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1.
目的制备抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体,为ELISA检测方法的建立奠定基础。方法将Ⅰ型脊髓灰质炎减毒疫苗原液和灭活疫苗原液经超滤、超离纯化,以纯化的减毒脊髓灰质炎病毒D抗原免疫BALB/c小鼠,得到的脾细胞与SP2/0-A14小鼠骨髓瘤细胞融合,以纯化的灭活脊髓灰质炎病毒D抗原建立间接ELISA法,筛选分泌特异性单抗的阳性细胞株,诱生小鼠腹水,通过正辛酸-硫酸铵法纯化抗体,并进行各项鉴定。结果获得两株稳定分泌抗脊髓灰质炎病毒单抗的细胞株7G5及5E4。纯化的7G5和5E4株单抗分别可与脊髓灰质炎病毒D抗原的VP2、VP3衣壳蛋白结合;在不同温度下放置均比较稳定;pH4不利于7G5株单抗的保存;5E4株单抗的相对亲和力大于7G5株;7G5株单抗的亚类为IgM,5E4株单抗的亚类为IgG2a;两株单抗可识别相似表位;7G5株和5E4株单抗的中和效价分别为1:64和1:128。结论已成功制备了两株分泌抗脊髓灰质炎病毒的单抗。 相似文献
2.
目的 制备具有中和活性抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体 ,并以ELISA结合免疫组化技术进行筛选。结果 获得 8株分泌抗呼吸道合胞病毒的特异性单克隆抗体的细胞株 ,其中 2株分泌的单抗具有中和活性 ,效价 1∶16 0和 1∶32 0。结论 成功制备出具有中和活性的呼吸道合胞病毒的单抗 相似文献
3.
用精被类(TT)免疫的BALB/c小鼠牌细胞与小鼠骨髓癌SP2/O细胞融合,获得4株能分泌中和破伤风毒素的单克隆抗体细胞株.所分泌的单抗能识别不同的抗原表位。一种单抗在小鼠体内可中和0.1~0.4IU/ml破伤风毒素,2种、3种和4种单抗混和后分别可中和20、350和750IU/ml。 相似文献
4.
目的研究pH值对重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体NM57稳定性的影响。方法将NM57原液的pH值分别调节为4.0、5.0、6.0、7.0和8.0,分别置于4和40℃保存,于0、2、4、6周取样,观察其外观的变化,并检测其SDS-PAGE及SEC-HPLC纯度。中试规模制备NM57制剂(200IU/ml,pH6.0),4℃放置3、6、9、12、18和24个月,取样观察其外观的变化,SEC-HPLC检测样品纯度,快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测样品中和活性。结果在观察期内,所有样品的外观均保持澄清透明。不同pH值的NM57原液4℃放置6周,纯度无明显变化;40℃放置的不同pH值的NM57原液样品纯度变化有明显差异,NM57(5.0)和NM57(6.0)样品相对稳定。中试规模制备的6批NM57制剂4℃放置24个月,其纯度及中和活性均保持稳定。结论NM57原液在甘氨酸-组氨酸缓冲系统中,pH6.0条件下比较稳定,NM57(pH6.0)制剂长期稳定性良好。 相似文献
5.
含脊髓灰质炎病毒1型(简称 PV1)全基因7.4Kb cDNA 和编码 PV1外壳蛋白 VP12.5Kb 的 cDNA 片段的两株重组痘苗病毒(RV-1和 RV-2)表达了 PV1抗原。经荧光标记的抗 PV1型特异性单克隆抗体检测,感染了 RV-1和 RV-2的 Herp-2细胞呈阳性荧光反应。免疫印迹实验证实两株重组痘苗病毒分别表达 PV1抗原三条和两条特异性蛋白带。免疫家兔后能诱导产生抗 PV1中和抗体。本文对重组病毒表达 PV1抗原的效率进行了初步讨论。 相似文献
6.
