里氏木霉91－3纤维素酶产生条件的研究

里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）Ａ＿３经亚硝基胍和紫外线复合处理，获得一株纤维素酶高产菌株９１－３。该菌株在最适固态发酵条件下，纤维素酶滤纸酶活力为１７０ｕ／ｇ曲，产酶水平是出发菌株的１．６倍。酶作用的最适条件为ｐＨ４．８，５０℃；ｐＨ稳定范围为３～７；９０℃处理７ｍｉｎ，酶活保存率为９１．６４％；室温放置半年，酶活保存率在９０％以上，室温放置一年，酶活保存率在８０％以上。     

黑曲霉固态培养生产纤维素酶的研究

黑曲霉突变株ＤＭ－１是一株产纤维素酶菌株，其中β葡萄糖苷酶活性特别高。采用粗纤维原料固体培养，发酵９６小时（培养温度３１℃），其滤纸酶活和β葡萄糖苷酶活分别为９５和１２００ｍｇ葡萄糖／ｇＤＭｈ。本试验系统研究了各种营养成份和培养条件对ＤＭ－１菌株产纤维素酶的影响。最适发酵培养基为：稻草杆（或麦杆）∶麦麸为６０∶４０、硫酸铵３．０、硫酸镁０．３、玉米浆３．０，加水２００％，自然ｐＨ；环境湿度８５％－９０％。酶反应最适温度和ｐＨ分别为５５℃－６０℃和ｐＨ５．０。酶ｐＨ稳定性较好，在ｐＨ３．０－８．０范围内处理１小时，残余酶活力在８５％以上，该酶经５５℃处理３０ｍｉｎ，剩余酶活力为８６．０％。     

耐热性纤维素酶的研究及在酒精生产中的应用

耐热性纤维素酶的生产、性质及在酒精生产中的初步应用，采用粗纤维原料固体培养，最佳培养条件为：温度为３０℃，自然ｐＨ。酶作用的最适ｐＨ为４．６，稳定性较好，反应最适温度为５５℃～６０℃，该酶经６０℃处理９０ｍｉｎ，剩余酶活力达８０％以上。最适发酵培养基为：玉米芯∶麸皮＝２∶４，加水比是１∶１．５，发酵周期为４天左右。在此条件下，其滤纸酶活为２８４．９ｕ／ｇ。纤维素酶应用于以瓜干为原料的酒精生产，在其最适使用工艺条件下，原料出酒率达３５．３６２３％，比对照提高１．２６％。     

里氏木霉固体发酵生产纤维素酶的研究

以里氏木霉突变株ＲＭ－２７为纤维素酶生产菌，采用固体发酵法，２９℃发酵１４４小时，其滤纸酶活和β－葡萄糖苷酶活分别为６００ｍｇ和１１５ｍｇ葡萄糖／ｇＤＭｈ。并系统研究了各种营养成份和培养条件对ＲＭ－２７菌株产纤维素酶的影响。最适发酵培养基为稻草杆或小麦杆７０ｇ、麸皮３０ｇ、硫酸铵３．０ｇ、玉米浆２．０ｇ，水２００ｍｌ，自然ｐＨ。酶反应最适温度６０￣６５℃，最适ｐＨ为５．０。酶ｐＨ稳定性较好，在ｐＨ     

雪菜中芥子苷酶解特性的研究

借助于硫脲紫外分光光度法，对雪菜中的芥子苷的酶解性质进行了研究。经检测，实验用雪菜中芥子苷含量为０．０７％。单因素实验显示，芥子酶的最适ｐＨ６．０～７．０，最适温度７０℃，Ｖｃ对芥子酶有明显的激活作用，而０．５％ＮａＣｌ对芥子酶有显著的抑制作用。正交试验表明，ｐＨ是影响芥子酶活的高度显著性因素，ＮａＣｌ浓度为显著性因素。ＲＳＡ优化试验得出，在室温２０℃下２０％雪菜汁中芥子苷酶解的最佳条件为：ｐＨ６．５６，ＮａＣｌ浓度３．４７％，冷冻干燥芥子酶粗酶粉添加量５．３７ｍｇ（５ｍｌ２０％雪菜汁中），反应１ｈ，最大酶活可达７．６７ｕ。研究结果可供腌制雪菜加工参考使用。     

