth-promoting potential of the uterine environment. We have previously established links between embryonic factors (embryo stage, embryo gene expression), maternal factors (progesterone, body condition score), and embryonic growth to 8 d after bulk transfer of Day 7 in vitro-produced blastocysts. In this study we recovered blastocysts on Days 7 and 15 after artificial insemination to test the hypothesis that in vivo and in vitro embryos follow a similar growth program. We conducted our study using 4 commercial farms and repeated our study over 2 yr (2014, 2015), with data available from 2 of the 4 farms in the second year. Morphological and gene expression measurements (196 candidate genes) of the Day 7 embryos were measured and the progesterone concentration of the cows were measured throughout the reproductive cycle as a reflection of the state of the uterine environment. These data were also used to assess the interaction between the uterine environment and the developing embryo and to examine how well Day 7 embryo stage can be predicted from the Day 7 gene expression profile. Progesterone was not a strong predictor of in vivo embryo growth to Day 15. This contrasts with a range of Day 7 embryo transfer studies which demonstrated that progesterone is a very good predictor of embryo growth to Day 15. Our analysis demonstrates that in vivo embryos are 3 times less sensitive to progesterone than in vitro-transferred embryos (up to Day 15). This highlights that caution must be applied when extrapolating the results of in vitro embryo transfer studies to the in vivo situation. The similar variance in measured and predicted (based on Day 15 length) Day 7 embryo stage indicate low stochastic perturbations for in vivo embryo growth (large stochastic growth effects would generate a significantly larger standard deviation in measured embryo length on Day 15). We also identified that Day 7 embryo stage could be predicted based on the Day 7 gene expression profile (58% overall success rate for classification of 5 embryo stages). Our analysis also associated genes with each developmental stage and demonstrates the high level of temporal regulation of genes that occurs during early embryonic development.     

葡萄籽原花青素对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的拮抗作用

目的： 探讨葡萄籽原花青素（ g r a p e s e e d p r o a n t h o c y a n i d i n , G S P E ） 对顺铂（cis-diamminedichloroplatinum,CDDP）诱导人胚肾细胞HEK293凋亡及相关凋亡基因的影响,并探讨可能的机制。方法：体外培养正常HEK293细胞,噻唑蓝法测定GSPE、CDDP分别对HEK293细胞生长的影响以及GSPE对CDDP诱导HEK293细胞毒性的保护作用,流式细胞仪测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡率的变化,Western blotting测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：GSPE对CDDP所致HEK293细胞毒性具有拮抗作用,可减轻CDDP所致HEK293细胞凋亡,减弱Bax表达、增强Bcl-2表达。结论：GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡具有拮抗作用,其机制可能与GSPE降低促凋亡基因Bax,升高抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

基于RNA-Seq的油茶种子油脂合成过程磷脂酰肌醇信号系统的基因分析

磷脂酰肌醇信号系统在植物的种子萌发、生长发育、繁殖、衰老及对环境因素的应激反应中具有重要的作用。在构建油茶种子转录组数据库,以及油茶种子果实膨大期和油脂合成高峰期的表达谱数据库的基础上,对油茶种子磷脂酰肌醇信号系统的相关基因进行了分析。转录组数据分析结果表明,油茶种子磷脂酰肌醇信号系统非冗余基因Unigene序列共212条,包含PIK、PIPK、PIS、DGK、PLC等12种关键基因;表达谱数据分析显示,油茶种子果实膨大期和油脂合成高峰期调控磷脂酰肌醇信号系统的关键基因具有不同的表达模式。克隆、调控这些关键基因将有利于研究油茶种子发育过程中磷脂酰肌醇信号途径与其他信号途径的相互作用,为提高油脂含量、培育高品质油脂的油茶育种提供依据。     

巴莲莲子生物碱提取物对人肝癌细胞HepG2的体外抗癌效果

本研究对巴莲莲子生物碱提取物的体外抗癌效果进行研究,以证实巴莲莲子生物碱提取物的生理活性作用。采用噻唑蓝法、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测巴莲莲子生物碱对人肝癌细胞HepG2的体外增殖抑制作用和凋亡诱导作用。巴莲莲子生物碱可以抑制HepG2细胞的体外增殖,但是对正常肝细胞L02无毒性,不影响其增殖。通过对癌细胞形态的观察发现随着巴莲莲子生物碱质量浓度的提高,更多的癌细胞被诱导凋亡从而死亡。同时,巴莲莲子生物碱能上调HepG2细胞的Bax、caspase-3、caspase-8、caspase-9、p53、p21基因表达和下调Bcl-2、Bcl-x L基因表达,从而促进癌细胞凋亡。巴莲莲子生物碱是一类生物活性成分,实验条件下具有较好的体外抗癌效果。     

Morphological,Thermal, and Cytotoxicity Features Assessment of Starch–Myristic Acid Complex-Derived Nanostructured Materials

The present study investigates the morphological and cytotoxic properties of starch–myristic acid complex (SMC) derivatives. The study attempts to prepare a SMC by frying. By liquid–liquid extraction, starch–myristic acid complex nanostructured materials are isolated. X-ray diffractometry and transmission electron microscopy are used to determine the morphology and crystallization of the extract. The study performs various assays to assess the toxicological profile of starch–myristic acid complex-derived nanostructured materials (SMC-NMs), including cellular viability tests, cellular and nuclear morphological examinations, mitochondrial membrane potential (MMP), and intracellular reactive oxygen species (ROS) measurements. Transmission electron microscopy (TEM) images reveal nanoscale particles between 30 and 90 nm in water fraction-based SMC-NMs (WSMC-NMs) and 160 and 250 nm in methanol fraction-based SMC-NMs (MSMC-NMs). The WSMC-NMs and MSMC-NMs decrease the cell viability by 77% and 91% at 250 µg mL⁻¹, respectively. The SMC-NMs enhance necrotic cell death by increasing the level of ROS in human mesenchymal stem cells (hMSCs). The SMC-NMs alter gene expression within 24 h. Gene expression of GSTM3 and GSR has explicitly upregulated in a dose-dependent manner in WSMC-NMs and MSMC-NMs exposed cells. The study finds that nanoscale particles may develop during cooking, increasing the risk of diabetes, cardiovascular diseases, and obesity.