花生致敏蛋白Ara h1双抗体夹心ELISA法的建立

为建立用于花生致敏蛋白Ara h 1快速、灵敏、特异检测的双抗体夹心ELISA法,以Ara h 1鼠源单抗(mAb)为捕获抗体,以Ara h 1兔源多抗(pAb)为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度建立方法,并对方法的灵敏度、特异性、准确度、稳定性等检测特性进行鉴定。结果表明,双抗体夹心ELISA法的mAb和pAb最佳工作浓度分别为1∶10 000稀释和1∶8 000稀释;ELISA标准曲线线性范围为4～256ng/mL,检测限为4.16ng/mL;样品添加回收试验的平均回收率为85.9%～94.5%,且该方法与其他常见致敏蛋白无交叉反应;并能在4℃条件下避光密封保存90d内保持检测结果稳定。说明所建立的双抗体夹心ELISA法灵敏特异、准确稳定,能够用于花生致敏蛋白Ara h 1的快速筛查。     

基于单链抗体的呋喃唑酮酶联免疫检测方法的建立

目的:为快速检测呋喃唑酮(furazolidone,FZD)在动物性食品中的残留量。方法:基于单链抗体的间接竞争酶联免疫吸附实验法建立了FZD检测方法。结果:最佳抗原工作质量浓度为2μg/m L,最佳抗体稀释倍数为1∶500,一抗最佳反应时间为60 min,二抗最佳反应时间为45 min,四甲基联苯胺最佳显色时间为20 min。FZD检测试剂盒在10~100 ng/m L范围具有较好的线性关系,IC50值为13.01 ng/m L,检出限为1.28 ng/m L,回收率为73.38%~84.52%。结论:与抗FZD单克隆抗体相比,所建立的检测试剂盒检测范围更广,且具有很高的灵敏度以及很好的特异性和稳定性。     

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的 建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay, sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin, OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒。方法 确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价。结果 反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20min,酶促反应显色10 min。兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体, 1:5000 (V:V)稀释。采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5～200.0 ng/mL,检出限为3.5 ng/mL,定量限为8.5 ng/mL。批次内和批次间的变异系数分别为2.31%～4.58%和6.06%～12.23%;鱼糜基质中的回收率为80%～130%;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002%;试剂盒在4℃保存6个月期间,...     

双抗体夹心法测定啤酒中的泡沫活性蛋白的研究

啤酒泡沫是决定啤酒质量的重要因素之一,也是消费者评价啤酒质量好坏的第一特征.泡沫活性蛋白是啤酒泡沫中的重要成分,而Z4蛋白又是泡沫活性蛋白的主要成分.实验主要进行了Z4蛋白的提取纯化和Z4蛋白的单克隆抗体的开发,以及利用夹心法测定Z4蛋白的参数条件的优化和测定结果与泡持性的关系的研究.     

冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法的建立及应用

本文研究了冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的双抗体夹心酶联免疫检测方法(sandwich-ELISA法),以抗MTG兔多抗为包被抗体,抗MTG鼠单抗为检测抗体,再结合HRP标记的抗IgG1二抗,构成sandwich-ELISA检测方法,对冷冻鱼糜中是否添加MTG进行定量检测,防止冷冻鱼糜原料掺假。实验结果表明,包被抗体的最佳工作浓度是2.00μg/mL,检测抗体的最佳工作浓度为0.10μg/mL,酶标二抗的最佳稀释倍数为1:5000。方法的检测限为20 ng/mL,该检测方法在0.6 mg/mL~10 mg/mL范围内OD450值与MTG浓度的log值呈线性关系。建立掺假冷冻鱼糜样品模拟体系,测定其中MTG的添加量:MTG的添加回收率为94%以上,测定过程中回收率结果的板内变异系数为1.12%~4.02%,板间变异系数为5.43%~6.87%。经试验证明该方法灵敏度高,样品前处理简便,适用于冷冻鱼糜中MTG的定量检测。     

抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立

制备全长和截短的弧菌外膜蛋白K（outer membrane protein K,OMPK）,纯化后的OMPK免疫6～8 周雌性BALB/c小鼠,间接夹心酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测小鼠的血清效价,结果表明全长OMPK重组蛋白制备的血清效价是截短OMPK1重组蛋白制备血清效价的128 倍。通过全长的OMPK重组蛋白制备多株用于检测副溶血弧菌的单克隆抗体,用生物素（biotin）和辣根过氧化物酶对单克隆抗体进行标记。间接夹心ELISA实验结果表明：只有VP3-biotin和VP16-biotin与其他单克隆抗体配对检测不同的副溶血弧菌菌株表现出较高的灵敏度及良好的特异性,并且在检测其他种属20 株菌时无交叉反应。VP16(Fab)-biotin/VP3检测副溶血弧菌时较VP16-biotin/VP3具有更高的灵敏度,该方法用于检测海鲜样品时,VP16-biotin/VP3检测三文鱼（5～10 CFU/25 g）和血蚶样品为副溶血弧菌阳性。本研究开发了一种快速、灵敏、简便的副溶血弧菌间接夹心ELISA检测方法。     

石墨烯/四氧化三钴电化学传感器的建立及饼干中香兰素检测分析

本文将石墨烯(GR)滴涂在玻碳电极(GCE)后,再通过循环伏安法电聚合氧化Co (COOH)2制得Co3O4/GR/GCE修饰电极作为食品中检测香兰素的新型电化学传感器.通过扫描电镜技术对Co3O4/GR复合纳米材料进行了袁征并优化了实验条件.结果 表明月,当1 mg/mL GR滴涂量为8μ.L,Co (COOH)2聚...     

牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立

将牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛IgG单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛IgG单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中IgG质量浓度,该方法在7.8～1 000 ng/mL范围内有良好的线性关系,最低检出限为7.06 ng/mL,批内变异系数为4.52%,批间变异系数为4.94%,回收率为91.85%～102.45%。此法操作简便、准确度高、稳定性好,可用于实际牛初乳样品的快速检测。     

水产品中志贺氏菌双抗夹心ELISA检测方法建立与应用

志贺氏菌(Shigella)通称痢疾杆菌,是一类具有传染性强和危害严重的革兰阴性食源性致病菌,广泛污染各类动物源性食品.该研究将志贺氏菌经0.5％福尔马林溶液灭活后,多次免疫雌性大耳兔获得抗志贺氏菌多克隆抗体,以抗志贺氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标...     

基于不同半抗原的呋喃唑酮代谢物免疫检测方法的建立与比较

为实现呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮（3-amino-2-oxazolidinone,AOZ）的快速定量检测,制备AOZ- 牛血清蛋白单克隆抗体,建立2 种分别基于抗3-（4-羧基苯亚甲基）-氨基-2-恶唑烷酮（CPAOZ）、抗AOZ的单克 隆抗体酶联免疫检测试剂盒。CPAOZ检测试剂盒在1.0～100.0 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为14.6 ng/mL, 检测限为6.56 ng/mL,回收率为97.6%～101.3%;AOZ检测试剂盒在0.5～12.5 ng/mL范围具有良好线性,IC50值为 3.9 ng/mL,检测限为0.45 ng/mL,回收率为94.1%～97.4%。这2 种检测试剂盒对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢 物均不存在交叉反应。从经济、方便、快速、灵敏等因素来考虑,后者更具有发展前景。     

