啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备鉴定（二）

目的：实验在前期研究的基础上,研究了啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（mAb）,对单抗特性进行鉴定,用于啤酒生产中泡沫活性蛋白质的鉴定与定量。方法：制备啤酒泡沫活性蛋白Z4蛋白的单克隆抗体,并测定单克隆抗体效价、单抗亚类鉴定及确定单抗识别位点,最后通用Western Blot免疫吸附法确定单克隆抗体的交叉反应性。结果：所得两株Z4蛋白质的单克隆抗体效价可达10^6以上,其均属于IgG1亚类,但具有不同的抗原识别表位,并且对泡沫活性蛋白均具有较好的反应特异性,与浑浊蛋白、LTP1和Z7无交叉反应。为快速鉴定啤酒泡沫蛋白质中Z4蛋白质研究提供了基础。     

啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化研究

泡沫蛋白质是啤酒泡沫的骨架,其含量和性质很大程度上决定了啤酒泡沫的质量.蛋白质Z和脂转移蛋白(LTP)是啤酒泡沫蛋白质中的关键组分,实验究考察了啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化过程.结果显示:在糖化过程中,分子量为53ku及20～40ku的蛋白质被分解,蛋白质Z及LTP的含量没有太大变化;麦汁煮沸过程中蛋白质含量逐渐减少,蛋白质Z、LTP1和LTP2分别减少了11％、32％及26％;主酵过程中,蛋白质Z、LTP1和LTP2的降幅较大,分别为12％、59％和31％;后酵过程中,蛋白质Z和LTP1的含量基本不变,LTP2的含量逐渐降低,到后酵结束,LTP2的降低幅度达22％.     

啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（一）

目的研制啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（mAb）,用于啤酒生产中泡沫活性蛋白质的准确高效测定。方法Z4蛋白质与弗氏佐剂乳化后免疫BALB／C小鼠,采用间接ELISA法筛选阳性克隆株。按照传统杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果成功地获得两株Z4蛋白质的单克隆抗体,为其啤酒泡沫蛋白质中Z4蛋白质基础研究及其鉴定奠定了基础。     

啤酒中疏水性蛋白质提取鉴定及其对于泡沫性能的影响的研究

利用蛋白疏水层析色谱法(HIC)从啤酒泡沫中分离疏水性蛋白,研究发现,HIC依次分离的蛋白组分表面疏水性增强的同时,泡沫稳定性随之增强,说明HIC分离得到强疏水性多肽对于啤酒泡沫稳定性具有较明显的积极作用,而弱疏水性多肽的影响效果不明湿.此外通过质谱(Mass Spectrometry)鉴定结果显示所得到的疏水性蛋白质为蛋白质乙,通过对啤酒酿造过程中的关键控制点的跟踪,确定了啤酒酿造过程中,发酵阶段疏水性蛋白质的损失最为严重,对啤酒泡沫质量的影响最大.     

啤酒中泡沫活性Z4蛋白质提取参数及与泡持性的关系研究

啤酒泡沫是消费者在接受啤酒时首先考虑的因素之一,也是啤酒的一项重要的感观指标.泡沫活性蛋白质是啤酒泡沫中最重要的组成部分,其中Z4蛋白质约占啤酒泡沫蛋白质Z的70%.主要研究了Z4蛋白质的提取条件,确定了Z4蛋白质的提取参数,为研究泡沫活性Z4蛋白质提供了理论依据.同时,还对泡持性与Z4蛋白质的关系进行了探讨.     

啤酒泡沫蛋白质的二级结构特点及其质谱鉴定

泡沫蛋白质对啤酒泡沫性能有重要影响。采用圆二色光谱技术研究啤酒泡沫蛋白质和麦芽蛋白质的二级结构构象特点,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D SDS-PAGE)与液质(LC-MS/MS)联用对啤酒泡沫蛋白质进行分离与鉴定。结果显示,麦芽蛋白质以α-螺旋结构为主,而啤酒泡沫蛋白质以β-折叠和无规则卷曲为主,并未表现出典型的α-螺旋双负峰特征,这种结构有利于泡沫蛋白质的疏水性,从而有利于啤酒泡沫的稳定性。经质谱检测,啤酒泡沫蛋白质中共鉴定出11种蛋白质,包括蛋白质Z4、LTP1、BDAI-1及部分酶抑制剂和少量醇溶蛋白片段。     