脊髓灰质炎疫苗接种策略引发了全球根除脊髓灰质炎进程的转折。从口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)转向灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV),前者可能导致疫苗衍生的脊髓灰质炎病毒循环和恢复毒力。目前使用的所有疫苗均来源于脊髓灰质炎病毒培养,Salk IPV还涉及野生型病毒。通过重组技术产生空的病毒衣壳,可以实现不使用病毒生产疫苗的目标,但迄今为止这样的病毒样颗粒(VLP)非常不稳定。本文对脊髓灰质炎病毒的生物学特性、脊髓灰质炎疫苗的发展现状及研究进展进行概述。 相似文献
7.
《中国生物制品学杂志》2016,(10)
目的评价不同形式的脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)颗粒的免疫原性。方法采用蔗糖密度梯度超速离心法分别将经56℃加热1.5 h处理和未经加热的PV进行分离纯化,收集相应组分,进行电镜观察及SDS-PAGE分析,并测定各组分的D抗原及蛋白含量。用不同PV颗粒组分分别免疫大鼠,均经腿部肌肉注射,共接种3次,每次间隔21 d,于免疫前和第1、2次免疫后21 d经眼眶采血,末次免疫后21 d经心脏穿刺采血,分离血清,微量细胞病变(CPE)抑制法检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV中和抗体几何平均滴度(GMT)。结果未经加热处理的PV可分离获得EP(蔗糖浓度16%~19%)和FP(蔗糖浓度22%~24.5%)两种病毒颗粒,电镜观察分别为空心颗粒和实心颗粒,EP经SDS-PAGE分析可见VP0、VP1和VP3病毒蛋白条带,FP可见VP1、VP2、VP3和VP4条带;经56℃加热处理的PV可分离获得HP(蔗糖浓度15%~17%)一种病毒颗粒,电镜观察为空心颗粒,SDS-PAGE分析可见VP0、VP1、VP2、VP3病毒蛋白条带。EP、FP免疫大鼠后,均可诱导产生针对PV的中和抗体,但EP诱导产生的中和抗体GMT低于FP;HP不能诱导产生中和抗体。结论未经加热的PV可分离获得EP和FP两种病毒颗粒,均具有免疫原性;经加热处理的PV仅分离获得HP一种病毒颗粒,不具有免疫原性。 相似文献
8.
目的筛选脊髓灰质炎病毒冻干保护剂。方法将不同配方的冻干保护剂与脊髓灰质炎病毒(SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型)混合,进行冻干,并检测冻干前后病毒感染性滴度及冻干后的热稳定性。结果经检测发现,第Ⅷ组配方(海藻糖8%、人白蛋白1%、山梨醇5%、明胶0·5%和甘氨酸1%)在脊髓灰质炎病毒的冻干过程中保护作用较好。冻干前后感染性滴度下降在0·5LgCCID50/ml以内,且热稳定性好,37℃放置1周后SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型病毒的感染性滴度平均下降分别为0·2、0·3和0·4LgCCID50/ml,而相应对照组的感染性滴度平均下降分别为1·1、1·1和1·3LgCCID50/ml,二者差异有显著意义(P<0·05)。结论含有海藻糖、人白蛋白、山梨醇、明胶和甘氨酸的保护剂对脊髓灰质炎病毒冻干具有良好的保护效果。 相似文献
9.
《中国生物制品学杂志》2013,(11)
目的比较不同脊髓灰质炎(简称脊灰)疫苗免疫程序基础免疫后的血清学反应。方法选择广东省中山市居住的无疫苗接种禁忌的健康婴儿,在其2、3、4月龄时各接种1剂脊灰灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine,IPV)或口服脊灰疫苗(oral polio vaccine,OPV),按照接种程序的不同,将观察对象分为全程OPV组(O-O-O)、全程IPV组(II-I)、1剂IPV+2剂OPV组(I-O-O)、2剂IPV+1剂OPV组(I-I-O)。基础免疫完成后1个月时采集静脉血,以微量中和试验测定血清中脊灰病毒中和抗体。结果 3剂疫苗免疫后,除I-O-O组1份血清标本Ⅲ型抗体为阴性外,其余标本均产生了针对3个型别脊灰病毒的中和抗体。与I-I-I组比较,I-O-O组和I-I-O组产生了更高的抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT),除与I-O-O组的Ⅲ型抗体GMT差异无统计学意义(P>0.05)外,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.001);与O-O-O组比较,除I-I-O组的Ⅰ型抗体GMT较低外(P<0.001),I-O-O组和I-I-O组均获得了相近(P>0.05)或更高(P<0.05)的抗体GMT;I-I-O组Ⅰ型中和抗体GMT明显低于I-O-O组(P<0.05),Ⅱ型和Ⅲ型中和抗体GMT高于I-O-O组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IPV/OPV序贯免疫可提供与全程OPV免疫相似或更高的针对脊灰的免疫保护;为减少OPV相关脊灰同时维持高水平的免疫屏障,推荐采用I-I-O序贯程序。 相似文献
10.