基于免标记电化学免疫传感的蔬菜中农药残留检测研究

本文利用层层自组装技术构建了一种用于农药残留高灵敏检测的免标记电化学免疫传感器。该免疫传感器首先通过在天然聚合物海藻酸钠修饰的玻碳电极上利用电化学方法原位聚合金纳米粒子,然后借助金纳米粒子与蛋白质抗体之间的较强吸附作用进一步原位组装农药抗体,从而成功构建了免标记电化学免疫传感器。实验中以呋喃丹农药为模型,呋喃丹分子通过特异性的免疫反应在抗体功能化电极表面生成免疫复合物,该复合物阻碍了电化学探针在电极表面的电子传递,从而减小了免疫传感器的电流响应,利用电流响应的变化与农药分子浓度的关系可以实现呋喃丹农药的快速、高灵敏检测。在优化的实验条件下,该传感器对呋喃丹农药的线性检测范围为1~105μg/L,检测限为1μg/L。同时,该免疫传感器还实现了多种蔬菜样品中呋喃丹农药残留的高灵敏检测。     

基于纳米材料的电化学免疫传感器及其在蛋白质检测中的研究进展

电化学免疫传感器是将传感技术与免疫分析相结合的一种快速定性或定量检测待测物的方法。近年来,随着纳米材料的迅速发展,电化学免疫传感器应运而生,其更灵敏、更轻便、特异性更强,在蛋白质检测领域具有更广阔的应用前景。本文重点介绍了电化学免疫传感器构建原理,并对基于新型纳米材料的免疫传感器的研究进展及其在蛋白质检测中的应用进行综述,同时展望该领域的发展方向,以期为蛋白质的快速检测提供技术参考。     

病毒抑制剂防治烟草花叶病田间试验

为了筛选防效较好的病毒抑制剂 ,对目前市售的防治烟草花叶病 (TMV和CMV)的 8种主要化学药剂和 4种植物提取物进行了防治烟草花叶病的田间试验。试验结果表明 ,2 %“菌克毒克”AS和4 0 %“病毒灵”WP具有明显的预防效果 ;3.95 %“病毒必克”WP、4 0 %“病毒灵”WP、商陆 (Phytolaccaaci nosa)的乙醇提取物和香菇 (Lentinusedodes)的水提取物具有一定的治疗效果。     

烟草与黄瓜花叶病毒互作中过氧化氢酶活性的变化

研究了12个不同抗性水平的烟草品种接种黄瓜花叶病毒前后过氧化氢酶活性的动态变化及其与烟草抗病性的关系。结果表明,接种病毒后抗、感品种的过氧化氢酶活性总体水平比对照降低,但酶活性的动态变化规律与烟草抗病性之间的相关性并不显著。利用DPS数据处理系统分析表明:酶活性变化差值及其平均值与病情指数之间均不存在显著相关性,说明以接种前后植物体内酶活性的变化值作为抗病性鉴定的指标在烟草-黄瓜花叶病毒体系中是不可行的。     

电化学纳米免疫传感器在食品安全检测中的应用展望

电化学纳米免疫传感器具有检测快速、灵敏、操作简单等优点,在医药、食品、环境及生命科学等领域显 示了巨大的应用潜力。本文分析比较了电化学纳米免疫传感器与分析化学仪器检测、免疫检测、以聚合酶链式反应 为基础的分子生物学测定技术和基于表面等离子共振、生物薄膜干涉技术的检测方法的优缺点,讨论了电化学纳米 免疫传感器本身所面临的免疫结合信号放大处理和商业化应用的两个关键问题,最后,概述了纳米材料在免疫传感 器中的应用及电化学纳米免疫传感器在食品检测中的应用并对其在食品检测领域的未来发展作了展望。     

一种利用水提物快速简便检测烟草中TMV 的方法

由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)侵染所致的植物病毒病是世界性的难题,具有寄主广泛,易于传播等特点。笔者研究了一种快速简捷检测烟草中TMV 的方法,通过利用无菌水研磨TMV 侵染后发病的烟草病叶,取上清液进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测,可检测到一条特异性的,大小为6 000 bp 的电泳条带,而在健康烟草叶片水提物中却检测不到该电泳条带的存在。以TMV 复制酶基因片段为探针,对该特异性电泳条带进行Northern-blotting 分析。结果表明, 水提物中的电泳条带与TMV 复制酶基因探针发生较强的杂交信号,暗示该条带可能为TMV 的基因组。因此,该方法可在 10 min 内方便快速的检测烟株中TMV 的存在,避免了常规血清学检测和分子检测(RT-PCR 和western-blot)等方法的昂贵试剂和繁琐的操作步骤。但是该方法的水提取物在室温下不稳定,当静止3 h 以上,就很难再检测到特异性的电泳条带。     