采用圆二色谱和傅立叶变换红外光谱法研究糖化与煮沸过程中蛋白质Z的二级结构变化

蛋白质Z是啤酒酿造过程中影响啤酒泡沫稳定的一个因素,然而,很少有人研究蛋白质Z在啤酒酿造过程中其构象的改变与啤酒泡沫的关系,文章中,糖化与煮沸过程中麦汁里的蛋白质Z被纯化,并采用圆二色谱和傅立叶变化红外光谱检测蛋白质Z的结构特征结果表明其α-螺旋和β-折叠含量减少,而β-转角和无规卷曲的舍量增加糖化和煮沸过程中复杂多糖的环境可以促进蛋白质Z构象的改变和修饰的发生,另外,结构舒展的蛋白质Z提供了可修饰的区域,同时其蛋白质的疏水核心区域的反应性氨基酸侧链也被暴露通过分析蛋白质Z的结构变化可以对其维持啤酒泡沫的机制提供一个更深入的了解。     

利用SDS-PAGE电泳对啤酒生产过程中蛋白质动态变化的研究

采用SDS -PAGE电泳,对青岛啤酒酿造过程中的可溶性蛋白质变化进行了动态的跟踪。发现制麦和糖化过程是蛋白变化最明显的阶段,蛋白的分布和含量整体呈下降趋势。啤酒和啤酒泡沫中蛋白的分布较接近,主要表现为4 .3万的窄带和0 .7- 1.4万的宽带电泳图谱分布。     

蛋白质组成对啤酒浑浊和泡沫稳定性的影响

在中型(50L)和小型(700—800mL)酿酒试验中，利用免疫化学技术包括酶联免疫吸附法(ELISA)，对通过麦芽性状来预测啤酒质量的方法进行了研究报道。该方法主要在啤酒泡沫蛋白和利用硅胶提取的蛋白质中加入多克隆抗体和单克隆抗体，通过抗原抗体间的反应和免疫印迹进行鉴别，研究发现ELISA法可以鉴定不同的麦芽蛋白质。随着免疫化学技术的发展，该方法可为酿造者选择高质量的麦芽，以提高啤酒泡沫的稳定性和降低浑浊形成的机率提供依据。     

测定蛋白质分解酶A的方法

蛋白质分解酶 A,是发酵过程中酵母细胞分泌的产物,已证实能降解泡沫活性蛋白从而降低啤酒泡持性。为了提高测定蛋白质分解酶 A 的精确度,研究者合成了一种新的荧光物质MOCAc-Ala-pro-Ala-Lys-Phe-Phe-Arg-Leu-Lvs(Dnp)-NH_2。该物质能快速有效的检测出发酵麦汁和商品啤酒中蛋白质分解酶 A 的含量。该酶检测蛋白质分解酶 A 的灵敏度比其它几种报道过的酶蛋白、合成蛋白高几百倍。这种新的测定方法促进了酵母活性测定和酵母处理相关产业的发展,并为解决纯生啤酒的泡沫问题提供检测手段上的帮助。     

The Impact of Malt Derived Proteins on Beer Foam Quality. Part I. The Effect of Germination and Kilning on the Level of Protein Z4, Protein Z7 and LTP1

The effect of barley germination and kilning on three putative beer foam-positive proteins was investigated by immunoblotting and ELISA procedures. These procedures involved the use of specific antibodies raised to purified lipid transfer protein 1 (LTP1)and the two protein Z forms, Z4 (BSZ4) and Z7 (BSZ7). The free fraction of BSZ4 and BSZ7, and all LTP1 were extracted by aqueous salt-solution from barley and malt. The addition of reducing agent allowed the extraction of bound BSZ4 and BSZ7. A previously undescribed fraction of BSZ4 and BSZ7, refered to as latent, was extracted with SDS and reducing agent. The barley combined fraction (free + bound fractions) was surveyed in 93 barley varieties to show that BSZ4 was the dominant isoform, on average constituting ?80 % of all protein Z. Considerable variation was observed between varieties in the level of LTP1 (502–1144 μg/g) and the combined fractions of BSZ4 (18–2136 μg/g) and BSZ7 (38–771 μg/g). The free fraction is expected to be more available for extraction into wort during mashing than the bound or latent fractions. The level of LTP1 did not change substantially during germination, but a significant proportion of the latent and/or bound protein Z fractions was converted into the free fraction. In the seven varieties studied the free fraction of BSZ4 and BSZ7 increased 149–300% and 49–141%, respectively. Proteolytic cleavage in the reactive site loop converts protein Z to heat- and protease-stable forms that survive the brewing process. During germination most of the free BSZ4 and 30–70% BSZ7 was converted to the cleaved form. Kilning was found to reduce the amount of protein Z and LTP1 that could be extracted by 10–30% and 7–37%, respectively, which is likely to be counter productive for foam quality. These results suggest that barley variety selection and optimisation of germination and kilning protocols during malting may be opportunities for improvement of beer foam quality.     

