基于AuPtRh纳米酶的比色适体传感器快速检测河豚毒素

目的 构建一种基于AuPtRh纳米酶和核酸适配体的比色传感器, 用于河豚毒素的可视化、快速、灵敏检测。方法 制备基于氧化石墨烯(graphene oxide, GO)修饰的金属网(stainless steel mesh, SSM)作为捕获探针, 以及AuPtRh三金属纳米酶连接核酸适配体(aptamer)作为信号探针, 通过透射电镜、原子力显微镜、X射线衍射仪、分光光度计对制备的AuPtRh纳米酶材料进行表征, 考察纳米酶的催化动力学模型, 用制备的SSM-GO/AuPtRh-aptamer传感器捕获河豚毒素。结果 最大反应速度(Vmax)为4.66×10-8 mol/(L·s), 米氏常数(Km)为0.62 mmol/L, AuPtRh作为纳米酶与H2O2的亲和力要高于单一金属和双金属与H2O2的亲和力。加入河豚毒素后, 溶液中的AuPtRh催化3,3'',5,5''-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine, TMB)生成氧化TMB(oxTMB), 溶液由透明变为蓝色。在优化条件下, 河豚毒素在5~500 ng/L浓度范围内与652 nm处的吸光度呈良好的线性关系, 线性方程A=0.0011C+0.1523(r2=0.9901), 检测限为3 ng/L。以蛤蜊为实际样品, 测定加标样品中河豚毒素的含量, 加标样品的回收率范围为85.61%~122.66%。结论 SSM-GO/ AuPtRh-aptamer比色传感器具有操作简单、快速、灵敏度高、成本低的特点, 在现场检测领域有较大的潜力。     

可视化普鲁士蓝纳米酶免疫亲和柱快速检测植物源性食品中氯吡脲

目的 建立快速检测植物源性食品中氯吡脲的可视化普鲁士蓝纳米酶免疫亲和凝胶柱的检测方法。方法 首先通过水热法制备了类过氧化氢酶性质的普鲁士蓝纳米粒子。其次,通过3-巯基丙酸衍生反应合成了氯吡脲半抗原,通过活泼酯法原理偶联合成氯吡脲完全抗原,通过免疫小鼠成功制备了氯吡脲多克隆抗体。最后,制备了普鲁士蓝纳米酶标记抗原、琼脂凝胶闭合胶体、抗体胶,组装了普鲁士蓝纳米酶可视化免疫亲和凝胶检测柱,建立了检测方法,测试了凝胶检测柱的特异性,检测了4种实际样品,得到方法检出限。结果 合成的普鲁士蓝纳米粒子呈立方体形状,分布均匀集中,粒径约为145.68 nm±12.00 nm,能够催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)和过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)混合溶液显蓝色,具有类过氧化氢酶性质。制备的氯吡脲多克隆抗体半数抑制率(50%inhibiting concentration,IC50)为2.35 ng/mL,抗血清效价最高为1:72000倍。凝胶检测柱的最佳组装条件...     

适配体增强金纳米粒子类过氧化物酶活性快速检测鸡蛋中的恩诺沙星

目的 利用核酸适配体增强金纳米粒子类过氧化物酶(peroxidase,POD)活性,建立了一种快速检测鸡蛋中恩诺沙星的方法。方法 金纳米粒子具有类POD活性,能催化H₂O₂氧化3,3’-5,5’四甲基联苯胺(3,3’-5,5’tetramethylbenzidine, TMB)反应,加入核酸适配体后,适配体通过Au-N键吸附于金纳米粒子表面,使催化活性增强;进一步加入靶标物恩诺沙星后,核酸适配体与靶标物特异性结合而脱离金纳米粒子表面,使催化活性减弱。基于此建立了恩诺沙星比色检测方法,优化了反应条件,并将其用于鸡蛋样品检测中。结果 在核酸适配体浓度为10 nmol/L, TMB浓度为0.3 mmol/L,显色反应时间为20 min时,反应体系的吸光度变化随恩诺沙星浓度在5～150μmol/L范围内具有良好的线性关系,检出限为1.98μmol/L。该方法具有良好的选择性和抗干扰能力,将此法用于鸡蛋中的恩诺沙星的检测,加标回收率为92.67%～109.04%。结论 该方法简便快速,为鸡蛋中恩诺沙星检测提供了一种新的尝试方法。     

