染色体易位率和辐照剂量关系的建立及应用

采用1#2、#、4#全染色体涂染探针联用的荧光原位杂交（FISH）技术,检测60Coγ射线诱发正常人染色体稳定性畸变的易位率,建立剂量-效应关系,拟合的最佳回归方程为Y=0.0132＋0.0757D＋0.0158D2。实际应用验证结果表明,在远期受照生物剂量估算中,该剂量-效应关系有良好的应用价值和应用前景。     

FISH方法在辐射事故评介中的应用

为研究辐射远后危害效应,探讨荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)方法用于剂量重建的可行性。同时,用FISH、常规染色体畸变、G显带、细胞松弛素B(Cytochalasm B,CB)微核和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因位点突变分析方法对3名事故受照射者(F、S、Y)进行了照射后7年半的生物学终点检测,并对宫内受照射者S的生长发育指标进行了测量。FISH方法检测易位的结果显示,在观察足够数量细胞时用易位率估算的生物剂量与照射后模拟的物理剂量非常吻合,证明该方法可用于剂量回顾和剂量重建。从FISH、常规染色体畸变及G显带分析结果发现,受照射7年半后受检者体内仍有明显的染色体畸变,且与受照射剂量呈现良好的剂量依赖性。实验结果还表明,宫内受照射者S出生后的生长发育状况基本正常。     

小剂量X射线照射诱发小鼠精原干细胞染色体易位的剂量效应关系

用剂量为0、0.05、0.25、0.50、0.75和1.00Gy剂量率为0.05Gy/min 的 X 射线,对小白鼠分别进行一次性全身均匀照射,照射后60天,观察精原干细胞染色体易位率。观察结果表明,易位率(?)随受照剂量 D 的增加而增加,二者可拟合成直线回归方程(?)=0.12+1.94D。与关有人的资料相比,小鼠精原干细胞染色体易位率约是人的50%。     

特大剂量γ射线照射的染色体畸变剂量效应曲线

为准确估算大剂量事故受照者的生物剂量,拟合6—22Gy照射后染色体畸变剂量效应曲线。采用60Coγ射线照射离体人血,浓集有核细胞,一步法培养52h、68h和72h收获制片。计数双(多)着丝点 环数目,比较不同培养时间畸变差异,拟合剂量效应曲线及数学方程。用大剂量事故受照者的剂量结果对曲线进行验证。实验表明,大剂量照射后需适当延长细胞培养时间,52—72h获得的染色体双 环畸变率无明显差异。新拟合的剂量效应曲线符合线性平方模型Y=-2.269 0.776D-7.868×10-3D2。经事故剂量验证结果可靠。本研究首次建立了6—22Gy照射后染色体双 环剂量效应曲线及数学方程,为特大剂量照射后的准确剂量估算提供了可依据的方法。     

慢性累积γ照射诱发小鼠体细胞和生殖细胞染色体畸变的比较研究

慢性累积γ照射０～２．１Ｇｙ，生殖细胞染色体畸变率随照射剂量增大而增加，拟合成直线回归方程ｙ＝－０．１１３３＋１．１６２Ｄ（ｒ＝０．９９６２，Ｐ＜０．０５）。体细胞与照射剂量之间无相关性。各剂量点畸变率，体细胞大于生殖细胞畸变值。照后４０ｄ检查两类细胞染色体易位率，则生殖细胞又大于体细胞２．６倍，与急性照射规律相似。     

慢性累积γ照射诱发小鼠体细胞和生殖细胞染色体畸…

慢性累积γ照射０～２．１Ｇｙ，生殖细胞染色体畸变率随照射剂量增大而增加，拟合成直线回归方程ｙ＝－０．１１３３＋１．１６２Ｄ（ｒ＝０．９９６２，Ｐ〈０．０５），体细胞与照射剂量之间无相关性，各剂量点畸变率，体细胞大于生殖细胞畸变值，照后４０ｄ检查两类细胞染色体易位率则生殖细胞又大于体细胞２．６倍，与急性照射规律相似。     