酶法处理对花生水剂法制油的影响

在花生水剂法制油工艺中利用以纤维素酶为主体包含果胶酶的复合酶系处理碾磨后的油料能显著提高花生油收率及花生蛋白得率，经研究得出酶处理的最适参数范围如下：加酶量０．２％～０．３％，酶反应时间４ｈ，ｐＨ６～７，温度４０～５０℃。     

壳聚糖涂层法固定化脂肪酶的研究

研究了壳聚糖涂层在纤维素滤纸上成膜后再固定化猪胰脂肪酶的最佳条件。结果表明,当戊二醛浓度为５％,活化１２ｈ,与ｐＨ７．６的酶的磷酸盐缓冲溶液于室温（１５℃）交联１２ｈ,获得的固定化酶活最高,为０．２６Ｕ／ｃｍ２。固定化酶最适温度４０℃,比游离酶提高了５℃;最适ｐＨ８．５,与游离酶相比,向碱性偏移了０．５个ｐＨ     

酶法处理对花生水剂法制油的影响

在花生水剂法制油工艺中,利用以纤维素酶为主体包含果胶酶的复合酶系处理碾磨后的油料能显著提高花生油收率及花生蛋白得率。经研究得出酶处理的最适参数范围如下：加酶量０ ．２ ％ ～０ ．３ ％ ,酶反应时间４ｈ ,ｐＨ６ ～７ ,温度４０ ～５０ ℃。     

绍兴腐乳毛坯中蛋白酶的检测

１．７５％ＮａＣｌ溶液可有效抽提林木毛霉菌丝体表面的蛋白酶，依此确立了腐乳毛坯中蛋白酶的检测法。该酶系在４０％以下２ｈ酶活稳定不变，６０℃ｌｈ能保持５８％活力；其最适作用温度和ｐＨ分别为５５～６０℃和６～７ｐＨ；ｐＨ稳定范围为４～７；ＮａＣｌ和ＣＨ＿３ＣＨ＿２ＯＨ对酶系有明显的保护作用。讨论了蛋白酶检测及其性质对腐乳工艺改进的指导意义。     

乌骨鸡肉酶解的条件的研究

本文阐述了研究Ｓｓ１．３９８中性蛋白酶对乌骨鸡肉的水解条件。结果表明，乌骨鸡肉经９０℃，１０ｍｉｎ加热处理，可促进酶解，酶解最适条件为：ｐＨ＝７．５，温度４０℃，酶与底物浓度之比为８０００ｕ／ｇ，底物浓度１０％，时间１０ｈｒ。     

白酒糟纤维素降解菌的分离筛选及发酵条件优化

该试验将松针腐殖土样品在酒糟富集培养基中富集,采用刚果红染色和滤纸崩解初筛,3,5-二硝基水杨酸（DNS）法复筛筛选高酶活的纤维素降解菌,对其进行分子生物学鉴定,并对其产酶条件进行优化,结果表明,筛选得到一株高酶活的纤维素降解菌M5,经ITS rDNA序列分析鉴定为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）。其在发酵温度20 ℃、初始pH值为3、酒糟为碳源、牛肉膏为氮源,发酵5 d时羧甲基纤维素（CMC）酶活为9.17 U/mL,滤纸酶活为3.50 U/mL;菌株M5所产的纤维素酶的最适反应温度为55 ℃。     

