聚乙二醇修饰对牛乳β-乳球蛋白抗原性的影响

通过不同修饰反应物质的量比、修饰反应时间、pH值,用单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯(SC-mPEG)对牛乳β-乳球蛋白(β-LG)进行修饰,研究其抗原性的变化。利用间接竞争ELISA检测结合产物的抗原性,结果显示不同条件下PEG修饰后的β-乳球蛋白的抗原性最高降低率,反应8h时为70.2%。三硝基苯磺酸(TNBS)法测定不同条件反应后样品修饰度,反应8h时最高修饰度为39.1%。结果表明修饰反应时间为SC-mPEG修饰β-LG后其抗原性降低的主要因素。     

β-乳球蛋白聚乙二醇定点修饰物的制备及其抗原性变化

为探究不同共价修饰位点对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)抗原性影响,采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)定点修饰技术对β-LG第121位半胱氨酸(Cys121)游离巯基进行修饰.通过单因素试验优化,得到最佳修饰条件:β-LG与mPEG-MAL物质的量比1∶30,在0.1...     

聚乙二醇定点修饰β-乳球蛋白谷氨酰胺残基条件优化及其对蛋白抗原性的影响

采用谷氨酰胺转氨酶(TG酶)催化聚乙二醇(PEG)定点修饰技术对β-乳球蛋白(β-LG)的谷氨酰胺残基进行修饰,探究其对蛋白抗原性的影响。通过SDS-PAGE结合凝胶过滤色谱对修饰产物的修饰率进行分析,通过优化得最佳修饰条件为pH 7.0,温度25℃,β-LG与PEG摩尔比1:15,TG酶与β-LG质量比3:1,缓冲液中乙醇添加量25%(体积分数),该条件下修饰率为60.17%。采用阳离子交换色谱对修饰产物进行分离纯化,SDS-PAGE分析显示,纯化得到的修饰产物表观分子量在28kDa左右,为PEG单修饰产物。反相高效液相色谱分析结果表明,修饰产物均一,无其它位置异构体存在。间接竞争ELISA测定结果表明,经PEG修饰后β-LG的抗原性显著降低,降低率为59.04%。     

超声波处理对β-乳球蛋白结构和抗原性的影响

采用电泳、圆二色谱、荧光光谱及酶联免疫吸附等方法,研究了超声波处理对β-乳球蛋白（β-lactoglobulin,β-Lg）结构和抗原性的影响。结果表明:随着超声波功率的增大,β-Lg的分子量无显著性变化,自由巯基含量下降,β-折叠含量和表面疏水性呈先升高后降低的趋势,且均在400 W时达到最大值。这表明超声波处理能迫使β-Lg结构展开,破坏其高级结构。与此同时,β-Lg的抗原性呈先升高后降低的趋势,在400 W 25 min时达到最大,为2540.20μg/m L,比未处理样品增加了133%,这表明β-Lg结构的展开可能会导致其过敏表位的暴露,因此,β-Lg抗原性的改变可能与其高级结构的变化有关。      

高压脉冲电场对β-乳球蛋白结构和抗原性的影响

采用电泳、圆二色谱、荧光光谱及酶联免疫吸附法,研究不同高压脉冲电场(pulsed electric fields,PEF)处理条件对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg)结构和抗原性的影响。结果表明:PEF处理对β-Lg分子质量无明显影响,但对其二级结构、三级结构和抗原性有显著影响,且其抗原性变化与结构变化密切相关。β-Lg的β-折叠含量、内源性荧光强度、表面疏水性和抗原性均随处理时间的延长呈先增加后降低的趋势,且均在25k V/cm处理30μs的条件下达到最大值,此时抗原性为1 344μg/m L。同时,当处理时间为210μs时,β-Lg的抗原性降低了约58%。这表明,PEF为制备低过敏性β-Lg提供了一种潜在的新方法。     

