乳粉中阪崎肠杆菌检测能力验证结果与分析

目的提升实验室检测乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的速度和准确性。方法依据GB4789.40-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》和经优化的SN/T1632.3-2013《出口奶粉中阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)检验方法第3部分:荧光PCR方法》以及能力验证作业指导书对乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)进行检测和结果判断。结果通过实时荧光PCR法的快速初筛,初步判断样品CODE29为阴性,样品CODE95为阳性;再经显色平板分离和VITEK2生化鉴定,结果显示:样品CODE29检出肺炎克雷伯杆菌、弗氏柠檬酸杆菌和大肠埃希氏菌;样品CODE95检出阪崎肠杆菌和大肠埃希氏菌。结论本次乳粉样品中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检测能力验证结果合格,为提高相关微生物实验室的检测能力提供参考。     

克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的分离与鉴定能力验证结果与分析

目的 通过参加“奶粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的检测能力验证计划”,验证实验室对克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的检测能力,提高实验室检测技能。方法 依据GB 4789.40-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》中的第一法,对能力验证样品进行检验,对分离出的可疑菌落进行生化鉴定,同时用BIOLOG鉴定系统对可疑菌落进行鉴定。 结果 编号G785和编号V995的两个能力验证样品皆检出克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌) 结论 本次能力验证获得满意结果,证明本实验室具备克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的检测能力。在本次能力验证实验过程中,在以国标法检测的同时,辅以BIOLOG进行鉴定,与传统生化鉴定结果互为印证,提高了检测结果的准确性,对以后的检测工作具有一定的参考价值。     

2018年巧克力中沙门氏菌检测能力验证结果与分析

目的参加中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-135巧克力中沙门氏菌检验能力验证,提高实验室的检测技术能力与水平。方法按照盲样作业指导书的要求对样品进行前处理后,依据GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法,对3份样品进行沙门氏菌的分离和血清学鉴定,对分离出的可疑菌落用全自动微生物鉴定系统进行鉴定。结果CODE0109样品中检出鼠伤寒沙门氏菌、CODE0143样品中检出肠沙门双相亚利桑那亚种(沙门氏菌Ⅲb),CODE0835样品中未检出沙门氏菌。本实验室顺利完成考核,测定结果与考核结果一致。结论本次能力验证检出的肠沙门双相亚利桑那亚种在沙门氏菌显色平板上出现蓝色菌落,而以往则为紫红色菌落,因此在检测中应引起重视。通过此次能力验证,本实验室的沙门氏菌检测技术水平得到了有效验证和提高。     

TTC在乳及乳制品菌落总数检测中的应用

检测乳及乳制品菌落总数,为达到菌落在培养基中清晰可辨,在平板计数琼脂培养基中添加2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)。以灭菌乳、发酵乳、冰淇淋为样品基质,分别加入适当菌含量的大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、枯草芽胞杆菌工作菌悬液,制备适当浓度的TTC平板计数琼脂,同时以不添加TTC的平板计数琼脂作为对照,对同一样品进行菌落计数并同国标方法结果进行对比。TTC平板计数琼脂终浓度在0.001%~0.002%时能够使菌落显色,且与不添加TTC的对照组对比结果一致。在检测成分复杂的乳及乳制品样品时添加适宜浓度的TTC,有助于菌落的辨认,能够提高检验人员菌落计数的准确性,可用于检测乳及乳制品中菌落总数。     

典型菌落计数对金黄色葡萄球菌检测结果的影响

本文分析总结了盲样考核样品中金黄色葡萄球菌在Baird-Parker琼脂平板上的典型菌落计数对检验结果准确性的影响。结果显示当实验人员挑取典型菌落不正确或没有对典型菌落进行分类鉴定时结果将存在很大的差异。这表明金黄色葡萄球菌在Baird-Parker琼脂平板上出现不同类型典型菌落应通过分类计数鉴定,以减少典型菌落计数干扰,增加检测结果的准确性。     

