MLST在乳酸菌鉴定及其多样性分析中的应用

乳酸菌是健康人类及动物肠道中重要的益生菌群,在维持肠道微生态平衡方面发挥重要作用.由于乳酸菌的益生功能具有菌株特异性,因此准确、灵敏的分子鉴定技术对乳酸菌功能的研究十分重要.多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)是一种基于核酸序列测定的细菌分型方法,能够准确地从亚种水平进行菌株...     

葡萄酒乳酸菌种内遗传多样性鉴定

为了研究葡萄酒乳酸菌从自然启动苹乳发酵的葡萄酒中分离乳酸菌,并对其进行生化鉴定和16S rRNA序列测定,结果显示分离菌种有酒类酒球菌、马里乳杆菌、植物乳杆菌和短乳杆菌4种乳酸菌。同时利用单酶切扩增片段长度多态性(SE-AFLP)对其进行种内基因多样性鉴定,并绘制种内进化树,结果表明SE-AFLP在乳酸菌分类研究中能够达到菌株水平的区分。     

国外优质干酪中乳酸菌的分离鉴定与应用

对进口干酪中乳酸菌进行初步分离鉴定。同时利用其中优良菌株进行风味干酪生产小试，结果较好。     

新疆特色干酪中乳酸菌的分离鉴定

从新疆不同牧区采集工艺不同的干酪制品,对其中的乳酸菌进行分离纯化、生理生化性质试验和16S rRNA分析.结果表明,分离、纯化出的104株乳酸菌种,有82株为乳杆菌属(Lactobacillus),12株为肠球菌属(Enterococcus),10株为魏斯氏菌属(Weissella).利用16S rRNA序列同源分析和系统发育树分析对具有不同生理生化特性的代表菌株进行了分子鉴定,鉴定结果为TNM-2与干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、Y5-4与食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)、NS2-2与植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的同源性达到100％,NM-2与瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、Y1-1与马乳酒乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)、WG与耐久肠球菌(Enterococcus durans)的同源性达到99％.     

pheS基因序列分析在干酪乳杆菌群种水平鉴定中的应用

对干酪乳杆菌群(Lactobacillus casei group)内5个种和4个亚种的23个代表菌株的苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基基因(pheS)序列和18个16S rRNA基因序列进行系统发育学分析,探索pheS基因序列分析在干酪乳杆菌群种水平鉴定中应用的可行性。分析结果表明,pheS基因序列群内种间的差异率在6.8%～34%之间,种内最大差异率可达3%,其变异率远高于16S rRNA基因,可作为该群内种水平鉴定的重要手段。     

乳酸菌的分类鉴定方法的研究进展

近年来随着乳酸菌众多有益功能的开发,乳酸菌在食品、保健品等行业的应用越来越广泛。然而大部分乳酸菌菌种均无统一的标准鉴定方法,难于对该类产品进行质量控制,保证其安全性,故建立规范的乳酸菌标准鉴定方法势在必行。该文论述了目前国内外用于乳酸菌分类鉴定的方法。     

食品检验中乳酸菌鉴定方法的探讨

目的评价GB 4789《食品安全国家标准食品微生物学检验》中乳酸菌的鉴定方法。方法选择5种双歧杆菌、4种乳酸杆菌和1种链球菌共10株乳酸菌,分别采用GB 4789标准中的方法、API生化鉴定系统、16S rRNA基因序列分析法和RiboPrinter全自动基因指纹图谱分析法进行鉴定。结果 GB 4789对乳酸杆菌和嗜热链球菌鉴定效果较好,对双歧杆菌的鉴定能力较弱;API鉴定乳酸菌一般至"属"水平;16S rRNA序列分析和RiboPrinter系统可鉴定乳酸菌至"种"水平,婴儿双歧杆菌的鉴定结果为长双歧杆菌婴儿亚种。结论建议GB 4789标准中增加分子生物学方法作为乳酸菌鉴定方法的补充,同时建议及时更新标准中菌株的分类和名称。     