荧光原位杂交检测早先受照者的染色体畸变

应用２号染色体特异性探针进行荧光原位杂交,研究＾６０Ｃｏγ射线照射诱发人外周血淋巴细胞浸色体的易位畸变,结果表明,离体照射诱发的畸变率与剂量呈现良好的相关,＾６０Ｃｏ辐射事故受照者在照后第６,７年的易位畸变率保持相对稳定,约占照后立即检测双＋环畸变率的４０％～５０％,并且易位畸变率与最初照射剂量相关良好。     

太原“4.11”钴源事故受照者生物剂量估算及照后一年细胞遗传学随访

本文报道2008年山西省农科院"4.11"钴源意外照射事故中5名受照者的生物剂量估算及照后一年的细胞遗传学随访观察结果。除采用常规双着丝粒体+环进行生物剂量估算外,对其中1例大剂量受照者选用本实验室拟合的6～22Gy60Coγ射线剂量-效应曲线进行剂量估算,同时对骨髓与外周血淋巴细胞的估算结果进行比对。照后一年随访,除了观察染色体非稳定性畸变及微核率以外,还进行了G-显带核型分析与剂量重建。结果表明:5名受照者中,1例受照剂量达到肠型放射病水平,其他4例生物剂量在中度至重度骨髓型急性放射病水平。骨髓与外周血检测结果十分接近。照后一年随访发现,3名受检者的双+环等非稳定性畸变丢失接近50%,占据畸变主要部分的是以易位为主的稳定性畸变,畸变率及复杂畸变均与受照剂量呈明显的正相关。用稳定性畸变重建的剂量与照后早期用双+环估算的剂量结果较为相近。继山东济宁事故后,本次事故对大剂量照射的生物剂量估算方法进行了又一次实际验证。     

阳江天然高本底辐射地区居民稳定性染色体畸变的研究

采用了第1、2、4号全染色体探针，以荧光原位杂交(FISH)技术，分析了广东天然高本底辐射地区(HBRA)5名儿童和13名老年男性以及对照地区(CA)6名儿童和11名老年男性淋巴细胞染色体的易位率。与老年人相比，儿童染色体的易位率低，且变异小；而在老年人中个体之间的易位率波动很大。高本底辐射地区居民染色体易位率与对照地区居民相应值比较无显著性差异。没有观察到高本底地区居民和对照地区居民在染色体稳定性畸变(易位)频率方面存在差异，这一研究结果与流行病学研究结果是一致的。长期的流行病学群组调查没有发现高本底地区存在与高本底辐射有关的癌症危险度增加。     

由染色体畸变率计算剂量的方法

本文介绍了根据正确判读的染色体畸变数估算剂量的有关方法、技巧及相应的BASIC机算程序。讨论了目前国内常规判读方法中存在的漏检可能较大的情况及其防止的措施。对用有照射时间修正因子G的剂量-效应曲线,估算剂量及其置信区间和在(n、γ)混合照射时的剂量估算方法,以及对通过泊松分布参数检验判断低LET辐射局部急性照射并估算其剂量的方法作了较详细的介绍。考察了在混合辐射照射中是否计入n与γ产生的次损伤间的作用对所估剂量造成的差异。对剂量-效应标准曲线的拟合,强调了它作正确的加权拟合,并应与公认值比较;还给出了畸变率y拟合的变导系数σ_y/y随剂量D和照射时间T的变化。 在附录Ⅰ和Ⅱ中,分别给出了按微剂量学双元作用原理对染色体畸变率产额公式的推导和次损伤数随时间的变化过程。附录Ⅲ给出了由两种类型的染色体畸变率估算剂量的方法。 附录Ⅳ给出了一个简单的由畸变率估算剂量的机算程序和另一个包含由畸变率估算剂量和由实验点拟合标准曲线的较完备的机算程序。后者,采用了紧缩的数据贮存技巧,并可按不同参量的顺序主从排队印出结果。在标准曲线的拟合程序中,包括对拟合残差的检验,并能对输入的剂量D和照射时间T给出相应的畸变率及其标准差;还设有产生模拟“实验结果”的检验拟合程序的     