为了对治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体3批中试产品进行全面的质量分析,我们参照国家药品监督管理局颁布的《人用鼠源性单克隆抗体制造及检定规程》进行检定。结果所有指标均合格,其中单抗纯度>95%,单抗体单体纯度>95%,残余骨髓瘤细胞(SP2/0)DNA含量<100pg/剂量,采用微量细胞培养中和试验检测抗体中和效价>1:12800~1:25600,无菌试验、异常毒性试验、鼠源性病毒检测、支原体检测、热原质试验均合格。在自检合格的基础上,送中国药品生物制品检定所检定合格。表明所制备的抗HFRS病毒单克… 相似文献
11.
残余牛血清蛋白含量检测试剂盒的制备和应用 总被引:3,自引:1,他引:3
所制备的残余牛血清蛋白含量检测试剂盒,经试验表明具有较好的敏感性、特异性、稳定性和重复性。可检出疫苗中ng/ml含量的牛血清蛋白。该试剂盒使用简便、快速,现已广泛应用于有关生物制品中牛血清蛋白残余量的检测。 相似文献
12.
目的研制稳定性特异性更好的妊娠诊断制剂。方法应用抗HCG-β亚基C末端多肽抗体,以双 功能试剂连接到羧化苯乙烯乳胶上。结果制成的妊娠诊断试剂较目前通用的HCG乳胶试剂灵敏度高,为1.5IU/ ml。稳定性好,在室温放置3个月,其灵敏度未下降。用本试剂检测160份妊娠尿和150份正常尿,结果准确率为 95%。结论本试剂所用方法优于通常应用的妊娠诊断方法。 相似文献
13.
应用新研制的淋球菌培养基(WGC)与意大利GC(IGC)和MTM培养基对照进行淋球菌生长试验,其敏感性基本一致。用已知菌株对氧化酶试纸和奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒进行检定,亦呈现正确反应。应用WGC与IGC培养基培养9o3例临床标本,培养物经革兰氏染色和氧化酶试纸作初步检定,IGC卜淋球菌阳性402例,WGC上同时田位400例,两者符合率为99.5%,WGC上400例中,有366例用快速糖试验作证实试验,确诊为淋球菌者有364例,两者符合率为99.45%。 相似文献
14.
目的制备甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,并进行验证。方法采用磁珠法从甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品中提取病毒RNA,逆转录合成cDNA。根据NCBI最新公布的大流行甲型H1N1流感病毒(2009)基因序列,设计针对编码基质蛋白M基因的引物和探针,检测甲型流感病毒;设计针对血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因特异性的引物和探针,检测甲型H1N1流感病毒;同时针对人的RNaseP基因设计用于内部控制的引物和探针。所有探针均为Taqman探针,5'端标记FAM,3'端标记BHQ1。对最佳荧光PCR反应条件进行优化,在此基础上组装成甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,对其特异性、灵敏度、精密性和稳定性进行验证。与市售试剂盒的检测结果进行对比,并对63份临床甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品进行检测。结果设计的PCR引物及探针能对甲型H1N1流感病毒进行准确检测,与流感病毒的其他型和亚型无交叉反应;试剂盒的灵敏度为0.004个血凝素单位;试验内变异系数小于2.5%,批间变异系数小于5%;试剂盒放置-20℃保存,稳定性良好;检测20份甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品的结果与市售试剂盒一致;检测63份流感疑似患者咽拭子样品,其中大流行甲型H1N1流感病毒阳性36份,普通甲型流感病毒阳性5份。结论所制备的甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒具有较高的灵敏度、特异性、精密性和稳定性,可用于目前流行的甲型H1N1流感病毒的快速检测。 相似文献
15.
