豆壳过氧化物酶的酶学性质研究

豆壳过氧化物酶(Soybean Hull Peroxidase,SHP)是从大豆豆壳分离得到的一类重要的氧化还原酶,试验通过缓冲溶液抽提法提纯豆壳过氧化物酶,采用愈创木酚法测定酶活力。结果表明,豆壳过氧化物酶是一种耐高温、耐酸碱的酶,其酶作用的最适温度为35℃,最适pH值为5.2,对愈创木酚和过氧化氢的表观Km值分别为1.53 mmol/L和0.36 mmol/L。常见化合物对豆壳过氧化物酶活性的影响也不尽相同,Fe3+对酶的抑制作用明显,而Mg2+对酶反应有一定的激活作用。     

储粮主要危害性霉菌过氧化氢酶特性研究

从不同来源的储粮样品中分离了4株灰绿曲霉、3株白曲霉，将培养后菌体破碎得到的粗酶液分别经硫酸铵盐析、SephadexG—200柱层析纯化得到过氧化氢酶．对分离酶的主要特性研究结果表明，这些过氧化氢酶的最适温度均为35℃左右，在水溶液中对热不稳定．酶催化适宜的pH范围为4-9，最适pH均在7．0左右，酶的Km值在33．3-41．7mmol/L范围，金属离子及化合物对酶活力的影响基本相同；1mmol／L浓度的CU^2 、Mg^2 、Fe^2 、Zn^2 对酶活力有激活作用，1mmol/L浓度的巯基乙醇、Fe^3 、Ca^2 对酶活力有抑制作用，1mmol/L的NaN3、Hg^2 可使酶完全失活．该特性研究为酶学方法测定储粮霉菌的应用奠定了基础．     

储粮主要危害性霉菌过氧化氢酶特性研究

从不同来源的储粮样品中分离了4株灰绿曲霉、3株白曲霉,将培养后菌体破碎得到的粗酶液分别经硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析纯化得到过氧化氢酶.对分离酶的主要特性研究结果表明,这些过氧化氢酶的最适温度均为35℃左右,在水溶液中对热不稳定.酶催化适宜的pH范围为4～9,最适pH均在7 0左右,酶的Km值在33.3～41.7mmol/L范围,金属离子及化合物对酶活力的影响基本相同;1mmol/L浓度的Cu2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+对酶活力有激活作用,1mmol/L浓度的巯基乙醇、Fe3+、Ca2+对酶活力有抑制作用,1mmol/L的NaN3、Hg2+可使酶完全失活.该特性研究为酶学方法测定储粮霉菌的应用奠定了基础.     

D—葡萄糖脱氢酶活力测定方法的研究——短小芽孢杆菌在D—核糖生产中的应用

D－核酸发酵液离心洗涤得菌体,采用超声波破碎（在40kW下,工作4s,间歇4s,破碎90次）,制备无细胞抽提液。取无细胞抽提液80μL及100μmol／L葡萄糖、4μmol/LNADP、0．6mmol/LTris－HCl（pH＝6．8）、10μmol/LMnSO4溶液各1mL,在37℃下保温10min,测定A340num的值,对比NADPH标准曲线,测定D－葡萄糖脱氢酶的酶含量。根据测定的时间及酶蛋白的含量,从而确定D－葡萄糖脱氢酶的酶活力的测定方法。     

固载化Co(salen)/固载化漆酶催化氧化4-甲基愈创木酚制备香兰素

以4-甲基愈创木酚为底物(100 mg),固载化Co(salen)-固载化漆酶为催化剂,对制备香兰素的实验条件进行优化,其中主要影响因素有H2O2用量(0. 5～2. 5 m L)、反应pH值(3～11)、反应时间(2～6 h)、催化剂总用量(0. 5～2. 5 mg)、催化剂比例(固载化Co(salen)∶固载化漆酶:1∶1～3∶1)以及亚油酸钠用量(0. 04～0. 20 mg),通过正交实验得到初步反应条件:H2O2用量0. 5 m L,反应时间4 h,pH值9,催化剂总用量2. 0 mg,催化剂比例1∶1,亚油酸钠用量0. 04 mg;同时进一步通过单因素实验优化后得到最佳反应条件为:反应总体积为100 m L时,H2O2用量1. 5 m L,pH=8,反应时间4 h,催化剂总用量2. 5 mg,催化剂比例为1∶2;亚油酸钠用量为0. 07 mg.最后得到结论:固载化Co(salen)-固载化漆酶组合催化4-甲基愈创木酚转化的效果比两者单独催化的效果好;加入亚油酸钠可以提高4-甲基愈创木酚催化转化的效果;在最佳反应条件下,固载化Co(salen)和固载化漆酶催化氧化4-甲基愈创木酚制备得到的香兰素收率可达70%以上.     

