酶法制备鸡血抗氧化肽及其抗氧化活性

以新鲜鸡血为原料,采用碱性蛋白酶酶解制备鸡血抗氧化肽。在单因素试验的基础上,以酶解液的还原能力为指标,研究pH、加酶量、酶解温度和酶解时间对鸡血酶解液抗氧化活性的影响,并运用Box-Behnken中心组合试验和响应面分析法优化制备鸡血抗氧化肽的酶解工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶酶解鸡血的最佳工艺条件为:p H 11.3,加酶量10 335 U/g,酶解温度46℃,酶解时间78 min。在该条件下,鸡血酶解物具有良好的抗氧化活性, 15.0mg/m L的鸡血酶解物DPPH自由基清除率和羟自由基的清除率分别为64.58%和99.2%。     

长白山榛子抗氧化肽制备及其活性研究

以长白山榛子分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶制备抗氧化肽,通过Box-Behnken中心组合试验确定最佳水解工艺条件为:酶解温度50℃、加酶量8 000 U/g、底物浓度5.0%、pH9.5。对该条件制备的抗氧化肽进行活性研究,结果显示随着浓度的升高,榛子抗氧化肽在4 mg/mL时对ABTS自由基和DPPH清除率均达到100%,8 mg/mL时对·OH清除率和总还原能力分别达到85.46%和0.859,12 mg/mL时,对Fe~(2+)螯合率达到99.3%。     

蛴螬酶法制备抗氧化活性肽

建立蛴螬多肽的制备工艺,探究多肽的抗氧化活性。采用酶法将蛴螬制备成蛴螬蛋白水解肽,以蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力为衡量指标,通过单因素试验确定了酶种类、酶虫比、底物浓度、水解体系pH值、酶解温度和时间对蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力的影响。通过正交试验优化蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力,获得最佳酶解工艺,即底物浓度5%、水解体系p H 7、酶解温度40℃。在此试验条件下,蛴螬多肽的提取率为14.21%,总抗氧化能力为0.752 mmol/L。     

绿豆抗氧化活性肽的分离纯化及其组成分析

采用超滤法和Sephadex G-25凝胶色谱法对绿豆蛋白的酶解产物进行了分离纯化,得到了分子量为3426和1272u的两种绿豆抗氧化活性肽T1和T2,T1的纯度为85.92%,T2的纯度为94.99%,T1和T2均含有16种相同的氨基酸,表现出较强的体外抗氧化能力,T1对羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为69.14%和58.62%;T2对羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为91.70%和74.68%。      

绿豆多肽的酶法制备及抗氧化活性研究

以绿豆蛋白为原料,采用碱性蛋白酶水解法制备具有抗氧化活性的绿豆多肽,通过质量分数单因素试验及正交试验研究碱性蛋白酶水解绿豆蛋白的最佳工艺。当温度55℃、pH 9.0、酶质量分数5%、底物质量分数8%时水解度平均值达32.18%,水解效果最佳。考察了绿豆多肽在两种化学体系中的体外抗氧化作用,研究发现绿豆多肽的DPPH自由基消除能力在25 mg/mL时达到最大值85.7%,羟自由基消除能力在25 mg/mL时达到最大值61.3%,表明绿豆多肽具有较好的抗氧化能力。     

双酶法制备豌豆肽及其抗氧化活性

研究豌豆蛋白双酶水解的最佳工艺条件及产物的抗氧化活性。以豌豆蛋白粉为原料,通过单因素试验和正交试验优化出双酶分段水解豌豆蛋白的工艺条件,并初步研究豌豆肽的抗氧化活性。结果表明,双酶法制备豌豆肽的最佳工艺条件为:底物浓度10%,复合蛋白酶加酶量3.0%,pH 9.0,温度55℃,酶解3.5 h;用碱性蛋白酶酶解,加酶量3.0%,pH 9.5,温度50℃,酶解4.0 h。由此酶解得到水解物的水解度为39.61%。水解液蛋白浓度0.125 mg/mL时,其对Fe2+螯合能力为83.22%。试验表明和单酶水解相比,双酶水解工艺可提高豌豆蛋白的水解度和抗氧化活性。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