基于金纳米棒金属化的呕吐毒素多色可视化检测方法研究

目的 基于免疫亲和反应和酶诱导金纳米棒金属化构建一种呕吐毒素多色可视化检测方法。方法 将表面修饰高亲和性抗体的免疫磁珠作为信号转移载体,将金纳米棒作为多色反应基底,样品中的呕吐毒素与生物素修饰的呕吐毒素抗原竞争结合磁珠表面的抗体上,进一步基于生物素和链霉亲和素的特异性亲和反应,链霉亲和素标记的碱性磷酸酶被结合到免疫磁珠上,并催化底物L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐生成抗坏血酸,随后还原硝酸银生成银单质包被在金纳米棒表面。该过程使金纳米棒的纵向等离子体吸收峰发生蓝移,同时产生裸眼可见的丰富颜色变化。可实现不同浓度下呕吐毒素的多色可视化检测。结果 在最佳反应条件下,检测呕吐毒素的线性范围是0～1000ng/mL,检出限为264.71ng/mL,对小麦和玉米质控样品的检测结果回收率在88.7%～107.4%之间,相对标准偏差小于等于14.1%。结论 该方法检测结果直观、灵敏度较高、操作便捷,无需步骤复杂的人工操作,检测过程用时较短,可用于粮食中呕吐毒素的可视化检测。     

鱼肉和鹅肉中氯霉素的比色适配体传感器快速检测

本文提出了一种新颖的比色适配体传感器用于快速检测鱼肉和鹅肉中氯霉素(Chloramphenicol,CAP)。本方法的建立是基于核酸适配体特异性结合目标物的高选择性能和氧化钯纳米颗粒(Pd O)标记聚合酶螯合物(En Vision,EV)的双重信号放大效应,它能特异性、灵敏性地快速检测样品中痕量氯霉素。EV上含有大约100个辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP),它能够高效催化底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)产生颜色变化,并且Pd O在一定程度上也能催化TMB出现蓝绿色,因此该方法可达到双重放大效果。同时,通过测定TMB吸光度的变化能对应计算真实样品中的氯霉素含量。结果表明,在最佳实验条件下,该方法具有较高的检测灵敏度并在0.02~150 ng/m L范围内具有良好的相关性,检测下限是0.01 ng/m L。此外,该方法已经成功地应用于分析鱼肉和鹅肉样品中的氯霉素,其结果与传统的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法相一致。     

锌/钴双金属无限配位聚合物纳米酶催化比色法快速检测单增李斯特菌

目的 基于锌/钴双金属无限配位聚合物(Zn/Co-bimetal infinite coordination polymers, Zn/Co-ICPs)构建快速检测单增李斯特菌的纳米酶催化比色法。方法 基于Zn/Co-ICPs过氧化物模拟酶活性、核酸适配体对类酶活性的增强作用及特异性识别能力, 以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine, TMB)为催化显色底物, 建立Zn/Co-ICPs纳米酶催化比色法, 对Zn/Co-ICPs的形貌和结构进行表征, 并考察适配体浓度、pH、温度和反应时间等因素对催化效果的影响, 并将该方法应用于饮用水和冷冻巴沙鱼样品中单增李斯特菌的测定。结果 在优选的条件下, 单增李斯特菌的浓度与蓝色显色产物氧化型TMB (oxidized TMB, oxTMB)在652 nm处的吸光度呈负相关关系。该方法的线性范围为3.2×102~1.0×105 CFU/mL, r2为0.9964, 检出限(limit of detection, LOD)为1.5×102 CFU/mL。加标回收率为90.7%~108.7%, 相对标准偏差为0.17%~7.20%。结论 该方法无需使用复杂昂贵的仪器即可实现可视化检测, 且检测速度快、准确度高、选择性好, 在复杂样品快速分析中具有一定潜力。     