3种不同培养基和1种测试片检测水溶性化妆品中菌落总数的结果分析

目的使用t检验法分析3种不同培养基和1种测试片检测水溶性化妆品中菌落总数结果。方法参照《化妆品安全技术规范》(2015年版),使用卵磷脂吐温80营养琼脂、TTC营养琼脂、平板计数琼脂方法进行样品菌落总数检测,然后使用Petrifilm TM菌落测试片检测样品。运用配对t检验法评价4种不同方法对水溶性化妆品中菌落总数计数结果一致性的影响。结果在10~2、10~3 CFU/m L 2种不同浓度,平板计数琼脂法结果波动性最大,无法抑制菌落蔓延,而TTC营养琼脂和菌落测试片相对卵磷脂吐温80营养琼脂,具有抑制菌落蔓延生长、提高计数结果准确性的作用。结论在一定浓度下,可根据实际情况来选择相应培养基检测水溶性化妆品中菌落总数以提高检测效率和质量。     

巧克力中沙门氏菌能力验证结果与分析

目的 分析实验室对巧克力中沙门氏菌检测能力验证实验与结果。方法 依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》对巧克力样品进行沙门氏菌检测。参照能力验证计划参试指导书来进行测定和结果判断。结果 通过平板法结合生化鉴定实验结果可知, 编号CODE:384有可疑目标菌落检出沙门氏菌阳性菌, CODE:544、CODE:699的可疑目标菌落均未检出沙门氏菌阳性菌。结论 本次实验室对巧克力中沙门氏菌检测能力验证结果合格, 为提高相关微生物实验室的检测能力提供参考。     

平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较分析

食品污染的微生物主要是细菌,通过对食品微生物菌落总数进行检测,能够掌握食品受污染程度。而平板计数法与纸片法均能够对食品微生物菌落总数进行检测,对二者进行比较分析,能够为菌落计数标准方法的调整提供思路。一、实验方法比较准备平板计数琼脂培养基和菌落总数测试片,并准备饼干、蛋糕以及两份质控样品。具体实验如下:1.平板计数法。(1)培养基的配制。     

2018—2020年度乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)能力验证样品的研制及其应用

目的 制备乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验能力验证样品,并应用于2018—2020年度实验室能力验证考核。方法 将背景菌株和克罗诺杆菌属通过生化、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定确认菌株种属。采用冷冻干燥技术制备的阴性样品(含背景菌)和阳性样品(含背景菌和克罗诺杆菌属)。随机抽取阳性样品和阴性样品各20份进行均匀性检验,然后将样品分别存放于-20℃和4℃进行储藏稳定性检验,存放于25℃和37℃进行运输稳定性检验。向参加考核的实验室发放样品并提供作业指导书,回收各实验室结果进行统计。结果 菌株种属鉴定结果与预期结果一致,均匀性、储藏稳定性和运输稳定性均满足要求。2018—2020年度考核结果满意率分别为97.1%、94.7%和100%。结论 制备的样品满足此能力验证项目的需求,通过组织能力验证考核可以反映出我国实验室之间差异,有助于进一步提高实验室检验水平。     

奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析

目的 提高实验室用传统生化方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的能力和水平。方法 用空白添加法和交叉试验检查培养基性能后,以奶粉样品为材料,用传统生化培养方法进行检测。结果 发现在传统生化检测技术中,对于排除非沙门氏菌来说,BS板作用突出,XLD和沙门氏菌显色平板容易受干扰菌影响。W样品检出沙门氏菌,Q样品未检出沙门氏菌;V样品检出阪崎肠杆菌,G样品未检出阪崎肠杆菌。结论 通过该研究,本实验室的沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的传统生化检测技术水平和能力得到了提高。     

膜过滤法微生物检验简介——快速微生物检验法与检测

<正>快速微生物检验法1、从传统微生物检验技术的基础上发展而来的快速微生物检验方法已经使用了20多年,在微生物检验技术上并没有本质上的提高,只是在微生物的样品准备上和微生物的计数上相对于传统微生物检验方法有所提高A:SpirlPlating方法这种方法是将带有浓度梯度的菌悬液涂布在预先倾注好的选择性和非选择性的琼脂平板上,菌悬液从琼脂平板中心向周围浓度递减,将琼脂平板在合适的温度下经过适当时间的培养后通过激光计数器对琼脂平板上的菌落进行扫描计数,样品的准备和计数时间相对于传统的微生物检验法节省了时间,利用这种原理的快速微生物检验产品主要有AUTOPLATER(SpiralBiotech,Bethesda,Md.,U.S.A)。     