用荧光原位杂交技术观察60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的剂量效应关系

研究不同剂量60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的观察值和预期值间的关系及其易位的类型和易位在细胞中的分布,为用易位率进行早先照射和慢性小剂量长期照射进行回顾性剂量估算提供必要的理论依据.用4号和7号全染色体探针,采用荧光原位杂交技术和连续Giemsa染色法分析不同剂量点60Coo射线离体照射诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变.对比观察发生于4号和7号染色体的畸变数和根据其物理相对长度计算的预期值,发现4号和7号染色体的畸变观察值和预期值非常吻合;除0.25Gy剂量点易位在细胞中的分布不符合泊松分布,为过离散分布外,其余各剂量点易位在细胞中的分布服从或接近泊松分布; 各剂量点观察到的易位中,经52h培养后,不完全易位较完全易位为多. 其中,又以荧光部分不带着丝粒的易位(T(Ab))占多数. 4号和7号的畸变观察值和预期值非常吻合,说明它们发生畸变的频率与其物理长度或DNA含量成正比.     

光谱核型分析技术——一种新的染色体核型分析方法

光谱核型分析（spectral karyotyping,sKY）技术可揭示G、R、Q带通常无法检测到的染色体结构上的细微变异,已成为染色体核型分析的一种精确、灵敏和可靠的检测手段。它具有高度的敏感性和特异性,使细胞遗传学向分子领域发展,并在临床、辐射损伤和科研等工作中得到广泛应用。SKY技术一次成像可同时区分24条染色体,例如结构复杂的易位、缺失、扩增、重排、双着丝粒、等臂及标记染色体,检测稳定性染色体畸变等,并能准确推算生物剂量曲线。SKY技术检测染色体异常可作为早期诊断、治疗监测和随访过程中的有效指标,为相关基因的克隆及癌症的发病机制的研究提供了更先进和有效的方法。本文主要介绍这一技术的方法和原理。     

用荧光原位杂交技术观察^60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的

研究不同剂量＾６０Ｃｏγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的观察值和预期值间的关系及其易位的类型和易位在细胞中的分布，为用易位率进行早先照射和慢性小剂量长期照射进行回顾性剂量估算提供必要的理论依据。用４号和７号全染色体探针，采用荧光原位杂交技术和连接ＨＧｉｅｍｓａ染色法分析不同剂量点＾６０Ｃｏγ射线离体照射诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变。对比观察发生于４号和７号染色体的畸变数和根据其物理相对长度计算的预期值，发现４号和７号染色体的畸变观察值和预期值非常吻合；除０．２５Ｇｙ剂量点易位在细胞中的分布不符合泊松分布，为过离散分布外，其余各剂量点易位在细胞中的分布服从或接近泊松分布；各剂量点观察到的易位中，经５２ｈ培养后，不完全易位较完全易位为多。其中，又以荧光部分不带着丝粒的易位（Ｔ（Ａｂ））占多数。４号和７号的畸     

荧光原位杂交技术预测人大肠癌细胞内在放射敏感性的实验研究

探讨荧光原位杂交技术预测人大肠癌细胞内在放射敏感性的可行性.应用荧光原位杂交技术检测人大肠癌动物模型照射后癌细胞2号染色体易位畸变并分析其与照射后肿瘤生长曲线的相关性.结果表明,放疗使Lovo移植瘤的增长明显延缓,Lovo细胞的放射敏感性高于SW480细胞.X射线照射后肿瘤荧光原位杂交技术检测结果显示:Lovo细胞的2号染色体诱导易位畸变量显著大于SW480细胞(p＜0.05).荧光原位杂交技术能快捷、可靠地预测人大肠癌细胞的放射敏感性,从而为临床大肠癌病人放疗的选择提供重要参考依据.     