高压脉冲电场结合糖基化对β-乳球蛋白抗原性与结构的影响

β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg)是一种营养丰富的牛乳清蛋白,但也是导致牛乳过敏的主要过敏原;本文以β-Lg为研究对象,通过酶联免疫吸附法、电泳、圆二色谱及荧光光谱等方法,在蛋白与糖的质量比为1:2、修饰温度60℃、反应时间3 h、反应环境p H 7.4和不同高压脉冲电场(pulsed electric fields,PEF)强度反应条件下,对β-Lg-半乳糖复合物中β-Lg的抗原性变化及反应产物的结构特性进行研究。结果表明:经过PEF结合糖基化处理后,β-Lg抗原性显著降低,且PEF预处理会促进β-Lg抗原性降低,在电场强度25 k V/cm下预处理90μs后进行糖基化,β-Lg抗原性降低最多,降低了约72.9%;其分子量增大;α-螺旋和β-转角结构减少,而β-折叠和无规则卷曲结构逐渐增多;表面疏水性和内源性荧光强度均降低;自由巯基含量先升高后下降,这为制备低致敏性β-Lg提供了一种新的方法。     

低聚异麦芽糖糖基化法降低牛乳β-乳球蛋白抗原性

利用凝胶过滤层析法从牛乳乳清分离蛋白中分离纯化β-乳球蛋白,然后利用美拉德反应制备β-乳球蛋白与低聚异麦芽糖结合产物。通过竞争和非竞争ELISA法检测该结合产物的抗原性,结果显示糖基化后的β-乳球蛋白的抗原性得到显著降低。利用双缩脲法和苯酚硫酸法测定该结合物的组成,结果显示该结合物中β-乳球蛋白和低聚异麦芽糖摩尔比为1:8。进而对该结合物进行凝胶过滤层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果显示该结合物相对分子量为44kDa,仍保持原有二聚体结构。      

低聚异麦芽糖糖基化法降低牛乳β-乳球蛋白抗原性

利用凝胶过滤层析法从牛乳乳清分离蛋白中分离纯化β-乳球蛋白,然后利用美拉德反应制备β-乳球蛋白与低聚异麦芽糖结合产物.通过竞争和非竞争ELISA法检测该结合产物的抗原性,结果显示糖基化后的β-乳球蛋白的抗原性得到显著降低.利用双缩脲法和苯酚硫酸法测定该结合物的组成,结果显示该结合物中β-乳球蛋白和低聚异麦芽糖摩尔比为1∶8.进而对该结合物进行凝胶过滤层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果显示该结合物相对分子量为44kDa.仍保持原有二聚体结构.     

碱性蛋白酶对β-伴大豆球蛋白抗原性的影响

选用碱性蛋白酶处理大豆分离蛋白,间接竞争ELISA法测定水解物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,响应面法优化降低β-伴大豆球蛋白抗原抑制率的最佳工艺条件。结果表明,碱性蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,在一定程度上,水解度与β-伴大豆球蛋白抗原抑制率呈负相关关系。碱性蛋白酶在酶解时间40 min、加酶量3 000 U/g、温度55℃、p H 8.5条件下,β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为33.48%,比大豆蛋白降低了64.16%。SDSPAGE结果显示,β-伴大豆球蛋白基本被酶解成小分子量肽段。     