长白山松子抗氧化肽制备及活性研究

以长白山松子分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶制备抗氧化肽,通过Box-Behnken中心组合试验确定最佳水解工艺条件为:酶解温度56.5℃、加酶量7822U/g、底物质量浓度0.021g/mL、pH9.0、酶解时间240min。对该条件制备的抗氧化肽进行活性研究,结果显示随着浓度的升高,松子抗氧化肽在4mg/mL时对ABTS自由基的清除率和Fe2+螯合率达到100%,16mg/mL时对DPPH自由基清除率达到80.95%,24mg/mL时,对羟基自由基清除率达到100%。     

酶解虾副产物制备抗氧化肽的研究

以虾副产物为原料,采用α-胰凝乳蛋白酶和嗜热菌蛋白酶进行酶解制备抗氧化肽。酶解液经透析、Sephadex G-15凝胶过滤层析、离子交换色谱和反向高效液相色谱分离,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除能力和铁离子还原能力（FRAP）为指标进行纯化,得到了高抗氧化活性组分F1。质谱分析结果表明组分F1中有三个肽,对这三个肽进行序列合成并测定其活性,发现十肽GCKVALIVVG的活性最高,其DPPH自由基清除能力按抗坏血酸当量计（AAE）为（16.10±0.02）μmol AAE/g pro,铁离子还原能力为（245.37±0.03）μmol AAE/g pro。本实验研究制备并分离纯化得到高活性的抗氧化肽,为虾副产物的生产应用提供了理论依据。      

茶渣蛋白抗氧化肽制备及其活性研究

以茶渣蛋白为原料,采用酶解法制备茶渣蛋白抗氧化肽.分别以抗氧化肽的还原力和水解度为考察指标,通过单因素实验和响应面优化酶解法制备茶渣蛋白抗氧化肽的制备工艺,采用超滤法对酶解液进行初步分离纯化,并考察了温度、酸碱度、金属离子、食品添加剂以及体外消化环境对分子量小于3 kDa的茶渣蛋白抗氧化肽的还原力稳定性的影响.结果表明...     

复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化多肽

研究复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化活性多肽的最佳条件,并探究其体外抗氧化活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,以pH、温度、底物浓度、酶用量为实验因素,通过L₉(3⁴)正交实验设计筛选出制备绿豆多肽的最佳水解条件,使用DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基的清除能力评价其抗氧化活性。结果表明:复合酶协同水解绿豆蛋白的最适反应条件为pH8.5,温度56 ℃,底物浓度8%,酶用量4%,水解度可达到33.95%。所得绿豆抗氧化多肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基清除率分别为82.8%、76.82%和56.85%,具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

鲈鱼(Lateolabrax japonicus)蛋白抗氧化肽的酶解制备及结构鉴定

为了制备具有较强抗氧化活性的鲈鱼蛋白肽段,采用风味蛋白酶、复合蛋白酶、Alcalase 2.4 L、中性蛋白酶及木瓜蛋白酶等5种商业蛋白酶在其最适宜作用条件下水解鲈鱼鱼肉蛋白,比较分析了鲈鱼酶解产物的水解度(DH)、蛋白回收率和抗氧化活性(氧自由基吸收能力和ABTS自由基清除能力),用超高压液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)分离鉴定具有较好抗氧化活性酶解产物的肽段结构,并进一步合成肽段验证其活性。结果发现:鲈鱼蛋白的木瓜蛋白酶酶解产物不仅具有最高的DH和蛋白回收率,分别为25.61%和78.71%,同时具有最强的抗氧化活性,其ORAC值为783.56μmol TE/g,TEAC值为734.55μmol TE/g。采用UPLC-MS/MS分析鉴定木瓜蛋白酶酶解产物,共得到9条肽段,其中3条肽段具有显著抗氧化活性,分别是EYGTVVVFQ,HRDRLCVVQ和GGGAGMLLK,且EYGTVVVFQ抗氧化活性最强,其ORAC值和TEAC值分别为为1.43μmol TE/μmol和2.34μmol TE/μmol。本研究结果为深入研究开发鲈鱼抗氧化肽和海洋蛋白资源提供了更多理论基础。     

酶解蚕豆蛋白制备多肽酒及其抗氧化性研究

以蚕豆蛋白为原料,采用碱性蛋白酶酶解、酒精发酵制备蚕豆多肽酒,并对其抗氧化性进行了研究.结果表明:蚕豆蛋白酶解优化工艺为底物浓度32 g/L,水解温度43.2℃,酶用量9 821.12 U/g,pH 9.50,在此条件下酶解2h,蚕豆蛋白的水解度达到19.64％.以蚕豆酶解液为原料制备多肽酒的发酵工艺为加糖量20％,酵母接种量0.22％,发酵温度28℃,发酵时间6d,在此条件下制得的蚕豆多肽酒的酒精含量为9.6％,呈透明的棕黄色,口感醇正、鲜爽、具有发酵酒的醇香.本试验条件下制备的蚕豆多肽酒具有较强的抗氧化性.     

