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目的:为快速检测呋喃唑酮(furazolidone,FZD)在动物性食品中的残留量。方法:基于单链抗体的间接竞争酶联免疫吸附实验法建立了FZD检测方法。结果:最佳抗原工作质量浓度为2μg/m L,最佳抗体稀释倍数为1∶500,一抗最佳反应时间为60 min,二抗最佳反应时间为45 min,四甲基联苯胺最佳显色时间为20 min。FZD检测试剂盒在10~100 ng/m L范围具有较好的线性关系,IC50值为13.01 ng/m L,检出限为1.28 ng/m L,回收率为73.38%~84.52%。结论:与抗FZD单克隆抗体相比,所建立的检测试剂盒检测范围更广,且具有很高的灵敏度以及很好的特异性和稳定性。 相似文献
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针对番茄酱和果汁中链格孢霉菌毒素污染问题,建立异细交链孢菌酮酸(iso-tenuazonic acid,ITe A)间接竞争化学发光酶联免疫分析法。通过棋盘法和单因素试验确定最佳包被原质量浓度为15.6 ng/m L、抗体质量浓度为稀释96 000倍、缓冲体系pH 7.4、竞争反应时间和二抗反应时间分别为40 min和50 min。方法IC50为2.13 ng/m L,线性范围为0.50~9.12 ng/m L,检测限为0.10 ng/m L,与结构功能类似物交叉反应率均小于0.1%,样品添加回收率在78.60%~110.83%之间,变异系数均小于15%。本方法适用于样品中ITe A污染的特异性快速筛查。 相似文献
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《食品工业科技》2017,(19)
目的:制备针对重金属铜离子的单克隆抗体,建立Cu2+的间接和直接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测原;用免疫原免疫Balb/c小鼠;细胞融合后,通过间接及间接竞争ELISA筛选稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定;建立间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中G8制备出腹水型单抗效价为5×105倍,抗体亚型为Ig G1型,轻链类型为κ型,特异性检测结果表明该单抗对NOTA及Mn2+、Pb2+、Cd2+、Zn2+等其金属离子交叉反应率远低于2%,与Mg2+交叉反应率小于8%,表明单克隆抗体G8对重金属Cu2+具有很强的特异性,不会干扰结果的准确性;建立间接竞争ELISA的检测灵敏度为29.8 ng/m L,检测限为2.4 ng/m L,线性范围为4.5~196.7 ng/m L;直接竞争ELISA检测法的检测灵敏度为12.89 ng/m L,检测限为0.88 ng/m L,检测范围为1.72~96.58 ng/m L。结论:成功制备出抗重金属铜离子的单克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。 相似文献
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快速检测畜产品中青霉素残留的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将青霉素与牛血清白蛋白连接成复合物作为抗原 ,建立畜产品中青霉素残留间接竞争酶联免疫反应吸附法(ELISA)分析方法。测定残留青霉素的浓度范围为 6.0~1 50 ng/ ml检测限是 6.0 ng/ ml,样品回收率 87%~ 1 1 0 %。 相似文献
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目的 基于己烯雌酚-生物素双功能配体和生物素-亲和素信号放大系统建立生物素-亲和素化学发光酶联免疫吸附试验(biotin-avidin-amplified chemiluminescent immunosorbent assay,BA-CLIA)法检测牛奶中的己烯雌酚的方法。方法采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺法[N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride/N-hydroxysuccinimide, EDC/NHS]制备己烯雌酚-生物素双功能配体;棋盘滴定法优化己烯雌酚-生物素双功能配体与抗己烯雌酚单克隆抗体的最佳稀释比例;对有机溶剂、离子强度、pH等影响因素进行优化后建立基于直接竞争化学发光免疫吸附试验检测己烯雌酚的标准曲线;通过特异性试验测定该方法与己烯雌酚结构类似物的交叉反应率;最后选取牛奶进行加标回收试验验证该方法在实际样品中检测的可行性。结果 BA-CLIA法对己烯雌酚的半数抑制浓度为3.45 ng/mL,检出限为0.020 ng/mL,与传统竞争酶联免疫吸附试... 相似文献
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《食品研究与开发》2016,(19)
探讨牛奶中叶酸检测的酶联免疫反应(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法建立及其叶酸本底含量测定。用竞争性酶联免疫,棋盘法确定最佳抗体包被条件、封闭条件、酶标抗原浓度等,并进行性能评价测定,检测80例牛奶样品中的叶酸本底含量。结果表明:1最佳ELISA条件为:叶酸抗体以2μg/m L浓度,碳酸盐缓冲液4℃过夜包被,用1%牛血清白蛋白(BSA)封闭,叶酸-辣根过氧化物酶标记物(叶酸-HRP)工作浓度1μg/m L。2该方法最低检测限2.22 ng/m L;精密度测试CV5%;特异性检测与叶酸类似物的交叉反应率均≤0.1%;本方法与对照方法具有良好的样本测值相关性(r=0.960,P0.05);该方法加标回收率在94.50%~108.00%之间,回收效果良好;样品基质效应对该方法测值无显著影响。3牛奶样本叶酸本底含量范围为12.55 ng/m L~68.72 ng/m L,均值37.93 ng/m L。本研究建立的ELISA方法能够满足牛奶样品中叶酸含量的检测。 相似文献
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目的 本实验旨在建立快速检测鱼体中亚甲基蓝的间接竞争酶联免疫分析方法。方法 以BSA载体蛋白,以天青C(Azure C)为半抗原,利用戊二醛法合成免疫原Azure C-BSA,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。通过对包被浓度、抗体浓度和二抗浓度等一系列实验条件的优化,建立检测鱼体中亚甲基蓝的间接竞争酶联免疫吸附方法(ic-ELISA)。结果 获得的多克隆抗体特异性强、灵敏度高,在5 -500 ng/mL范围内,线性良好,线性回归方程为y=0.3658x-0.1867 (R2=0.98),IC50为75.4 ng/mL,检测限为8.3 ng/mL,样品添加回收率为77.2%-79.3%,RSD为5.3 %-8.1 %。结论 该方法灵敏度高、特异性强,可用于鱼体中亚甲基蓝的快速检测。 相似文献
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