食品中3M~(TM)克罗诺杆菌属分子检测系统评价研究

目的用不同来源的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)、非目的菌、人工染菌食品样品,考核评估3M~(TM)分子检测系统对克罗诺杆菌属的检出限、灵敏度、特异性和准确度,以及与国标法(GB 4789.40-2016)检验结果的一致性。方法用3M~(TM)分子检测系统(molecular detection system,MDS)对实验室保存的50株已确认克罗诺杆菌属、40株非目的菌株进行检测,确定该试剂盒的检出限、灵敏度和特异性;对240份人工污染不同浓度目的菌样品,用3M~(TM) MDS和国标法同时检验,分析方法的准确度和检验结果的一致性。结果 3M~(TM) MDS对50株不同来源的克罗诺杆菌属的检测灵敏度为100%,平均检出限为1.79×10~3 CFU/mL;对40株非目的菌检测结果均为阴性,特异性为100%。用3M~(TM) MDS与国标方法对人工污染10~1、10~0、10~(-1) CFU/100 g克罗诺杆菌属FC718的240份不同来源乳粉、糊精、乳清和乳糖样品进行检测,结果一致性均大于95%,方法准确度为97.5%。结论 3M~(TM) MDS方法具有低检出限、高灵敏和特异性特点,在不同食品样品基质中,检验结果呈现良好的准确度,与国标方法检验结果具有高度一致性,是一项适合基层、企业推广的快速、可靠方法。     

阪崎克罗诺杆菌标准物质研制

目的采用冷冻干燥技术制备均匀性和稳定性符合要求的阪崎克罗诺杆菌标准物质,用于实验室内部质量控制。方法对使用菌株阪崎克罗诺杆菌(45403)的生化特征、16SrRNA序列、质谱特征进行确认。采用冷冻干燥技术制备含量为103 CFU/样品的菌球。参照CNAS-GL29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,对20件样品进行均匀性检验,采用单因素方差分析对结果进行统计分析。将样品分别于-20、2、37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。组织5家实验室进行协同标定。使用20件婴儿配方乳粉作为基质对阪崎克罗诺杆菌标准物质的使用效果进行确认。结果阪崎克罗诺杆菌(45403)生化鉴定结果、16SrRNA序列的NCBIGenebank比对结果、质谱鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)。采用单因素方差分析进行均匀性检验, F=1.067, P=0.442,符合标准物质的要求。于-20℃保藏170 d,于25、37℃保藏14d后,样品仍然稳定。经5家实验室协同标定,样品含量均为103 CFU/样品。20件婴儿配方乳粉作为基质加入阪崎克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出。结论阪崎克罗诺杆菌(CMCC45403)的生化特征、16SrRNA序列分析、蛋白飞行质谱特征均符合克罗诺杆菌属的典型特征。均匀性、储藏稳定性、运输稳定性及适用性的验证实验结果均符合标准物质的要求。     

琼脂覆盖法防止菌落蔓延生长的可行性探究

以50批重庆市售月饼为样品,按照国家标准《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》(GB 4789.2—2016)进行菌落总数项目检测,采用琼脂覆盖法,即在凝固后的琼脂培养基表面覆盖一薄层平板计数琼脂培养基(约4 mL),从而实现抑制菌落蔓延生长情况的目的。结果表明,琼脂覆盖法能很大程度上改善菌落蔓延生长情况,蔓延菌落占比下降约22%,菌落计数更为准确,可见琼脂覆盖法是一种简便有效防止菌落蔓延生长的方法。     