利用苯胺检测过氧化物酶活力的方法

以过氧化物酶催化苯胺发生氧化聚合反应，利用分光光度法测定反应液的吸光度，以吸光度的变化速率来表征过氧化物酶活力。确定了苯胺-乙醇溶液的最佳体积分数为11．1％及反应液的最佳吸收波长为415nm。讨论了苯胺的体积分数、H2O2的体积分数、pH、温度对过氧化物酶活力的影响。同时，通过重复实验、方差分析确定了该方法的可靠性。     

海藻酸钠、卡拉胶联合固定化α-淀粉酶特性研究

以海藻酸钠、卡拉胶共混包埋制备固定化α-淀粉酶,并对α-淀粉酶固定化条件和固定化酶性能进行了探讨。研究表明:在海藻酸钠浓度3.0%、卡拉胶浓度1.0%、酶浓度18g/L、氯化钙浓度0.8%条件下,可以获得最佳的固定化效果,固定化酶活力为139.66U/g.min,活力回收率为55.70%;与游离酶相比,制备固定化酶的最适酶促反应pH值由7.0降至6.0,最适酶促反应温度由60℃升至70℃,其作用温度范围、pH值范围均比游离酶范围宽;固定化酶在连续操作5次后仍显示出良好的活性,固定化酶的耐热性也显著提高。     

黄孢原毛平革菌产蛋白酶对过氧化物酶的影响

在培养黄孢原毛平革菌产生木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)过程中产生的胞外蛋白酶与LiP和MnP的快速失活有关，该蛋白酶在pH7的条件下酶活很高，其主要作用是促进LiP和MnP的分解，而不是抑制它们的产生，HgCl2是蛋白酶的抑制剂，其抑制机理类似于HgCl2对蛋白酶K(PK)的抑制，添加HgCl2的发酵液能提高过氧化物酶的酶活和稳定性，最佳添加量为1μmol／L，最佳添加时间在接种后第5天。     

酶解大豆粉蛋白条件优化研究

从底物浓度、pH值、酶解温度、加酶量、酶解促进剂和酶解时间等方面研究了碱性蛋白酶Alcalase和木瓜蛋白酶复合对全脂大豆粉酶解的影响,并运用单因素和正交试验设计优化酶解条件.结果表明,底物体积分数4.5%、pH值8.5、温度60℃、复合酶加酶量（碱性蛋白酶Alcalase与木瓜蛋白酶活力之比为2∶1）2 640 U/g,添加5 mmol/L Mn2＋酶解180 min效果较好,水解度达到17.8%.     

海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养基优化及其酶学性质

以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12g/L,琼脂粉质量浓度为3g/L,NaCl质量浓度为45g/L,在该条件下酶活力达到7.689U/g。其粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7,在pH范围为6~8的内酶活性较稳定,温度在20~40℃时酶的稳定性较好,但温度达到80℃基本失活。     

反胶束中枯草杆菌中性蛋白酶的活力研究

系统地研究了枯草杆菌AS1 398中性蛋白酶在AOT/异辛烷反胶束体系中的催化行为 ,研究底物浓度、表面活性剂浓度、水含量、pH值、温度、盐的浓度及种类对酶活力的影响 .结果表明 :酶在反胶束体系中表现出“超活性” ,且作用于胶束膜 .在AOT/异辛烷浓度为 0 0 8g/mL时 ,影响酶活力大小主次因素为 :pH值 >温度 >盐浓度W0 .最佳酶活力条件 :5 0℃ ,0 2mol/LKCl液 ,pH值 8 0 ,W0 值 1 1 6,此时酶活力为 6 2 6× 1 0 5u/g .     

