广州市白云口岸航空食品中金黄色葡萄球菌凝固酶基因分型及肠毒素基因研究

目的对2013—2015年从广州市白云口岸航空食品中分离的金黄色葡萄球菌进行基因分型研究,为食源性金黄色葡萄球菌分子溯源提供基础数据。方法以血浆凝固酶和肠毒素为目标基因,采用聚合酶链式反应(PCR)方法对9株金黄色葡萄球菌进行基因分型,其中6株为航空食品分离株,1株为配餐车间大门手拭分离株,2株为标准菌株。肠毒素基因检测包括5种传统肠毒素基因(sea、seb、sec、sed、see)和6种新型肠毒素基因(ser、seg、seh、sei、sej、sep)。结果 6株航空食品分离株的血浆凝固酶基因扩增分型结果为2个PCR型,酶切后得3种亚型;肠毒素基因检测结果显示有2株航空食品分离株含有肠毒素基因,检出率为33.3%(2/6),检出的基因为2种传统肠毒素基因(sec、sed)和4种新型肠毒素基因(ser、seg、sei、sej),均同时携带2种以上肠毒素基因。结论血浆凝固酶基因扩增分型结果显示,不同时间、不同采集地点存在相同的基因型,提示金黄色葡萄球菌存在交叉污染的可能性;航空食品分离株共检出6种肠毒素基因,提示金黄色葡萄球菌基因型多样性,应加强其他新型肠毒素基因检测。     

上海市食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子特征及耐药性

目的:了解上海市不同类型食品中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的流行情况及其分子特征和耐药性。方法:以2011—2016年从上海市收集到的184株食源性金黄色葡萄球菌为研究对象,通过检测其mecA基因筛选出MRSA菌株,对筛选出的MRSA菌株进行葡萄球菌A蛋白分型、多位点序列分型和葡萄球菌染色体基因盒mec分型以及毒素基因和耐药性检测。结果:184株食源性金黄色葡萄球菌共检测到9株MRSA菌株,检出率为4.9%(9/184),其中1株来源于鸡蛋样本,1株来源于凉拌菜样本,3株来源于生肉制品和4株来源于熟肉制品。所有的MRSA菌株均表现为多重耐药,其中,对氨苄西林和青霉素的耐药最为普遍(100.0%,9/9),其次为头孢西丁和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(88.9%,8/9)、红霉素(55.6%,5/9)、阿莫西林/克拉维酸(33.3%,3/9)、四环素和苯唑西林(22.2%,2/9)和环丙沙星(11.1%,1/9)。所有的MRSA菌株除对溶血素基因(hla、hlb和hld)和杀白细胞素基因(pvl)携带率较高外,对所有肠毒素基因的携带率都呈现较低水平。所有的MRSA菌株共涵盖6种分子型,主要分子型为ST59-IVa-t437(33.3%,3/9)和ST88-III-t14340(22.2%,2/9),其次为ST398-IVa-t034、ST630-III-t4549、ST5-II-t002和ST4495-t10738(11.1%,1/9)。结论:上海市食源性MRSA主要污染食源性动物制品和手工食品,其污染率较低;与动物源、社区获得性和医院获得性MRSA菌株均存在相同的分子型,虽然检出率不高,但其仍然存在通过食物链进行传播的可能。     

合肥市即食肉类食品中金黄色葡萄球菌污染情况及耐药和基因型分布

目的调查合肥市即食肉类食品中金黄色葡萄球菌的污染情况,并对分离株进行耐药性分析及多位点序列分型研究。方法 2017年10月—2018年10月自合肥市区范围内的超市和开放型菜市场共采集744份即食型肉类食品样品。根据GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》中的方法对样品进行金黄色葡萄球菌定性和定量分析,采用K-B纸片扩散法检测分离株的耐药性,采用多位点序列分型法对分离株进行ST分型,使用MEGA 7.0绘制聚类树状图。结果样品中金黄色葡萄球菌检出率为4.2%(31/744),其中卤肉制品检出率最高为8.1%(15/185),其次为烤肉制品(6.3%,11/174),定量分析显示超过90%的样品金黄色葡萄球菌污染水平在0.3～10 MPN/g范围内。耐药性分析结果显示80.6%(25/31)的菌株对青霉素G耐药,40%以上的菌株对链霉素、红霉素和卡那霉素耐药;多重耐药菌株占比为61.3%(19/31)。分型分析共获得8个ST型,分别为ST6、ST7、ST15、ST59、ST72、ST188、ST398和ST2196型,其中以ST188和ST72型为主。结论合肥市卤肉和烤肉制品中存在金黄色葡萄球菌污染,且多重耐药菌株比例较高,对消费者的健康有潜在威胁,有必要持续监测污染率、菌株耐药和基因型流行趋势,完善合肥市食源性金黄色葡萄球菌感染的风险评估。     