60 Coγ射线对人线粒体COXI和ATPase6表达水平的影响

目的：观察60 Co γ射线对人外周血线粒体COXI和ATPase6基因和蛋白质水平表达的影响,探讨线粒体编码基因用于辐射生物剂量估算的可行性。方法采用60 Coγ射线照射正常人离体外周血,照射剂量率为1．013 Gy/min ,剂量分别为0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0 Gy,。照后6小时,用RT-PCR技术检测基因的表达水平,用流式细胞仪检测蛋白质的表达水平,分别拟合最佳回归方程,建立剂量-效应曲线。结果（1）0～3．0 Gy ,COXI基因表达水平的最佳回归方程为 Y＝0．629＋0．256 D （ r2＝0．920,p＜0．01）,ATPase6基因表达水平的最佳回归方程为 Y＝0．221＋0．805 D （ r2＝0．912,p＜0．01）。（2）0～5．0 Gy ,COXI蛋白质表达水平的最佳回归方程为 Y＝1．054＋0．595 D （ r2＝0．919,p＜0．01）;ATPase6蛋白质表达水平与照射剂量间的关系不明显,不能拟合出最佳回归方程。结论60 Coγ射线照射人离体外周血,随着照射剂量的增加,线粒体COXI的基因与蛋白质表达水平一致,呈增加趋势,且有良好的线性关系,有望用于辐射生物剂量的估算。     

ICRU 94号报告急性照射后个体剂量的初始阶段评估方法北大核心CSCD

国际辐射单位与测量委员会(ICRU)94号报告描述了用于急性辐射照射后个体剂量评估的方法。主要方法包括生物剂量测定和物理剂量学技术,而其他补充方法是生物测量技术、中子活化和辐射场映射方法。生物剂量测定方法包括染色体测定、细胞分裂阻断微核测定、荧光原位杂交易位分析、染色体缩合和γ-H2AX测定技术。新兴技术包括基于RNA表达、基于蛋白质和基于代谢组学的检测。     

ICRU 94号报告急性照射后个体剂量的初始阶段评估方法

国际辐射单位与测量委员会(ICRU)94号报告描述了用于急性辐射照射后个体剂量评估的方法。主要方法包括生物剂量测定和物理剂量学技术,而其他补充方法是生物测量技术、中子活化和辐射场映射方法。生物剂量测定方法包括染色体测定、细胞分裂阻断微核测定、荧光原位杂交易位分析、染色体缩合和γ-H2AX测定技术。新兴技术包括基于RNA表达、基于蛋白质和基于代谢组学的检测。     

体细胞HPRT基因突变检测用于辐射剂量估算的可行性研究

用多核细胞法研究了^60Coγ射线0－4.0Gy照射诱发的体细胞HPRT基因突变,探讨了其在辐射剂量估算中的适用范围和存在的问题。结果表明,HPRT基因突变频率Y随照射剂量D（Gy)的增加而增加,在0-4.0Gy剂量范围内可拟合为Y＝0.4022 0.2710D-0.0460D^2,在0－1.0Gy低剂量范围内,更适于拟合直线模型Y＝0.3827 0.2948D;HPRT基因突变频率与染色体畸变、微核具有良好的相关性,说明HPRT基因突变可以用于低LET辐射剂量估算,尤其适用于低剂量照射引起的单基因突变检测和辐射危害评价。     

放射性工作人员不稳定性染色体畸变分析

本文报道对314例放射性工作人员周血淋巴细胞染色体畸变的分析结果。结果表明,职业组的淋巴细胞染色体畸变率高于对照组。双着丝点畸变率 y 随累积剂量当量 D 的关系,可拟合成线性 同归方程y=3.0×10~(-2)+5.0×10~(-4)D。无着丝点畸变率在观察的剂量范围内起始有随剂量当量增加而增加的趋势。     

~(60)Coγ射线诱发早熟凝聚染色体畸变的剂量效应关系

早熟染色体凝聚技术利用早熟染色体断片和环的数量衡量电离辐射诱发的染色体损伤程度。本实验结果表明,每个融合细胞中的染色体断片值随辐射剂量的增加而增加,畸变与剂量间可拟合为一定的数学模式。在各个剂量点上,早熟染色体断片产额明显高于常规染色体方法所检出的染色体畸变率,显示早熟染色体凝聚技术具有更高的辐射敏感性。