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目的制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证。方法采用2株不同结合位点的抗hPRL单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证。结果试剂盒最佳定量范围在5~100ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.9999,灵敏度为0.49ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%。试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1500ng/ml。与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.9537和0.9486。结论已成功制备灵敏、特异的hPRLCLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测。 相似文献
17.
应用乙脑病毒感染BHK21细胞制备抗原,建立检测乙脑特异性IgM、IgG的诊断试剂盒,以ELISA捕捉法检测了107份临床疑似乙脑的患者血清,IgM阳性率为61.7%。该法比血抑法简便、敏感,不需要双份血清,可用于临床早期诊断。应用抗体夹心法检测了21份患者血清,IgG阳性率为61.9%,与ELISA捕捉法检测的符合率达100%。抗体夹心法与ELISA捕捉法可联合用于回顾性临床诊断和大规模流行病学调查。 相似文献
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目的评价人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)pp65 IgG-亲和力指数(Avidity index,AI)快速诊断试剂的临床应用价值。方法以自制的截短pp65重组蛋白作为诊断试剂,对本室血清库中保存的标本,采用ELISA间接法检测其特异性IgG抗体,分析该试剂的灵敏度、特异性和准确度。检测临床收集的89份患者血清标本(其中5例被明确诊断为HCMV活动性感染)的pp65 IgG抗体,并与意大利DIESSE公司IgG检测试剂盒结果进行比较。同时,对pp65 IgG阳性标本,运用尿素变性ELISA间接法检测其AI值,与意大利DIESSE公司IgM检测试剂盒结果进行比较,评价AI检测在HCMV感染诊断中的价值。结果用pp65快速诊断试剂检测阳性、阴性血清特异性IgG抗体,均与原确认结果相同,灵敏度、准确度和特异性均达100%。两种诊断试剂IgG抗体检测结果,差异无显著意义。pp65诊断试剂对pp65 IgG阳性标本的AI值进行检测,AI<60%标本共41份,阳性率为46.07%,较参比试剂IgM检测阳性率(23.59%)高;5份明确诊断HCMV活动性感染的患者血清标本中,pp65诊断试剂与参比试剂检测IgG抗体,各有4份阳性,一致率为100%,pp65诊断试剂检测AI值为阳性的标本有3份,其中,参比试剂检测IgM为阳性的仅有1份。临床明确诊断为HCMV肺炎的患者血清标本,诊断试剂检测AI值为可疑阳性,但参比试剂检测HCMV IgM抗体为阴性。结论pp65 IgG-AI快速诊断试剂可初步诊断HCMV感染,简单快速,重复性好,具有良好的临床应用前景。 相似文献
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目的应用IU标准对HBsAg检测试剂进行比较分析。方法筛选1份HBsAg阳性血浆,血清学检测证实为HBsAg adr亚型,参照WHO HBsAg标准品稀释方法进行稀释,以IU为单位的HBsAg国际标准品为标准,应用双平行线终点稀释方法对该样品进行定量标定。以标定的IU为单位样品,对国内外13家HBsAg检测试剂进行检测。结果待标定的样品经平行稀释后,测定的浓度值与理论浓度值误差均在11%以内,应用IU标准对国内外HBsAg检测试剂进行检测,国外试剂的最低检出限可达0.02~0.06IU/ml,国产试剂除1家可达0.14IU/ml外,其余试剂均在0.29~0.91IU/ml之间。结论应用IU标准检测HBsAg检测试剂,国外试剂的灵敏度明显高于国内试剂。 相似文献
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防腐蚀涂料涂装在现场的质量控制与实验室的性能测试有较大区别,介绍了现场涂装中针对不同的质量控制要求和相应的检测仪器的使用方法。 相似文献