绿豆皮中黄酮类化合物的抗氧化活性及其结构分析

本文旨在分析绿豆皮中黄酮类化合物的抗氧化活性及其结构。采用20%、40%、60%、80%乙醇对绿豆皮黄酮粗提物进行梯度洗脱纯化,以总抗氧化能力（total antioxidative capability,T-AOC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力、2,2′-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2, 2′-azinobis-3-ethylbenzothia zoline-6-sulphonic acid,ABTS）自由基清除能力、羟自由基清除能力等为指标,筛选出具有最高抗氧化活性的组分,并对其进行结构鉴定。结果表明,60%洗脱液中绿豆皮黄酮的抗氧化能力最强,其DPPH自由基清除能力为48.03%;ABTS+自由基清除能力为57.53%;羟自由基清除能力为12.02%;T-AOC的抗氧化活性为207.64 U/mL,显著高于其他洗脱液（P<0.05）。绿豆皮中具有最强抗氧化活性的黄酮类化合物分别包括牡荆素(vitexin)、异牡荆素(isovitexin)及圣草酚-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(eriodictyol-6-C-β-D-glucopyranoside)。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备抗氧化多肽

为优化碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白制备抗氧化多肽的条件,采用响应面分析法,以·OH清除率为响应值,研究酶解温度、酶用量、酶解p H值对制备抗氧化肽的影响。此外,还研究了不同分子质量魔芋多肽的抗氧化活性,结果表明:最佳酶解工艺参数:底物质量分数2.25%、温度55℃、酶用量3 228 U/g底物、p H 7.84、水解时间270 min。该条件下抗氧化多肽(18.35 mg/m L)的·OH清除率为73.41%,多肽得率为75.37%。通过Sephadex G-25和Sephadex G-15串联柱分离得到5个多肽组分,其中分子质量为1 500 u和1 000 u的组分抗氧化活性较高,其清除DPPH·的IC50分别为2.82 mg/m L和3.65 mg/m L;清除·OH的IC50分别为9.03mg/m L和14.16 mg/m L;抑制大鼠肝脏自发性脂质过氧化的IC50分别为0.21 mg/m L和0.66 mg/m L;抑制大鼠红细胞H2O2诱导氧化溶血的IC50分别为0.11 mg/m L和0.22 mg/m L。     

超滤对芸豆蛋白酶解物抗氧化活性的影响

采用超滤法从芸豆蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽。研究超滤系统主要参数对膜通量的影响,确定最优的超滤条件和膜清洗方法,并对超滤前后酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行比较。结果表明：采用改性聚醚砜平板超滤膜在室温,酶解液质量分数2.5%,pH6.5 和压力0.25MPa 条件下的分离纯化效果较好;超滤能有效去除酶解液中相对分子质量较大的组分,相对分子质量2000～1000D 及1000D 以下的组分分别从11.38% 和12.64% 提高到32.83% 和 45.91%,其抗氧化活性也得到明显提高。     

脱脂羊脑蛋白水解多肽的分离纯化及抗氧化活性

为制备羊脑蛋白抗氧化肽,本实验对脱脂羊脑蛋白含量及氨基酸组成进行了分析;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶不同酶解时间的酶解液分子质量进行了分析;采用交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25和Sephadex G-15对羊脑酶解产物进行了逐级分离纯化,以羟自由基（·OH）和亚硝酸根离子清除能力为指标对分离组分进行抗氧活性评价,并对纯化后的组分抗氧化活性进行了测定。结果表明,脱脂羊脑粉中蛋白含量为60.55%,在测定的17 种氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸含量最高,且含有7 种必需氨基酸;羊脑蛋白经酶解后,分子质量集中在10 kD以下;经Sephadex G-25纯化后,得到了6 个组分,其中组分F4的抗氧化活性最强,组分F4经SephadexG-15纯化后,得到3 个组分,其中组分F4-2的抗氧化活性最强,组分F4-2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、·OH、超氧阴离子自由基（O2－·）、亚硝酸根离子的半数抑制率IC50分别为1.64、2.47、7.98、5.14 mg/mL。