葛根黄酮-金纳米粒子的绿色制备及其模拟酶催化活性研究

为制备绿色、环保且安全性高的金纳米粒子,采用离子液体-超声辅助法提取葛根黄酮,将得到的葛根黄酮作为还原剂和保护剂,一步绿色合成AuNPs,并以H₂O₂和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺作为酶催化底物,对AuNPs模拟过氧化物酶进行活性验证。结果表明,制备的葛根黄酮-金纳米粒子具有模拟过氧化物酶的催化能力,在最适反应体系下,Au NPs模拟酶反应符合典型的Michaelis-Menten机制,以H₂O₂为底物时,K_m值为2.61 mmol/L;以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺为底物时,K_m值为0.35 mmol/L,相比于天然辣根过氧化物酶,其与底物具有更强的亲和能力。研究所得的Au NPs在食品催化、生物医药和工业生产等领域将具有实际的应用价值。     

Ni/Co层状氢氧化物模拟氧化物酶可视化检测海产品中Hg2+

该文建立了一种基于Ni/Co层状氢氧化物模拟氧化物酶的传感器比色检测海产品中Hg 2+的方法。通过共沉淀法制备了具有氧化物酶活性的Ni/Co层状双金属氢氧化物(layered double hydroxides,LDHs),并对其表面形貌、晶体结构和表面基团进行表征。结果表明,Ni/Co LDHs可使3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)氧化为蓝色的oxTMB;以检测体系pH、TMB浓度、Ni/Co LDHs浓度、孵育时间、孵育温度为单因素,优化得到检测Hg 2+的最佳条件为pH 4.0、TMB浓度为0.5 mmol/L、孵育温度为25℃、孵育时间为10 min、Ni/Co LDHs质量浓度为0.8 mg/mL。在最优检测条件下建立了标准曲线,该传感器在2.96~11.63μmol/L具有线性响应,检测限为30.60 nmol/L,加标回收率为92.74%~114.40%。该研究为海产品中Hg 2+的检测提供了一种新思路。     

基于金核铂壳纳米酶比色检测白菜中有机磷农药新方法研究

目的 基于纳米模拟酶活性抑制策略开发具有特异性的有机磷农药分析方法。方法 基于金核铂壳纳米粒子(gold core-platinum shell nanoparticle, Au@Pt NPs)可以与甲拌磷、氧乐果和乐果3种有机磷农药发生作用从而使其类过氧化物酶活性被特异性抑制, 建立3种有机磷农药比色检测方法。结果 透射电镜(transmission electron microscope, TEM)、X射线能谱仪(energy dispersive spectrometer, EDS)结果表明, 3种有机磷农药可通过Pt-S键吸附到Au@Pt NPs表面, 不仅遮蔽了Au@Pt NPs表面的活性位点, 还促使了Au@Pt NPs的团聚, 最终导致Au@Pt NPs的催化活性降低。通过3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine, TMB)和过氧化氢(H2O2)的显色体系将农药的抑制作用信号放大, 甲拌磷、氧乐果和乐果的比色检测半抑制浓度(50% inhibiting concentration, IC50)值分别为0.38、0.41和5.21 μg/mL, 检出限为19.7、24.2和13.4 ng/mL, 且表现出一定的特异性。结论 该方法操作简单、具有一定的特异性, 可用于白菜中甲拌磷、氧乐果和乐果的检测。     

基于氧化型3,3’,5,5’-四甲基联苯胺纳米材料的比色和光热双模式检测谷胱甘肽

目的 建立基于氧化型3,3'',5,5''-四甲基联苯胺(3,3'',5,5'' -tetramethylbenzidine, TMB)的比色和光热双模式谷胱甘肽(glutathione, GSH)检测方法,用于食品中谷胱甘肽含量的快速检测。方法 利用普鲁士蓝(Prussian blue, PB)的过氧化物酶活性催化TMB与过氧化氢反应生成蓝绿色且具有光热转化性能的氧化型TMB。而GSH能将氧化型TMB还原为无色的TMB,使溶液吸光度值和光热转化产生的温升与GSH含量呈线性相关,实现比色法和光热法双模式定量检测GSH。结果 检测最优pH为3.5,反应时间为5 min,PB质量浓度为1 mg/mL,过氧化氢质量浓度为2.5 μL/mL,TMB质量浓度为15 mg/mL,光热照射时间为70 s,照射功率为3.5 W,最优条件下比色法检出限为14.8 μg/mL,光热法为1.1 μg/mL,光热检测灵敏度较比色法提高约13倍,检测可在10 min内完成,实际样品加标回收率在84~119%之间。结论 该方法具有良好的重复性、特异性和准确性,可用于保健食品、果蔬中GSH的快速检测。     