Effects of Microwave and Ultrasound Assisted Extraction on the Recovery of Soy Proteins for Soy Allergen Detection

The extraction of soy proteins for soy allergen detections is conventionally achieved with PBS buffer for at least 2 h at room temperature or 4 °C. This method has been reported to be inefficient due to time consumption and inadequate protein extraction resulting in false negative allergen detection and mislabeling of foods containing allergenic proteins. This study investigated the application of microwave (MAE) and ultrasound assisted extraction (UAE) techniques to extract and improve recovery of allergens from various soy matrices. Soy proteins were extracted from raw soy flour, soy protein isolate (SPI) and soy milk using MAE at 60, 70, and 100 °C for 5 and 10 min and UAE at 4 and 23 °C for extraction times of 1, 5, and 10 min with PBS, Laemmli and urea buffers. Extracts were analyzed for total proteins, protein profile, and antibody‐based detection (ELISA) of soy proteins. Conventional extraction with each of the buffers was used as controls. Overall, proteins recovered from MAE and UAE samples were higher than recoveries from the controls in all soy matrices. Under all extraction conditions, Laemmli and urea buffer recovered more proteins than PBS. Electrophoresis analysis of protein showed bands around 75, 50, and 33 kDa indicating the presence of soy allergenic proteins β‐conglycinin and glycinin, in all samples. Using sandwich ELISA, control and UAE extracts resulted in high soy protein detection but this reduced in MAE extracts.     

中性电解抛光技术在造纸机械中的应用

介绍中性溶液电解抛光技术在造纸机械中的应用，对电解抛光工艺及机理进行了较详细的阐述。     

陕西烟区烟草脉带花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和原核表达

根据烟草脉带花叶病毒(TVBMV)CP序列合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了(TVBMV)CP基因。序列分析表明,TVBMV CP基因全长813nt,编码271个氨基酸;与GenBank中已报道的9个分离CP基因相比,其核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.28%-98.15%和97.05%-100%。将TVBMV CP基因经BamHI/NotI双酶切定向插入到pET30a载体中,构建了原核表达载体pET30-TVBMV CP,重组质粒经BamHI和NotI双酶切鉴定及基因测序验证正确后,用IPTG进行诱导表达。结果表明:TVBMV CP在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物的分子量为37 kD。用表达产物为抗原免疫家兔制备了特异性抗血清,其效价为1/2048。用Western-blot检测田间样品,其结果表明,制备的抗血清可用于检测田间的发病植株。     

铂壳金核纳米酶介导的磁弛豫免疫传感器快速检测食源性沙门氏菌

构建了一种基于铂壳金核(Au@Pt)纳米酶介导顺磁离子价态转变的磁弛豫免疫传感器,并用于鸡蛋中沙门氏菌的快速、高灵敏检测。首先通过微波水热法合成了稳定性高、催化性能强的Au@Pt纳米酶,并利用其过氧化氢类酶活性催化过氧化氢(H₂O₂),而剩余的H₂O₂可将MnO₄^-还原为Mn²⁺。由于MnO₄^-/Mn²⁺两者之间磁信号差异显著,可实现H₂O₂的定量分析。结合免疫反应,沙门氏菌浓度与“检测抗体-Au@Pt纳米酶”含量呈正比,而Au@Pt纳米酶可调控H₂O₂介导的MnO₄^-/Mn²⁺转化体系,进而控制磁信号的变化,最终实现沙门氏菌的定量分析。本方法的检出限为50 CFU/mL,线性范围为1×10²～5...