分子动力学模拟超高压结合热处理对β-乳球蛋白结构的影响

本研究以β-乳球蛋白为研究对象,采用分子动力学模拟0.1、300、600 MPa的压力结合300、330 K的温度,及单独100 ℃（0.1 MPa,373.15 K）加热条件下蛋白结构均方根误差（root mean square deviation,RMSD）、均方根波动（root mean square fluctuation,RMSF）、回旋半径、氢键数量、溶剂可及表面积、体积、二级结构的变化,并用偏最小二乘回归分析温度和压力对各指标的影响规律。结果表明,与600 MPa、330 K联合处理相比,100 ℃加热能更显著地破坏蛋白结构。3 种压力结合2 种温度的模拟中,温度显著影响RMSD和α-螺旋数量,330 K的温度处理能增加蛋白的RMSD而减少α-螺旋数量;压力处理能减少蛋白的溶剂可及表面积和蛋白体积,使蛋白结构更致密;压力和温度的交互作用显著影响蛋白间氢键数量、β-折叠数量、无规卷曲数量和RMSF;300 MPa的压力能稳定加热导致的蛋白结构破坏。因此,本研究从分子动力学的角度证实了高压结合一定温度的热处理相比单独的高温（100 ℃）热处理对蛋白结构的破坏更小,是一种温和的处理方式,且压力能在一定程度上降低热处理对蛋白结构的破坏。     

鮰鱼鱼皮胶原的提取及性质研究

利用醋酸及胃蛋白酶从鮰鱼鱼皮中提取了胶原,并对其物理与化学特性进行了探讨研究。结果表明:提取的胶原属于典型的Ⅰ型胶原,胶原的三股螺旋分子组成为[α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ)。氨基酸组成及变性温度的分析说明提取的鮰鱼皮胶原由于其自身亚氨基酸含量的特征,使得它的稳定性远远高于其他鱼类的皮胶原,但仍然比大多数哺乳类动物皮胶原稳定性要弱。紫外扫描光谱、傅立叶红外光谱及圆二色性研究结果证明提取的胶原三股螺旋结构保持完整。     

Identification and Characterization of Molecular Species of Collagen in Fish Skin

ABSTRACT: Pepsin-solubilized collagen (PSC) prepared from the skin of 3 fish species—common horse mackerel, yellow sea bream, and tiger puffer—were separated into 2 fractions, major and minor, by ammonium sulfate precipitation. These collagen fractions were further purified by phosphocellulose column chromatography. From the results of SDS-PAGE, peptide mapping, and amino-acid analysis, the purified major and minor collagens were identified to be type I and V collagens, respectively. These results suggest that type V collagen might be widely present in fish skin as a minor collagen.     

兔皮明胶提取工艺优化

以兔皮为原料,研究稀盐酸短时诱导兔皮制备明胶的工艺。以明胶提取率和凝胶强度为评价指标,对兔皮明胶制备工艺中的盐酸质量分数、盐酸处理时间、提胶pH值、提胶温度4 个因素进行了优化,在此基础上通过正交试验确定最佳工艺为盐酸质量分数1%、盐酸处理时间10 min、提胶温度65 ℃、提胶pH 4。在此工艺条件下明胶提取率高达（86.85±1.71）%,凝胶强度为（481.43±16.89）g。明胶基本性质符合GB 6783-2013《食品添加剂：明胶》要求。     

皮胶原与组织工程

组织工程是一门新兴的综合学科 ,已显现出其强大的生命力。本文介绍了组织工程的起源与发展 ,基本概念、基本原理和方法 ,并从胶原的结构与性能出发 ,较为详细地讨论了皮胶原在组织工程中的应用 ,指出利用动物皮胶原制造组织工程材料具有广阔的发展前景     