碳复合材料传感器性能研究及其应用

目的 建立比色传感器法快速检测食品中痕量Hg2+的含量。方法 合成多级孔碳@壳聚糖(hierarchical porous carbon@chitosan, HPC@CS)-AgNPs复合材料, 加入汞离子后, 催化活性增强, 催化氧化3,3'',5,5''-四甲基联苯胺(3,3'',5,5''-tetramethylbenzidine, TMB)显色, 实现对汞离子的快速检测。结果 将实验条件优化后, 汞离子在浓度为2×10?8~1×10?6 mol/L的范围内线性关系良好(r=0.99753), 在水样与鱼样的加标回收率为84.4%~103%, 相对标准偏差为2.6%~5.2%。结论 该方法操作简便、精密度和重复性好, 可适用于食品中检测汞离子的含量。     

基于rGO-AuNPS修饰丝网印刷电极的电化学生物传感器快速检测甲基对硫磷

目的：实现对甲基对硫磷的快速检测。方法：基于金纳米颗粒和还原氧化石墨烯制备了用于对甲基对硫磷进行定量检测的乙酰胆碱酯酶传感器。采用层层组装方法，将还原氧化石墨烯、金纳米颗粒、乙酰胆碱酯酶依次修饰在丝网印刷电极表面。对传感器的催化活性、阻抗特性、传感器的抑制率与甲基对硫磷浓度的关系、实际样品检测进行了评估。结果：制备的乙酰胆碱酯酶生物传感器对乙酰硫代胆碱氯化物表现出优异的亲和力，米氏常数为2.76 mmol/L。在最佳条件下，可以有效检测甲基对硫磷，线性范围为5～500 ng/mL，检出限为0.692 ng/mL。结论：该方法操作简单、成本低、稳定性好，适用于有机磷类农药的快速检测。     

基于适配体-阳离子化合物诱导纳米金聚集比色法快速检测苏丹红

本研究以苏丹红Ⅲ适配体为识别元件,以未修饰的纳米金传感信号,以聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)作为纳米金聚集的诱导剂,构建了一种简单、经济、快速的苏丹红比色检测方法。在优化条件下评估本方法的检测灵敏度、准确性和特异性,最后应用于食品中苏丹红快速检测,并将检测结果与国标法(GB/T 19681-2005)对比验证。结果显示,在PDDA浓度20 nmol/L、适配体浓度5 nmol/L、反应时间4 min等优化条件下,纳米金吸光度比值(A_650nm/A_530nm)与苏丹红Ⅲ浓度呈良好线性关系(R=0.986),线性检测范围为3.13～50 ng/mL,可视化检测限为3.13 ng/mL,检测时间约为5 min。特异性分析显示,本方法对苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ有高的特异性,与柠檬黄、日落黄、分散橙11等无交叉反应。将本方法应用于食品中苏丹红检测,加标回收率为85.4%～102.5%,相对标准偏差为3.37%～6.75%。本方法具有操作简便、快速、结果易读等优点,适用于批量样品中苏丹红的现场快速检测。     

基于纳米金/铜有机骨架的酶传感器检测蔬菜中敌敌畏

目的 制备了氨基化纳米金/铜有机骨架(Aminated Gold nanoparticles /Copper-origin frameworks, AuNPs-NH2/Cu-MOF)纳米复合材料,并构建新型乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)传感器对敌敌畏进行定量分析。方法 采用羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl Chitosan, CMCS)为交联剂,AuNPs-NH2/Cu-MOF为修饰材料,玻碳电极(Glassy Carbon Electrode, GCE)为工作电极,构建AChE/AuNPs-NH2/Cu-MOF/GCE传感器。通过对交联剂、酶固载量、抑制时间等条件的优化,确定传感器的最佳工作条件,对蔬菜中敌敌畏进行检测分析。结果 AuNPs-NH2/Cu-MOF不仅具有良好的导电性、生物相容性还可以为酶和底物提供更多的接触位点,有效地提高传感器的灵敏度。在最佳条件下,敌敌畏浓度的负对数与其对传感器的抑制率在1.0×10-10~1.0×10-5 g/L间呈线性关系,检出限1.7951×10-11 g/L (按抑制率10%计算)。加标回收率在96.28%~103.2%之间,检测结果与高效液相色谱法检测结果一致,且该传感器重复性、稳定性较好对常见的Pb2+、Zn2+、Ni2+和Cd2+有良好的抗干扰能力。结论 AChE/AuNPs-NH2/Cu-MOF/GCE简便、快捷可用于蔬菜中敌敌畏的快速定量分析。     