乳酸菌鉴定方法在食品工业中的应用及研究进展

乳酸菌是食品发酵工业中一类重要的菌种,准确快速的乳酸菌分类鉴定是十分必要的。本文对目前使用的乳酸菌表型特征鉴定和基因型特征鉴定乳酸菌方法及各种方法的优缺点进行了综述。      

乳酸菌鉴定方法在食品工业中的应用及研究进展

乳酸菌是食品发酵工业中一类重要的菌种,准确快速的乳酸菌分类鉴定是十分必要的。本文对目前使用的乳酸菌表型特征鉴定和基因型特征鉴定乳酸菌方法及各种方法的优缺点进行了综述。     

促熟干酪的非发酵剂乳酸菌筛选及其对干酪浆模型蛋白质降解的研究

从中国传统发酵食品酸菜中分离筛选促进干酪成熟的非发酵剂乳酸菌,并研究其对干酪浆蛋白质降解的影响。应用ROGOSA琼脂从东北农家酸菜中分离菌株,采用多元统计分析法进行复筛,通过16S rDNA基因序列分析鉴定筛选菌株,最后研究筛选菌株对干酪浆蛋白水解特性的影响。结果表明:从酸菜中筛选出一株可以促进干酪成熟的非发酵剂乳酸菌S-1,经16S rDNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum ST-Ⅲ),此菌株产酸能力低,具有较高的自溶度与氨肽酶活力,在干酪浆模型成熟过程中表现出较强的蛋白水解能力。     

豆腐乳中乳酸菌的分离鉴定与发酵特性研究

目的分离鉴定农家自制传统发酵豆腐乳中的乳酸菌,探讨其作为豆类乳酸菌发酵饮品菌株的可行性。方法利用MRS(man rogosa sharp)培养基分离豆腐乳中的乳酸菌,通过形态学观察、生理生化特性和16S rDNA基因序列分析进行鉴定,并将所分离到的乳酸菌与适合于豆类植物发酵的植物乳杆菌FJAT-7926(Lactobacillus plantarum FJAT-7926)和干酪乳杆菌FJAT-7928 (Lactobacillus casei FJAT-7928)进行发酵特性的对比研究。结果从豆腐乳中分离出1株乳酸菌,命名为FJAT-46777,该菌株菌体细胞为圆端直杆状或圆端弯曲杆状,无芽孢,革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,生理生化特征与发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)一致,对菌株的16S rDNA基因进行扩增测序、分子系统发育树分析,也表明其为发酵乳杆菌。发酵乳杆菌FJAT-46777发酵的豆乳中乳酸菌增殖速度最快,最终活菌数最高,为9.42 lg(CFU/mL); pH值下降最快,最终pH值最低,为3.91;滴定酸度上升速度最快,最终滴定酸度最高,为62~ΟT。结论分离自豆类自然发酵食品中的发酵乳杆菌FJAT-46777,对豆类植物为主的基质具有更优良的发酵特性,发酵时间快,乳酸菌含量高,产酸能力强,适用于发酵豆乳的开发。     

西藏地区牦牛发酵乳制品中乳酸菌的分离与鉴定

实验分析西藏牧民家庭制作的牦牛发酵乳制品中酸奶和奶渣的微生物数量,通过菌种选择分离,采用传统分类与16S rRNA基因序列测定的方法对分离的乳酸菌进行了鉴定。结果表明:3份发酵牦牛乳样品中乳酸菌数为1.04×104～2.10×106CFU/ml,酵母菌数为8.20×103～6.70×105CFU/ml;2份奶渣样品中乳酸菌和酵母菌为0.2×10～1.0×10CFU/g;共分离15株乳酸杆菌、4株乳酸球菌和3株酵母;乳酸菌中10株为Lactobacillus paracasei、1株Lactobacillu fermentum、2株Lactobacillus reuteri、1株Lactobacillus brevis、1株Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus、2株Pediococcus acidilactici、另有2株分别为1株Pediococcu和1株Lactococcus菌株,未鉴定到种;L.paracasei为牦牛发酵乳制品中乳酸菌的优势种(占总分离株的55.6%)。     