乳粉中克罗诺杆菌属阪崎肠杆菌能力验证样品制备及应用

目的 制备均匀性及稳定性均满足要求的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验能力验证样品,用于组织能力验证考核。方法 通过生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定背景菌株及所使用的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)菌株。采用冷冻干燥技术制备均匀性及稳定性均满足要求且各种菌含量为10⁴ CFU/瓶的能力验证菌球。依据CNAS-GL003∶2018《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》,随机抽取阳性样品和阴性样品各20份进行均匀性检验,再将样品存放于-20 ℃、4 ℃进行保藏稳定性检验,存放于25 ℃、37 ℃进行运输稳定性检验。依据GB 4789.40—2016制定作业指导书并发放样品,回收各实验室结果进行统计。结果 目的菌株及背景菌株的鉴定结果均正确,均匀性、运输稳定性及保藏稳定性检验均符合能力验证样品的要求。依据评价原则及25家实验室反馈的结果,2021年度考核结果满意率为100%。结论 乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)能力验证样品满足本年度能力验证的要求,为参加考核的检测机构提供了外部质控考核结果。     

6种克罗诺杆菌精准鉴定及标准物质的制备研究

目的 制备具有我国食源性特点的6种克罗诺杆菌检验用标准物质。方法 通过生化、MALDI-TOF MS及二代高通量全基因组测序技术对研究用菌株进行菌种鉴定确认后,制备104 CFU/样品浓度的标准物质。参照CNAS-GL003等标准要求对样品进行均匀性检验后,采用单因素方差分析对结果进行评价。将样品放于25 ℃和37 ℃及-20 ℃、4 ℃条件下,分别进行运输稳定性检验及储存稳定性检验。依据国家标准GB 4789.40,将研制的6种标准物质分别加入20件乳粉样品中进行检验,检测真实食品样品中适用性。组织3家实验室,对6种标准物质进行协作标定。结果 CMCC45413、CMCC45410、CMCC45414、CMCC45412、CMCC98025及CMCC45408生化鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌属(Cronobacter sakazakii group),准确度为92%至99%;MALDI-TOF MS鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）,分数为1.914至2.244;全基因组测序鉴定结果与菌株已知种或亚种信息一致。均匀性测试结果符合正态分布,通过单因子方差分析,6种标准物质F值分别为0.422、0.922、0.980、0.409、0.721及0.631,F＜F0.05,符合均匀性要求。25 ℃及37 ℃ 放置7 d,6种标准物质中菌含量仍保持在104 CFU/样品。6种标准物质放置于4 ℃储存28 d及放置于-20 ℃储存90 d,菌含量均为104 CFU/样品,且存活率均在80%以上。20件真实乳粉样品中分别加入6种克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出;经3家实验室协作标定,6种克罗诺杆菌标准物质浓度均为104 CFU/样品。结论 本研究制备的6种克罗诺杆菌标准物质均匀性、稳定性、真实食品样品中应用验证及协作标定结果均符合要求,可应用于婴幼儿乳粉中克罗诺杆菌的检验。     

婴儿配方粉干法加工过程肠杆菌科和克罗诺杆菌属监测

目的了解婴儿配方粉干法加工过程中肠杆菌科和克罗诺杆菌属的分布,掌握终产品中克罗诺杆菌属的污染途径。方法对4家企业的产品相关样品(原辅料、中间产品和终产品)和环境进行监测,选择传统分离培养方法对肠杆菌科和克罗诺杆菌属进行检验,利用脉冲场凝胶电泳技术进行克罗诺杆菌属溯源研究。结果地面、空调回风口和使用后的清洁工具中肠杆菌科检出率较高,均在20%左右。产品相关样品、清洁作业区环境相关样品中克罗诺杆菌属检出率分别为2.56%(12/468)和0.27%(6/2 185),22株分离株共有13种脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型,每个企业的指纹图谱各不相同,其中有四组分离株分别具有同源性。终产品中克罗诺杆菌属的污染主要来自原辅料,其次为环境中定植的菌株。结论该研究对掌握婴儿配方粉加工企业肠杆菌科和克罗诺杆菌属的污染分布及终产品中克罗诺杆菌属的可能污染源,制定加工过程的卫生控制措施,确保终产品的安全具有重要意义。     