温州市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及分子流行病学特征研究

目的了解温州市食品中金黄色葡萄球菌的污染状况,分析分离的金黄色葡萄球菌的耐药性、毒力基因分布及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法依据GB 4789.10—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行菌株分离鉴定,采用纸片法进行药敏试验,mini-VIDAS法和聚合酶链式反应(PCR)法分别进行肠毒素及其基因的检测,PFGE法进行分子分型。结果 4类食品388份样品中有16份样品检出金黄色葡萄球菌,检出率为4.12%,其中生畜肉和生禽肉检出率较高,分别为13.89%(5/36)和11.11%(4/36)。所有菌株均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率最高(100.00%,16/16),其次为红霉素(56.25%,9/16),多重耐药率为18.75%(3/16),未检出对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌肠毒素及其基因检测阳性率均为56.25%(9/16),其中seb、seg基因检出率较高,均为37.50%(6/16)。PFGE图谱分为12种PFGE带型。结论金黄色葡萄球菌在温州市食品中存在一定的污染率,且具有分子多态性、产肠毒素率及毒素基因携带率较高的特征,提示存在潜在的食品安全隐患。     

鸡肉生产中分离金黄色葡萄球菌的基因分型与耐药性分析

为探究鸡肉制品在加工过程中金黄色葡萄球菌的肠毒素基因分布、分子分型和耐药性情况,本研究对某鸡肉制品加工厂的生产加工过程进行取样,通过DNA提取、PCR扩增nuc基因对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,然后分析肠毒素基因分布情况,对获得带有毒素基因的菌株进行多位点序列分型（MLST）和耐药性研究。结果表明,260份样本中分离到38株金黄色葡萄球菌（其中携带肠毒素基因的菌株有24株）,检出率为63.16%;共检测到7种毒素基因型,其中sed携带率最高（60.53%）,依次为seg（26.32%）、see（21.05%）、sei（18.42%）、sec（10.53%）、sea（7.89%）、seh（5.26%）,携带两种及以上肠毒素基因的菌株有14株（36.84%）。24株携带毒素基因的菌株MLST分型都为ST型,分为3种ST分型,16株为ST7序列型（66.67%）;5株为ST5序列型（20.83%）;3株为ST464序列型（12.5%）。耐药性分析实验结果表明,抑菌效果最好的抗生素是万古霉素,38株菌株都对其敏感（100%）;绝大多数菌株都对抗生素有耐药性,依次为青霉素G（86.84%）、环丙沙星（60.53%）、克林霉素（55.26%）、四环素（52.63%）;对3-6种抗生素耐药的金黄色葡萄球菌菌株分别占18.42%、15.79%、23.68%、7.89%。研究结果表明鸡肉产品中存在金黄色葡萄球菌污染的情况,并且其中存在携带多种类型肠毒素基因的菌株,也存在具有多重耐药性的菌株。     

广州市售生猪肉中金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究

了解广州市某区猪肉中金黄色葡萄球菌的污染情况、分子分型及其耐药性特征。根据GB 4789.10-2010对样品进行金黄色葡萄球的分离及鉴定,用多位点序列分型法进行分子分型,纸片扩散法进行抗生素敏感试验,采用PCR法验证MRSA并筛选检测I类整合子及相关耐药基因盒。110份生猪肉样品中有34份样品检出金黄色葡萄球菌(30.9%),得到34株该菌,所有菌株共可分成7种序列分型(sequence types,STs),分别为ST6(1/34)、ST7(16/34)、ST9(9/34)、ST59(1/34)、ST239(4/34)、ST2259(2/34)及一株等位基因谱为5-4-1-4-4-6-53的新型ST,34株金黄色葡萄球菌对12种抗生素耐药率分别为对青霉素100%耐药,对四环素、甲氧苄胺嘧啶、红霉素、克林霉素的耐药率分别为88.2%、76.5%、64.7%、61.8%,MRSA检出率为38.3%(13/34),I类整合子的检测率为14.7%(5/34),其中2株菌携带相应基因盒。本次实验显示生猪肉中金黄色葡萄球菌污染比较严重且具有严重的抗生素耐药现象,ST7为主要的序列型号,I类整合子存在于食源性金黄色葡萄球菌中,相关基因盒对菌株耐药发挥作用。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因型分布研究