以水稻秸秆为基质里氏木霉产酶条件优化

以里氏木霉(Trichoderma reesei)为研究对象,对水稻秸秆进行糖化试验。通过单因素试验及响应面法优化里氏木霉产酶培养基及产酶条件。结果表明,里氏木霉产酶最佳培养基为：水稻秸秆15.0 g/L、(NH₄)₂SO₄ 2.0 g/L、KH₂PO₄ 3.0 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L、吐温-80 0.5 mL/L、微量元素液10.0 mL/L、FeSO₄·7H₂O 0.005 g/L。此优化条件下,菌株的滤纸酶酶活为0.612 PFU/mL,提高了52.6%。最佳发酵条件为：发酵温度29℃,初始pH 6、接种量5.0%、转速150 r/min、发酵时间8 d。在此优化条件下,滤纸酶酶活为1.12 PFU/mL,提高了83.2%。     

乳酸克鲁维酵母常温常压等离子体诱变选育及其突变株整细胞催化特性

采用常温常压等离子体（ARTP）诱变方法,以耐20 g/L的苯乙酮毒性和酮基还原酶酶活作为筛选标记,对乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）进行选育,得到酮基还原酶酶活2.72 U/mL的突变菌株KL5,并研究了该菌株在不同碳源、氮源中的生长特性及对底物苯乙酮转化能力。结果表明,蔗糖、酵母浸粉分别是突变株的最佳碳源和氮源;在一次添加苯乙酮20 g/L底物,蔗糖22.0 g/L,酵母浸粉10.0 g/L,磷酸二氢钾3.0 g/L,七水合硫酸镁1 g/L的催化条件下,28 ℃、200 r/min转化48 h,诱变菌株KL5对苯乙酮转化率可达到91.8%,比出发菌株提高2.5倍。该菌株具有广阔的生物催化应用前景。     

黑曲霉突变菌株产糖化酶的酶学特性表征

以电子束诱变黑曲霉突变菌株为对象,通过最适pH试验、最适作用温度试验、热稳定性试验、酸碱稳定性试验和金属离子对糖化酶活力影响的试验,探明黑曲霉电子束突变菌株产糖化酶的酶学特性。结果表明:突变菌株产糖化酶酶最适作用温度为63℃,且最高酶活较原始菌株提高26%,在80℃原始菌株所产糖化酶失活时,仍有8.4 kU/mL酶活剩余,突变菌株所产的糖化酶的热稳定性明显提高。突变菌株所产糖化酶最适pH为4.6,且最高酶活较原始菌株提高24%,在原始菌株所产糖化酶失活时仍有6.9 kU/mL酶活剩余,突变菌株糖化酶的pH稳定性有着明显提高。K+、Mg2+、Ca2+可在一定程度上增强其活力;Ag+、Fe2+、Cu2+则在不同程度上抑制糖化酶活力;Zn2+、EDTA对其酶活力影响较小或无明显现象。     

高糖化力白曲霉的复合诱变及固态发酵条件优化

采用紫外线及常压室温等离子体（ARTP）复合诱变技术对白曲霉（Aspergillus candidus）Nz 3.602进行诱变选育。对诱变致死率进行测定,确定最佳诱变条件为：15 W紫外灯照射12 min,ARTP处理40 s。对突变菌株进行透明圈法初筛、糖化力测定法复筛,最终得到产酶能力较高的突变菌株B5。其糖化酶酶活为1 050.32 U/g,较出发菌株糖化酶酶活提高85.53%,并且遗传稳定性较好。以菌株B5为研究对象,经单因素试验和响应面分析法对其固态发酵条件进行优化,最佳固态发酵条件为：糠壳添加量15%,原料含水量70%,接种量12%,培养时间5 d,培养温度30 ℃。该条件下糖化酶酶活为（1 254.17±6.14） U/g,比优化前提高了19.41%。     

黑曲霉产纤维素酶混合发酵条件的研究

为选出高产纤维素酶菌株,对不同菌株进行筛选,通过4种纤维素酶活力大小比较单一菌株与混合菌株的产酶能力。利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定各单一菌株及混合菌株的内切葡聚糖酶活、滤纸酶活、外切葡聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活,筛选最优组合,在单因素试验的基础上通过响应面试验确定最佳产酶条件。结果表明,混合菌最佳产酶条件：混合菌株D2∶D2-1=2∶1,发酵时间6 d,接种量6%,发酵温度28 ℃。优化后滤纸酶活力达到156.26 U/mL,较优化前的滤纸酶活（113.96 U/mL）提高了37.1%。     