鄂尔多斯地区酸粥细菌多样性分析及乳酸菌的分离鉴定

以采集自内蒙古鄂尔多斯地区的8个酸粥样品为研究对象,利用Illumina MiSeq高通量测序技术,对样品进行细菌菌群结构及多样性研究,分离鉴定其优势菌株。结果表明:8个样品中的细菌主要来自厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria),乳酸杆菌属(Lactobacillus)和醋酸杆菌属(Acetobacter)为优势菌属。乳酸杆菌属在各样品中占比最高,为42.63%～97.49%。SZ1、SZ2样品与其他样品的菌群结构差异较大,可能与不同采集时间有关。对上述样品中的乳酸菌进行分离纯化,通过生理生化试验结合分子生物学方法,鉴定获得1株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),1株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),2株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和4株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。上述研究结果为酸粥工业化生产提供菌种资源和理论依据。     

乳酸菌分类鉴定方法的研究进展

对目前使用的乳酸菌表型特征鉴定和基因型特征鉴定方法的优缺点进行了综述。依据表型的常规生理生化特征进行乳酸菌的分类鉴定不仅费时,有时甚至难以完成。随着分子生物技术的发展和基因数据库的建立,将分子标记技术、新兴鉴定技术与常规方法结合使用,将使乳酸菌的分类、鉴定更为准确和便捷。     

浆水中细菌多样性分析及乳酸菌的分离鉴定

为研究自然发酵浆水中细菌的多样性并分离可以用于批量生产浆水的乳酸菌菌株,分析从3个不同地方采集的浆水中的细菌多样性,分离和鉴定浆水中对常见食源性致病菌抑菌效果好的优势菌乳酸菌。提取浆水总DNA,采用Mi Seq技术对细菌16S r RNA的V3~V4区进行测序分析,获得浆水中的细菌多样性。结果显示,乳杆菌在3种浆水中为优势菌,3种浆水中的细菌多样性存在差异,TS_taian和XA_changan 2种浆水中的细菌多样性组成比较相近,而XA_yanta则与前面2种浆水差异性比较大,在3种浆水中检测到致腐菌和可能的致病菌(或条件致病菌)。利用改良的MRS培养基从3种浆水中分离获得35株产生溶钙圈的菌株,挑选其中10株对4种常见食源性致病菌抑制效果好的菌株进行16S r RNA测序鉴定,其中8株为植物乳杆菌,2株为鼠李糖乳杆菌,说明该2种菌在浆水中为优势菌,为今后利用此两株菌进行单菌发酵或混合发酵生产浆水提供一定的理论和实践的依据。     

巴东地区鲊广椒细菌多样性分析及乳酸菌分离鉴定

该研究使用高通量测序技术对巴东地区鲊广椒中细菌多样性进行解析,同时使用传统纯培养方法对其蕴含的乳酸菌菌株进行分离鉴定。结果表明,14个鲊广椒样品中细菌隶属于23个门下的304个属,2个平均相对含量>1.0%的门为厚壁菌门（Firmicutes）(96.45%)和变形菌门（Proteobacteria）(2.12%),3个平均相对含量>1.0%的属为乳酸杆菌属（Lactobacillus）(92.22%)、魏斯氏菌属（Weissella）(2.19%)和葡萄球菌属（Staphylococcus）(1.48%)。从14个鲊广椒样品中共分离出58株乳酸菌,其中53株被鉴定为植物乳杆菌（L. plantarum）、消化乳杆菌（L. alimentarius）、戊糖乳杆菌（L. pentosus）、仙人掌乳杆菌（L. senmaizukei）、短乳杆菌（L. brevis）和副干酪乳杆菌（L. paracasei）,5株被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）。L. plantarum和L. alimentarius占分离株总数的51.72%和25.86%。由此可...     