目的 采用PCR法扩增食源性金黄色葡萄球菌中肠毒素基因以了解该菌肠毒素基因携带情况,比较食物中毒和食品监测来源菌株中肠毒素基因检出率差异.方法 合成sea、seb、sec、sed和see五种肠毒素基因特异性引物,用常规PCR方法扩增食物中毒和食品监测来源菌株中各自肠毒素基因,同时采用mini-VIDAS检测食物中毒来源菌株中肠毒素.结果 110株菌株中有30株检出肠毒素基因,检出率为27.3％,肠毒素基因阳性菌株均只检出1种肠毒素基因.其中来自2起食物中毒的14株菌株均检出seb型肠毒素和相关基因,检出率为100％.来源于食品监测样本的96株菌株中有16株检出肠毒素基因,检出率为16.7％,包括sea型4株、seb型2株、sec型4株、sed型6株.结论 在宁波市食品监测中所分离的金黄色葡萄球菌所携带的肠毒素基因主要有sea、seb、sec和sed四型,而seb型肠毒素是引起金黄色葡萄球菌肠毒素所致食物中毒的主要因素.     

陕西省和上海市市售猪肉中金黄色葡萄球菌分子多样性及耐药性研究

为了解市售猪肉中金黄色葡萄球菌的分子多样性和耐药性,本研究对分离于陕西省和上海市的110株猪肉源金黄色葡萄球菌进行15种抗生素耐药性、26种耐药基因、23种毒力编码基因及SPA和MLST分子分型检测。药敏结果显示,菌株对β-内酰胺类和叶酸代谢途径抑制剂的耐药性最为普遍,其次为四环素和大环内酯类抗生素。其中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因主要为blaZ、四环素类抗生素耐药相关基因主要为tetK和大环内酯类抗生素耐药相关基因主要为ermB和ermC。分离株耐药性受采样地点和耐药基因影响,分离自上海市分离菌株较陕西省分离株耐药更为严重(P＜0.01)。此外,还检测到2株MRSA菌株。23种被检毒力编码基因中有18种毒力编码基因被检出,其中seg、sei、sem、sen、seo、seu、sea、sep、sed、sej、ser基因携带率较高。陕西省毒力编码基因的携带率85%(34/40)显著高于上海市27.1%(19/70),其中经典肠毒素编码基因的携带率分别为65.0%(22/40)和10.0%(10/70)。所有分离株共有31种克隆型,陕西省的主导分子型为ST6-t701(22.5%,11/40),上海市的主导分子型为ST3055-t084(31.4%,22/70)。此外,分离株携带肠毒素编码基因与分子型有相关性,如ST6-t701高度携带sea,ST7-t091主要携带sep,ST5-t002主要携带seg-sei-sem-sen-seo-seu。结果表明,市售猪肉中金黄色葡萄球菌耐药严重,携带肠毒素编码基因较多,可能通过食物链进行传播。     

鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌污染及耐药性和毒力基因分析

目的 了解鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌的检出情况、耐药性以及毒力基因分布特征。方法 从湖北省襄阳市、十堰市、随州市三地共采集303份食物样品进行金黄色葡萄球菌筛查,通过聚合酶链式反应(PCR)法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的鉴定和毒力基因检测,并用K-B纸片扩散法进行耐药性测定。结果 303份样品中共有41份检出金黄色葡萄球菌,阳性率为13.53%,其中生肉制品检出率最高(23.91%,22/92)。在产肠毒素菌株中以携带产肠毒素基因sea的菌株最多,占87.80%(36/41)。携带表皮剥脱素基因eta和中毒性休克综合征毒素基因tst的菌株分别占97.56%(40/41)和7.32%(3/41)。同时携带3种及以上肠毒素基因的菌株占17.07%(7/41)。同时含有eta和tst的菌株占2.44%(1/41)。药敏结果显示,分离菌株对青霉素、四环素、红霉素和多西环素的耐药率分别为78.05%(32/41)、43.90%(18/41)、31.71%(13/41)和21.95%(9/41),对其他8种抗菌药物的耐药率均<20%。mecA基因检测表明,19.51%(8/41)的菌株为MRSA,且7株MRSA菌株来源于生肉制品和未加调料的素卤菜。结论 鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌具有较高的检出率,而且产毒株较多,并且存在多重耐药现象,相关部门需加强食品安全监测以控制该菌株的流行与扩散。     