In vitro studies on the main beer protein Z4 of Hordeum vulgare concerning heat stability,protease inhibition and gushing

Protein Z4, the most abundant form of serpin protein Z of Hordeum vulgare, is one of the major constituents of beer foam and inhibits the activity of serine proteases. The possible influence of protein Z4 on malt proteases, which impact malt quality, is of interest for brewers. In addition, the persistence of Z4 in the brewing process and the ensuing presence of Z4 in beer matters to brewers because of its impact on foam. In order to analyse the influence of Z4 on protease inhibition and beer gushing, Pichia pastoris cells were heterologously transformed with the Z4 coding gene and the protein was recovered from the supernatant of a transformant's liquid culture. Agar diffusion assays showed that the recombinant Z4 protein had an inhibitory effect on proteases present in barley malt. Heat denaturation of the protein impaired protease inhibition and revealed degradation of the structure of Z4. The effect of Z4 on hydrophobin‐induced gushing was analysed by addition of the protein to beers pre‐treated with the class 2 hydrophobin FcHyd5p. Results demonstrated that addition of protein Z4 to gushing beer reduces the overflow volume considerably. Heat treatment again had a negative impact on the gushing reduction capacity of Z4. Copyright © 2014 The Institute of Brewing & Distilling     

大豆蛋白纤维与有色涤纶混纺工艺研究

介绍了大豆蛋白纤维的特点，结合生产色纺纱的实践，通过工艺试验，分析了纺纱工序影响色纺纱质量的一些因素，为提高大豆蛋白纤维与有色涤纶混纺纱的质量提供参考依据。     

再生蛋白质纤维的开发

目前再生蛋白纤维开发方向主要有两个方面：一是生产工艺进一步完善优化,降低生产成本及对环境的污染;二是生产品种的复合功能化.文章介绍了再生蛋白质纤维的研发现状,并着重介绍了以羊毛、猪毛等下脚料为原料的再生动物蛋白纤维,同时对再生蛋白质纤维的发展前景进行了展望.     

低变性花生蛋白粉生产工艺研究

该研究利用低温压榨脱脂技术,在改进传统花生油生产工艺同时,比较不同工艺条件对花生蛋白功能特性的影响,确定蛋白质变性程度最低的生产工艺条件,并生产出低变性花生蛋白粉,这种蛋白粉可作为食品品质改良剂应用于许多食品的加工中。     

配方乳粉生产过程中酸度变化研究及检测

对配方乳粉生产过程中酸度变化和检测方法进行了研究。通过采用3段配方奶粉和中老年配方奶粉在生产过程中不同工序物料配度数据，并研究了酸度变化与蛋白质热稳定性的关系，得出了生产过程中物料酸度的控制参数，从而保证产品蛋白质的热稳定性，指导生产实践，提高配方乳粉品质。     

大豆蛋白纤维织物染整工艺探讨

根据印染加工的要求，对大豆蛋白纤维织物的若干性能进行研究，从实验和实际生产两方面探讨了大豆蛋白纤维织物染整工艺特点，如谨慎烧毛，不丝光，避免高温接触式烘干，并具体介绍了大豆蛋白纤维织物的染整加工要点。     

超声辅助提取对蛋白质的功能性质和结构影响的研究进展

超声辅助提取技术因具有提取率高、时间短、成本低、对环境影响小、能耗低等优点在蛋白质提取领域中得到广泛研究.迄今为止,未见超声辅助提取技术对蛋白质结构和功能影响的全面综述.结合近年来国内外超声辅助提取技术提取蛋白质的最新研究进展,系统阐述了提取过程中蛋白质结构的变化,包括粒径、二级和三级结构;同时总结了超声辅助提取技术对...     

锁阳螺旋藻营养片生产工艺及其蛋白质营养价值的评价

以锁阳提取物和螺旋藻粉为主要原料,经方差分析,筛选出最佳配比,采用直接成型制片工艺,生产锁阳螺旋藻营养片片。应用模糊识别法和氨基酸比值系数法,分别以鸡蛋蛋白质为标准蛋白,以WHO/FAO氨基酸参考模式为评价标准,对锁阳螺旋藻营养片蛋白质营养价值进行了全面评价。结果表明:锁阳螺旋藻营养片中含有18种氨基酸,总含量为42.75%,蛋白质中氨基酸种类齐全,必需氨基酸(EAA)占总氨基酸量的36.5%,色氨酸为第一限制氨基酸,含硫氨基酸为第二限制氨基酸,氨基酸比值系数为0.54和0.72。