传统发酵蓝莓饮料中乳酸菌的分离鉴定及筛选

从传统发酵蓝莓饮料中分离、筛选出发酵性能优异的乳酸菌,为蓝莓相关产业的深加工提供理论依据。采用Ion S5 XL测序平台对样品中细菌16S rDNA V4区进行高通量测序,发现乳杆菌属(Lactobacillus)为主要发酵菌属,相对丰度为69.1%。通过分离鉴定共得到50株乳酸菌,与16S rDNA数据比对,其中8株菌株与相对丰度排名前十的聚类单元代表序列相似度为100%。进一步根据产酸、耐受性能测试及在发酵蓝莓果汁中生长状态最终筛选得到2株植物乳杆菌,菌株编号为TUST-L4和TUST-L27,适用于乳酸菌发酵蓝莓饮料的开发。     

塔吉克斯坦地区自然发酵牛乳中乳酸菌的分离鉴定及多样性分析

目的:自然发酵牛乳是塔吉克斯坦地区游牧民族日常饮食的重要组成部分,其中蕴含丰富的乳酸菌资源。目前对于该地区自然发酵牛乳中的微生物群落结构和乳酸菌多样性的研究较少。方法:采用纯培养的方法结合宏基因组测序技术对塔吉克斯坦自然发酵牛乳的微生物多样性进行研究。同时,将该地区微生物群落数据集与吉尔吉斯斯坦和摩洛哥的微生物群落数据集进行比较。结果:纯培养结果显示,从7份酸牛乳中共分离92株乳酸菌,其中的优势菌种为德氏乳杆菌;宏基因组16S rRNA基因测序结果显示,德氏乳杆菌相对含量高达82%,是所有样品的优势菌种。3个地区对比分析发现,自然发酵牛乳中微生物群落具有一定的地域差异,塔吉克斯坦和吉尔吉斯斯坦地区菌种组成上较为相似,而摩洛哥与二者差异较大。结论:获得塔吉克斯坦地区自然发酵牛乳的乳酸菌资源和多样性信息,为乳酸菌的开发利用提供了菌株,为自然发酵乳制品中乳酸菌的研究提供了基础数据。     

新疆蒙古族和哈萨克族传统乳制品中乳酸菌多样性的比较

传统发酵乳制品是新疆少数民族不可或缺的一类食品,为了研究同一地区不同民族传统乳制品中乳酸菌种类的差异性,从新疆和布克赛尔县采集了17份哈萨克族酸奶和8份蒙古族酸奶,通过传统培养和16S rDNA基因序列分析方法共分离得到42株乳酸菌,有30株分离自哈萨克族样品,12株分离自蒙古族样品,其中优势菌群均为Pediococcus acidilactici(乳酸片球菌)。除了优势菌群,两种样品中都分离出了Lactobacillus plantarum(植物乳杆菌)和Enterococcus durans(耐久肠球菌)。哈萨克族样品中还分离出了Lactobacillus fermentum(发酵乳杆菌)、Lactobacillus paracasei(类干酪乳杆菌)、Lactobacillus crustorum(面包乳杆菌),而蒙古族样品中分离出了Weissella cibaria(食窦魏斯氏菌)。      

高产EPS乳酸菌株的筛选及在农家干酪中的应用

从16株乳酸菌中筛选出三株高产胞外多糖菌种,分别为嗜热链球菌S7和保加利亚乳杆菌L6及LTM,应用苯酚—硫酸法测定其胞外多糖的产量分别为56.25、51.53、51.48mg/L,产量相对较高且稳定。利用菌株S7、L6和LTM制作农家干酪的研究表明,以感官评定值为主指标,结合农家干酪的含水量、蛋白质含量和硬度进行分析,确定当稀奶油添加量为5.2%、72℃热处理15min、氯化钙添加量为0.01%时,生产的农家干酪品质最佳。