兔皮胶原蛋白的加工特性

以兔皮胶原蛋白为原料,对其加工特性进行系统研究。结果表明,兔皮胶原蛋白具有较强的吸水性,达到14.89 m L/g;其在酸性环境中有很高的溶解性,在p H值为3时,溶解度最高,在碱性环境中溶解度降至50%左右;离子质量浓度对胶原蛋白的溶解度有明显影响,其在Na Cl质量浓度为0~2 g/100 m L时保持相对稳定,在Na Cl质量浓度由2 g/100 m L增加至4 g/100 m L过程中急剧下降,而Na Cl质量浓度大于4 g/100 m L后,胶原蛋白溶解度变化不再明显;当胶原蛋白的质量浓度小于1 g/100 m L时,兔皮胶原蛋白的乳化性随着胶原蛋白质量浓度的增加逐渐增加,但质量浓度超过1 g/100 m L时,乳化性降低,乳化稳定性随胶原蛋白质量浓度的变化呈现与乳化性相反的趋势;低质量浓度的胶原蛋白溶液在p H 3~6过程中,乳化性和乳化稳定性均呈下降趋势,随后,p H 6~9时乳化性和乳化稳定性缓慢增加后保持稳定;离子质量浓度在0.00~7.02 g/100 m L范围内,随离子质量浓度的增加,乳化性呈现出先升高后降低的趋势,而乳化稳定性则呈现先增加随后保持稳定的趋势,在离子质量浓度为5.85 g/100 m L时,胶原蛋白的乳化性与乳化稳定性较好。     

鱼皮胶原蛋白及胶原活性多肽的研究进展

胶原蛋白是生物体内的重要蛋白质,是结缔组织的主要蛋白质成分。胶原蛋白具有多样性及组织分布的特异性,是与各种组织和器官功能相关的功能性蛋白质。鱼皮胶原蛋白及其酶解产物胶原活性多肽已引起人们的广泛关注。现对鱼皮胶原蛋白的种类、性质、提取方法以及胶原活性多肽生理活性等的研究进展作一综述。     

鱼皮胶原蛋白及胶原活性多肽的研究进展

胶原蛋白是生物体内的重要蛋白质,是结缔组织的主要蛋白质成分。胶原蛋白具有多样性及组织分布的特异性,是与各种组织和器官功能相关的功能性蛋白质。鱼皮胶原蛋白及其酶解产物胶原活性多肽已引起人们的广泛关注。现对鱼皮胶原蛋白的种类、性质、提取方法以及胶原活性多肽生理活性等的研究进展作一综述。     

超声波辅助提取骆驼皮胶原蛋白的工艺及结构表征

以骆驼皮为原料,研究超声波辅助提取胶原蛋白的最优工艺,并对提取得到的胶原蛋白进行表征.以胶原蛋白的提取率为指标,探讨酶添加量、料液比、超声波功率、超声波处理时间及总提取时间5个因素对骆驼皮胶原蛋白的影响,确定超声波功率后,在单因素实验的基础上,结合响应曲面分析法得到最佳提取条件为:酶添加量4.5％、料液比1:23、超声...     

尖吻鲈鱼鳞和鱼皮胶原蛋白的提取及其理化特性分析

以尖吻鲈鱼鳞和鱼皮为原料,提取并分离纯化酶溶性胶原蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶 电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE）、氨基酸组成分析、差示扫描量热 （differential scanning calorimetry,DSC）、傅里叶变换红外光谱、X射线衍射和Zeta电位以及溶解度研究,分析 和比较了其主要理化性质。冷冻干燥后鱼鳞和鱼皮胶原蛋白得率（干质量）分别为2.3 g/100 g和47.3 g/100 g; SDS-PAGE结果显示两种胶原蛋白构型均为[α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ),初步判断属于Ⅰ型胶原蛋白;DSC结果显示鱼鳞和鱼 皮胶原蛋白热变性温度（Td）分别为37.54 ℃和36.74 ℃;傅里叶变换红外光谱和X射线衍射结果显示胶原蛋白经 胃蛋白酶处理后仍能保持其完整的三股螺旋结构;Zeta电位结果显示鱼鳞和鱼皮胶原蛋白等电点分别为pH 6.40和 pH 6.64;溶解度研究结果显示两种胶原蛋白在酸性条件和低NaCl质量浓度下均表现出良好的溶解性。     

兔皮手套革工艺技术

论述了兔皮的浸水、脱毛、软化、鞣制、整理工艺技术及操作要点，并根据兔皮的特点，提出了相应的技术措施。对兔皮的利用，提高产品档次，增加经济效益，起到一定的作用。