基于纳米材料的免疫传感器法快速检测水产品中的呋喃西林代谢物

目的 建立纳米免疫传感器法快速检测水产品中呋喃西林代谢物的分析方法.方法 采用电沉积法,在0～1.5V电位区间内扫描3圈,将纳米金负载到玻碳电极上,依次将壳聚糖包埋的羧基化多壁碳纳米管修饰液和呋喃西林代谢物抗体滴涂在电极表面,制得呋喃西林代谢物抗体/纳米金/壳聚糖/羧基化多壁碳纳米管修饰的纳米免疫传感器,利用循环伏安法...     

Electrochemical sensor based on Prussian blue nanorods and gold nanochains for the determination of H<Subscript>2</Subscript>O<Subscript>2</Subscript>

In this paper, a novel electrochemical sensor for the detection of H₂O₂ was proposed based on gold nanochains and prussian blue nanorods (PB@MWCNTs), which were synthesized with multiwall carbon nanotubes (MWCNTs) as a template. With the introduction of MWCNTs and the gold nanochains, the proposed system shows synergy among the Prussian blue (PB), MWCNTs, and the gold nanochains, which amplifies the H₂O₂ sensitivity greatly. A linear range from 1.75 × 10⁻⁶ to 1.14 × 10⁻³ M with a detection limit of 0.5 × 10⁻⁶ M (S/N = 3) and a high sensitivity 300 μA mM⁻¹ cm⁻² for H₂O₂ detection is obtained. Moreover, the sensor exhibits good repeatability and stability.     

基于单链抗体的呋喃唑酮酶联免疫检测方法的建立

目的:为快速检测呋喃唑酮(furazolidone,FZD)在动物性食品中的残留量。方法:基于单链抗体的间接竞争酶联免疫吸附实验法建立了FZD检测方法。结果:最佳抗原工作质量浓度为2μg/m L,最佳抗体稀释倍数为1∶500,一抗最佳反应时间为60 min,二抗最佳反应时间为45 min,四甲基联苯胺最佳显色时间为20 min。FZD检测试剂盒在10~100 ng/m L范围具有较好的线性关系,IC50值为13.01 ng/m L,检出限为1.28 ng/m L,回收率为73.38%~84.52%。结论:与抗FZD单克隆抗体相比,所建立的检测试剂盒检测范围更广,且具有很高的灵敏度以及很好的特异性和稳定性。     

一种新型过氧化氢传感器的构建及其在牛奶中的应用

为构建一种新型过氧化氢生物传感器,将血红蛋白吸附在聚吡咯膜为基底的金纳米颗粒上,通过SEM、AFM、XPS、CV和EIS表征修饰电极并将该传感器用于牛奶中过氧化氢的检测。结果表明各材料成功的修饰到电极表面,且纳米金颗粒的粒径约为15 nm,Hb/AuNPs/Ppy/GCE的最佳制备条件为吡咯聚合电量3.0×10-3 C,PBS溶液pH6.5,支持电解质溶液pH7.0。该传感器对过氧化氢的检出限为0.2 μmol/L(S/N=3),检测时间12 s。此外,所构建的传感器具有良好的稳定性和选择性,金纳米颗粒大,比表面积提供更多的位点固载血红蛋白,同时血红蛋白和纳米金颗粒对过氧化氢具有良好的协同催化效果。该传感器监测牛奶中过氧化氢的加标回收率为92.7%~116.0%。结果表明,Hb/AuNPs/Ppy/GCE是一种有前途的电化学生物传感器。