食品中3M™克罗诺杆菌属分子检测系统评价研究

目的：用不同来源的克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）、不同来源的非目的菌及不同来源的人工染菌食品样品,考核评估3M? MDS分子检测系统（以下简称3M? MDS）对克罗诺杆菌属的检出限、灵敏度、特异性和准确度,以及与国标法（GB4789.40-2016）检验结果的一致性。方法：用3M? MDS对实验室保存的50株已确认克罗诺杆菌属、40株非目的菌株进行检测,确定该试剂盒的检出限、灵敏度和特异性;对240份人工污染不同浓度目的菌样品,用3M? MDS和国标法同时检验,分析方法的准确度和检验结果的一致性。结果：3M? MDS对50株不同来源的克罗诺杆菌属的检测灵敏度为100%,平均检出限为1.79×103CFU/mL;对40株非目的菌检测结果均为阴性,特异性为100%。用3M? MDS与国标方法对人工污染101 CFU/100g、100 CFU/100g 、10-1 CFU/100g克罗诺杆菌属FC718的240份不同来源乳粉、糊精、乳清和乳糖样品进行检测,结果一致性均大于95%,方法准确度为97.5%。结论：3M? MDS方法具有低检出限、高灵敏和特异性特点,在不同食品样品基质中,检验结果呈现良好的准确度,与国标方法检验结果具有高度一致性,是一项适合基层、企业推广的快速、可靠方法。     

2018年河南省市售婴幼儿谷类辅助食品微生物污染状况调查

目的 了解河南省市售婴幼儿谷类辅助食品卫生状况,为食品安全风险评估及标准制定提供基础数据。方法 参照《2018年国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》提供方法进行采样和检测,在河南省共采集婴幼儿谷类辅助食品103份,对其进行肠杆菌科、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增生李斯特菌和克罗诺杆菌属污染状况检测,对检测中可疑菌落采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行鉴定。结果 103份样品中肠杆菌科和克罗诺杆菌属检出率分别为0.97%(1/103)和5.83%(6/103),均在婴幼儿即食谷物辅助食品中检出,产地集中在江西省和福建省,采样地点类型均为便利店/零售店,6份克罗诺杆菌属阳性样品中有5份样品标识为≥辅食添加初期。9份样品蜡样芽胞杆菌定量结果在10～10³ CFU/g范围,检出率为8.74%(9/103),样品产地包括广东省、江西省、福建省、黑龙江省和四川省,采样地点类型均为超市和便利店/零售店,其中有8份是婴幼儿即食谷物辅助食品。结论 河南省市售婴幼儿谷类辅助食品尤其是婴幼儿即食谷物辅助食品受到克罗诺杆菌属和蜡样芽胞杆菌污染,且这些阳性产品中大多数标识的适用年龄为≥辅食添加初期,由此带来的食品安全风险较大,建议婴幼儿即食谷物辅助食品添加克罗诺杆菌属和蜡样芽胞杆菌微生物限量,降低由此带来的食品安全隐患。     

植物源食品中菌落总数的测量不确定度评定

目的 对植物源食品中菌落总数的测定结果进行不确定性评定,确保检测结果的准确性。方法 按照食品安全国家标准GB 4789.2—2022的方法,采用平板计数琼脂培养基和测试片分别测定植物源食品中菌落总数,对引入的不确定度分量进行评定,最终分别合成植物源食品在平板计数琼脂培养基和测试片上菌落总数测定的不确定度。结果 在置信概率为95%时,植物源食品在平板计数琼脂培养基和测试片上菌落总数测定结果的扩展不确定度分别为0.045 863和0.049 436,测定结果区间范围分别为7.0×10³~1.1×10⁴和7.0×10³~1.2×10⁴ CFU/g。结论 植物源食品在平板计数琼脂培养基和测试片上菌落总数测定结果差异不大,针对各自评定数据可对试验样本进行结果判定分析。建议实验室通过提升自身检测能力来降低不确定度分量的引入,为植物源食品的生产、检验和监督等方面提供坚实有力的技术保障。