温州市单核细胞增生李斯特菌的毒力基因及血清学分型和分子分型研究

目的了解温州市近十年单核细胞增生李斯特菌分离株的血清型、毒力基因及分子分型特征。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法对单核细胞增生李斯特菌进行血清型及毒力基因检测;用多位点序列分型(MLST)方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型,并绘制MLST数据的最小生成树。结果 97株单核细胞增生李斯特菌分离株分为4种血清型,以血清型1/2b、1/2a为优势血清型,占比分别为48.45%(47/97)、35.05%(34/97);而毒力基因iap、prfA基因阳性率均为100.00%(97/97),hlyA、inlA基因阳性率均为97.94%(95/97),plcB基因阳性率为96.91%(94/97)。其中患者分离株5种毒力基因阳性率均为100.00%(6/6)。97株单核细胞增生李斯特菌分离株得到20个MLST型别,其中ST87型是优势型别,其次为ST121和ST9,ST1和ST779型是患者特有的,ST2、ST3、ST5型分布于食品和患者分离株。结论温州市不同来源的单核细胞增生李斯特菌分离株分子型别呈多态性,食品和患者分离株存在相同的ST型,且这些菌株大部分携带毒力基因,具有潜在的致病性,因此食品中单核细胞增生李斯特菌污染的潜在风险不容忽视。     

2009—2020年北京市朝阳区113株食源性金黄色葡萄球菌耐甲氧西林和肠毒素/类肠毒素基因携带与分子分型分析

目的 了解北京市朝阳区2009—2020年113株食源性金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药、肠毒素/类肠毒素基因携带和分子分型情况.方法 采用纸片扩散法进行头孢西丁药物敏感性实验,结合mecA基因扩增鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)...     

食源性产志贺毒素大肠杆菌的分离及菌株特征分析

了解不同食品中产志贺毒素大肠杆菌的流行情况、菌株特征及潜在致病性。方法 对我国不同地区采集的355份食品样品进行产志贺毒素大肠杆菌分离鉴定,对菌株进行stx1/stx2基因分型、eae等毒力基因检测,并对菌株进行多位点序列分型(MLST)分析。结果 355份样品中44份stx2基因阳性,共分离出11株非O157 产志贺毒素大肠杆菌,其中3株携带stx2a亚型,3株携带stx2e亚型,1株携带stx2b亚型,4株不能分型;5株携带ehxA、saa毒力基因,2株携带subA基因,1株携带katP基因;MLST将11株菌分为7个不同的ST型,存在与溶血性尿毒综合症患者肠出血性大肠杆菌分离株(HUS-associated enterohemorrhagic E.coli,HUSEC)及主要流行血清群产志贺毒素大肠杆菌亲缘关系较近的ST型别。结论 我国食品中存在一定程度的非O157产志贺毒素大肠杆菌污染,部分菌株具有潜在致病性,应加强对食品中STEC的监测。     

温州地区蜡样芽胞杆菌分型特征研究

目的了解温州地区不同来源蜡样芽胞杆菌毒力基因分布、生化分型和多位点序列分型(MLST)特征。方法参照GB 4789.14—2014对127株蜡样芽胞杆菌进行鉴定和生化分型,同时采用PCR方法检测10种毒力基因,并进行MLST基因分型。结果 127株蜡样芽胞杆菌同时携带Nhe A、Nhe B、Nhe C基因的菌株占94.5%(120/127),而同时携带hbl A、hbl C、hbl D基因的占9.4%(12/127),携带ces基因的占7.9%(10/127);127株菌株除10株不能进行生化分型外,其余117株分为2型(0.8%,1/127)、5型(3.9%,5/127)、8型(1.6%,2/127)、9型(63.8%,81/127)和10型(22.0%,28/127);通过MLST分析,72株菌株共分为28个ST序列型,ST26(18.1%,13/72)、ST144(15.3%,11/72)、ST92(6.9%,5/72)和ST164(6.9%,5/72)为常见ST型别。28个ST型聚类分析显示温州地区蜡样芽胞杆菌分为4个序列群和13个单态群。结论温州地区蜡样芽胞杆菌毒力基因携带率较高,遗传关系具有多样性。     

2012—2015年北京市西城区单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型及耐药研究

探讨单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型(MLST)与耐药性的关联性,确定某些具有高致病性潜能的流行克隆株的存在。方法 采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法和E-test药敏试条法对14种抗生素进行药物敏感性试验,以MLST技术对50株菌株进行基因分型。结果 单核细胞增生李斯特菌耐药率为22.00%(11/50),并出现多重耐药株。50株单核细胞增生李斯特菌MLST分析共获得12个型别,以ST9和ST121为优势型别。结论 特定ST型别在食品生产过程中存在特定菌株之间的传递,人源性和食源性单核细胞增生李斯特菌中均发现耐药株,可能存在耐药基因的传递,应加强对具有潜在致病性的ST型别的监测力度。     

成都市生鲜猪肉MRSA分离株的流行特征分析

目的:分析成都市各地区生鲜猪肉样品中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的流行特征.方法:对鉴定出的MRSA菌株进行SCCmec分型、spa分型以及多位点序列(MLST)分型分析,同时运用PCR技术对MRSA菌株携带的多种毒力基因、...     