羊毛过氧化氢酶催化漂白

研究了在酸性条件下以酶为催化剂的羊毛双氧水低温漂白工艺及相关因素。通过测定得出最佳工艺条件为：H2O2用量10mL/L,pH值5．5,时间60min,室温,稳定剂用量8mL/L,酶用量4mL/L,浴比1：20。     

海藻酸裂解酶的发酵条件优化

通过纯化实验,从海带(Laminariajaponica)得到1株具有较高海藻酸酶活力的菌。对其发酵培养,测定发酵液的酶活力,得出海藻酸酶发酵获得最大酶活力的条件:pH7.5左右,25℃,褐藻酸钠添加量为0.5%,蛋白胨作为主要氮源时,连续培养144h。     

菠萝蛋白酶提取的初步研究

用传统方法和新型方法提取菠萝酶,通过Folin 酶试剂法对所得的酶样的蛋白含量进行测定,分别为18mg/g和21.5mg/g;以酪蛋白为底物测定了酶样的活力为3.29×106U/g和3.33×106U/g;酶的最适的pH值为7.4,温度为45℃.酶活力影响因素中EDTA对保护菠萝蛋白酶有突出的影响.     

海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究.结果表明,最佳提取条件为:pH6.0的磷酸盐浸提液0.05 mol/L,NaCl浓度为0.05 mol/L,缓冲液体积与海参肠质量之比为4∶1,硫酸铵饱和度为80%;该酶最适反应条件为:温度40℃,pH6.0;该酶在10~40℃,pH5.0~6.5酶活力稳定.Mn2+对酶具有一定的激活作用,Cu2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+、Ba2+、K+、Ag+对酶存在不同程度的抑制,其中Cu2+对酶的抑制作用最强.     

米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

对米曲霉 HDF-7 所产蛋白酶进行分离纯化,经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋白酶,经SDS-PAGE 电泳测定其相对分子质量约为30 KDa.该酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH值为7.0,该酶在20℃时具有良好的热稳定性,在pH6.0～8.0的条件下酶是相对稳定的,Mn2+对该蛋白酶有明显的激活作用,Cu2+对该蛋白酶有强烈的抑制作用,Km值为78μg/mL,最大反应速度V max为6.29μg/min.     

海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究．结果表明，最佳提取条件为：pH6．0的磷酸盐浸提液0．05mol／L，NaCl浓度为0．05mol／L，缓冲液体积与海参肠质量之比为4：1，硫酸铵饱和度为80％；该酶最适反应条件为：温度40℃，pH6．0；该酶在10-40℃，pH5．O～6．5酶活力稳定．Mn^2＋对酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Cd^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Bd^2＋、K^＋、Ag^＋对酶存在不同程度的抑制，其中Cu^2＋对酶的抑制作用最强．     

海藻酸裂解酶的发酵条件优化

通过纯化实验，从海带(Laminaria japoIlica)得到1株具有较高海藻酸酶活力的菌。对其发酵培养，测定发酵液的酶活力，得出海藻酸酶发酵获得最大酶活力的条件：pH7．5左右，25℃，褐藻酸钠添加量为0．5％，蛋白胨作为主要氮源时，连续培养144h。     

空气消毒剂过氧乙酸含量的酶催化光度法测定

过氧乙酸(PAcA)室内作消毒剂时,在空气中的含量很低,用通常的化学分析方法很难检测到.通过用过氧乙酸以喷雾法和熏蒸法进行空气消毒,用气体吸收管现场采样,以酶催化分光光度法测定室内环境中的微量过氧乙酸消毒剂的含量.实验证明:PAcA在辣根过氧化物酶(HRP)催化作用下,当磷酸盐缓冲液存在时能和苯酚、4-氨基安替比林发生Trinder反应.与过氧化氢的酶催化分光光度法相似,35℃生成的醌式染料30 min显色完全,在505nm处有最大吸收,对应该波长的吸光系数为12.72L/(mmol·cm),测量过氧化物的工作曲线的线性回归方程为A=0.003 8 12.72 c(μmol·L-1),线性相关系数ρ＞0.99,溶液组分(PAcA H2O2)的检出浓度为3.09μmol·L-1,对应25 mL过氧化物检出限为7.73 nmol,过氧乙酸的检出限为0.235μg,发展了一种过氧乙酸痕量分析的简便、准确和灵敏的酶促反应显色方法.     

响应面法优化磁性固定化纤维素酶的制备

以磁性固定化纤维素酶的酶活力为响应值,应用响应面分析法（Response Surface Methodology,RSM）对制备磁性固定化纤维素酶的主要工艺参数（固定化时间、pH值、离子浓度和酶用量）进行了优化,并且采用二次回归方程拟合了4种因素和酶活力之间的数学模型,决定系数（R2）为0.9024,失拟性分析表明,无失拟因素存在.数学模型得出的最优工艺参数为：固定化时间11.98 h、pH值5.2、离子浓度0.066 moL·L^-1和酶用量202.7 mL,最优条件下得到的最大酶活力为28.45744 IU·g^-1.