LiCl-ARTP复合诱变选育高产碱性蛋白酶菌株及其发酵条件优化

以地衣芽孢杆菌（Baclicus lincheniformis）E-417为出发菌株,采用氯化锂（LiCl）-常压室温等离子体（ARTP）复合诱变法对其进行诱变,通过酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛、遗传稳定性验证筛选高产碱性蛋白酶的优良菌株,并通过单因素及响应面试验对其发酵产酶条件进行优化。结果表明,在氯化锂添加量为1.5%、ARTP照射时间为45 s的最适复合诱变条件下筛选得到1株高产碱性蛋白酶的优良菌株F-3,酶活达到12 147 U/mL,且该菌株传代8次后仍具有良好的遗传稳定性,其最适发酵培养基成分为玉米粉41 g/L、豆饼粉40 g/L、碳酸钠2.1 g/L、磷酸氢二钠2.0 g/L;最适发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH值7.0、接种量8%。在此优化条件下,碱性蛋白酶酶活达到16 156 U/mL,较原始菌株提高75%。     

产酮基还原酶基因工程菌培养温度和转速条件的优化

考察了27 ℃、30 ℃、33 ℃、37 ℃条件下酮基还原酶基因工程菌生长与产酶的影响。结果发现,37 ℃以下随着温度的升高,菌体产酶活性得到提升和提前,37 ℃条件下10 h最大酶活达到了157.5 U/mL。但是所有温度条件下的发酵后期,酶活都出现了下降,发酵后期转速的下降可能是一个原因。因此对37 ℃下不同恒定转速200 r/min、300 r/min、400 r/min、480 r/min的发酵条件进行了实验。结果发现,转速的恒定对于菌体酶活的积累具有重要意义,恒定转速480 r/min条件下酶活逐渐升高,20 h的酶活为217.1 U/mL。此研究确定了酮基还原酶基因工程菌发酵产酶的最佳温度和转速,并对酮基还原酶进一步的补料分批发酵优化具有指导意义。     

一株椰糠纤维降解菌的分离、鉴定及特性研究

以椰糠作为碳源,从红树林土壤中分离了一株高产纤维素酶的真菌,命名为DZ10。经形态、生理生化和分子生物学试验,鉴定菌株DZ10为长枝木霉菌（Trichoderma longibrachiatum）。该菌在pH值为6.5、培养温度为35 ℃、初始NaCl含量为2.0%、添加K+终浓度为0.1 mmol/L条件下,椰糠降解率最高为39.88%;在pH值为6.5、培养温度40 ℃、初始NaCl含量3.0%、添加K+终浓度为0.1 mmol/L条件下,羧甲基纤维素酶活力（CMCA）最高值为80.07 U/mL;在pH值为6.0、培养温度35 ℃、初始NaCl含量1.5%、添加K+终浓度为0.1 mmol/L条件下,滤纸酶活力（FPA）最高值为73.81 U/mL。Ca2+、K+对菌株DZ10产酶和椰糠降解率有促进作用,Mg2+抑制菌株DZ10产酶和椰糠降解率。     

紫外-亚硝酸钠复合诱变高产纤维素酶菌株

为得到高产纤维素酶的菌株,改善菌种产纤维素酶的能力,该研究以贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）为原始菌株,以纤维素酶酶活为考察指标,通过单因素和正交试验优化复合诱变条件。结果表明,最优复合诱变条件为紫外（UV）处理150 s、0.25 mol/L亚硝酸钠（NaNO2）在诱变温度23 ℃下诱变处理23 min。在此优化复合诱变条件下,突变株UN-5纤维素酶酶活为101.48 U/mL,比原始菌株的酶活提高了205.8%。经10代传代,纤维素酶酶活仍有100.5 U/mL,说明该突变株产纤维素酶能力强且遗传性状稳定。