Emergence and characterization of foodborne methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Korea

A total of 165 Staphylococcus aureus strains, isolated from different food samples between 2003 and 2006, were tested for antimicrobial susceptibility. The mecA-positive methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains were further characterized by testing for various virulence genes and by molecular typing with multilocus sequence typing and pulsed-field gel electrophoresis. Of the 165 S. aureus isolates, 150 strains (90.9%) were resistant to at least one antibiotic while no strain was resistant to vancomycin. Four strains were resistant to both oxacillin and cefoxitin and were mecA positive. The mecA-positive MRSA strains were isolated from raw meat and fish samples (two beef samples and two fish samples) and were resistant to β-lactam antibiotics. Based on multilocus sequence typing analysis, the isolates were assigned to sequence type 1 (ST1), ST72, and an undetermined ST (ST72 slv). All four MRSA isolates were shown to be enterotoxigenic. The ST1 MRSA isolate harbored the sea-seh gene combination and the ST72 and ST72 slv MRSA strains harbored the seg-sei and the sea-seg-sei gene combinations, respectively. However, none of the MRSA isolates had the genes for Panton-Valentine leukocidin, toxic shock syndrome toxin 1, and exfoliative toxins. The pulsed-field gel electrophoresis patterns of the ST72 isolates in our study were highly similar, even though they were isolated from food samples in different years and from different regions of Korea.     

Prevalence and Characteristics of Enterotoxin B‐Producing Staphylococcus aureus Isolated from Food Sources: A Particular Cluster of ST188 Strains was Identified

The aim of this study was to investigate the prevalence and characteristics of staphylococcal enterotoxin B (SEB) producing Staphylococcus aureus (S. aureus) isolated from food sources. A total of 412 S. aureus isolates were recovered from 1970 milk and dairy samples (n = 236) and 2450 meat samples (n = 176) in China from 2009 to 2014. Of the 412 isolates, 124 isolates were tested positive for 1 or more classical staphylococcal enterotoxin (SE) genes using PCR, and 31 isolates were positive for seb gene and further proved to be SEB‐producing. Four SE profiles were observed among 31 SEB‐producing isolates when investigated using ELISA kit, that is, SEB (16 isolates), SEA+SEB (6 isolates), SEB+SEC (6 isolates), and SEB+SED (3 isolates). Thirteen sequence types (STs) were identified in the 31 SEB‐producing S. aureus isolates using multilocus sequence typing (MLST). The 3 most detected STs were ST1 (7 isolates), ST188 (6 isolates), ST59 (3 isolates). Two distinct clusters were identified by pulsed‐field gel electrophoresis (PFGE), each of which showed excellent consistency with ST188 and ST1 achieved by MLST, respectively. In summary, this study reveals that various SE profiles are observed in SEB‐producing S. aureus isolates and the great part of SEB‐producing S. aureus isolates are showed as clusters. Especially, a particular cluster of ST188 strains was observed in SEB‐producing S. aureus isolates which was associated with outbreaks of SFP and needs further attention.     

阪崎克罗诺杆菌鉴定分型方法的比较及耐药特征分析

目的 开展乳粉原料中分离的阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii, C. sakazakii)鉴定分型比较研究及抗生素耐药基因特征分析。方法 采用形态学观察、生理生化特征分析、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法、16S rDNA测序分析,和基于全基因组测序技术的平均核苷酸一致性分析、多位点序列分型和基于全基因组的多位点序列分型技术,建立了对分离的2株C. sakazakii的鉴定分型方法,并对不同的方法进行比较,同时预测O-血清型和抗生素抗性基因。结果 本研究中分离菌株16-26、31-3经形态学、生理生化反应、16S rDNA、质谱和平均核苷酸一致性分析,均鉴定为C. sakazakii,可信度均在95%以上; MLST预测16-26为ST新型、31-3为ST4型, O血清型均为gnd 3型、galF 2型,均含有9种抗性基因, 2株C. sakazakii分离株的抗性基因呈现出多样性。结论 通过对分离的C. sakazakii进行鉴定分型比较研究,建立了一种基于表型和分子分型的食源性致病菌鉴定分型方法,为食源性致病菌的有效防控提供了有力的技术支撑和监管依据。