茶多酚二甲基亚砜合剂对卷烟烟气遗传毒性的防护作用

目的 研究卷烟烟气所致人支气管上皮细胞DNA损伤以及茶多酚二甲基亚砜合剂的保护作用, 为卷烟烟气对机体损伤的防护提供理论及实验依据。方法 将细胞分为5组: 空白组、卷烟烟气组、茶多酚保护组、二甲基亚砜保护组、茶多酚二甲基亚砜合剂保护组; 通过检测微核和多核细胞观察染色体损伤, 彗星实验及H2AX蛋白磷酸化检测DNA的损伤, 多核细胞法检测细胞HPRT突变。结果 BEAS-2B细胞经卷烟烟气染毒后, 细胞的微核率、多核率、拖尾率升高, H2AX蛋白磷酸化表达增高, HPRT突变率增高, 差异均有统计学意义(P<0.05), 茶多酚保护组、二甲基亚砜保护组能降低卷烟烟气诱发的DNA损伤, 合剂保护组的防护作用最好。结论 卷烟烟气对BEAS-2B细胞DNA具有损伤作用, 茶多酚二甲基亚砜合剂有较强防护作用。      

木犀草素肝保护作用的研究

本文研究木犀草素的肝保护作用。以人肝癌细胞Hep G2为模型,以H_2O_2为氧化损伤来源,分为5个实验组包括空白组、损伤组、低浓度木犀草素保护组(0.5μM+300μM H_2O_2)、中浓度木犀草素保护组(5μM+300μM H_2O_2)和高浓度木犀草素保护组(10μM+300μM H_2O_2)测定细胞活力、活性氧(ROS)增长率、LDH、SOD和CAT酶活,测定细胞周期及细胞凋亡。经过10μM木犀草素保护,细胞活力提高到84%左右,ROS的增长率与空白组无显著性差异(p0.05),LDH、SOD和CAT酶活力显著低于损伤组(p0.05);流式细胞仪观察到随着木犀草素浓度增加,细胞的凋亡率减少并呈量效关系,而加药组的细胞周期与损伤组并无显著性差异(p0.05)。木犀草素具有很好的肝保护能力,在食品、保健品和化妆品行业中具有潜在的应用价值。     

HPLC测定半枝莲中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量

建立半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量同时测定的HPLC方法。色谱条件为DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,检测波长为335 nm,流动相为乙腈(A)-1%冰醋酸水溶液(B)进行梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃。野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素浓度分别在2.0~200、0.5~50、0.5~50、0.5~50μg/m L范围内与峰面积积分值线性关系良好。在精密度实验、稳定性实验、重复性实验中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素峰面积的相对标准偏差(RSD)2.0%;野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的加样回收率范围及平均值和RSD分别为97.73%~101.7%、99.72%、1.36%(n=9),97.78%~102.8%、99.53%、1.99%(n=9),97.40%~102.4%、99.39%、1.84%(n=9)和97.80%~102.0%、99.24%、1.49%(n=9)。所测12份不同产地半枝莲药材中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量范围分别为2.41~7.08、0.26~0.56、0.31~0.90、0.28~0.95 mg/g。本方法具有良好的专属性和重现性,加样回收率实验符合要求,能准确、稳定地对半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量进行同时定量测定。     

番茄红素对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用研究

目的:探讨番茄红素(Lycopene)对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:采用鱼藤酮诱导PC12细胞损伤模型,给予番茄红素预处理后,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态,测定细胞培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)释放量;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化;比色法测定细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC);DCFH-DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平。结果:番茄红素能明显提高鱼藤酮损伤PC12细胞存活率(p<0.05),恢复细胞增殖;明显减轻了细胞损伤的形态的改变,降低LDH的释放、MDA和ROS含量(p<0.05),提高PC12细胞内SOD活性、GSH含量、T-AOC能力(p<0.05)。结论:番茄红素拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与抗氧化,清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关。     

小麦低聚肽对H2O2所致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

分析小麦低聚肽氨基酸组成和相对分子质量分布,并对其保护过氧化氢所致人肝癌细胞(HepG2)氧化损伤的作用进行了研究。首先采用不同浓度小麦低聚肽作用HepG2细胞4 h,然后用150μmol/L过氧化氢氧化损伤细胞4 h,以细胞存活率、细胞内活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)含量评价小麦低聚肽对HepG2细胞的保护作用。结果表明,小麦低聚肽相对分子质量小于1 000的组分高达93.44%,谷氨酸及脯氨酸含量较高;小麦低聚肽具有增加细胞存活率、抑制细胞内ROS生成、降低细胞内MDA含量的活性,对减少HepG2细胞的氧化应激及提高细胞抗氧化能力具有较好的作用效果。本研究从细胞水平上揭示了小麦低聚肽对过氧化氢所致的肝脏损伤具有一定的预防保护作用。     

泰和乌骨鸡活性肽对5-氟尿嘧啶诱导HSF细胞损伤的保护作用

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究泰和乌骨鸡活性肽对5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤细胞DNA的保护作用。方法:传代培养人皮肤成纤维细胞(HSF),随机分为正常对照组,5-FU组,5-FU+泰和乌骨鸡活性肽组。应用MTT法检测细胞存活率,单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测5-FU引起HSF细胞DNA损伤程度,羟脯氨酸试剂盒检测细胞培养液中羟脯氨酸含量。结果:与正常对照组比较:5-FU组HSF细胞DNA的损伤程度较严重,且尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量显著增加(p<0.001),细胞培养液中羟脯氨酸含量显著性减少(p<0.05)。与5-FU组比较,泰和乌骨鸡活性肽组细胞的尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量均显著性减少(p<0.001),而细胞培养液上清中羟脯氨酸含量升高(p<0.01)。结论:泰和乌骨鸡活性肽对HSF细胞DNA损伤具有保护作用,泰和乌骨鸡活性肽可以剂量依赖性地降低5-FU诱导的HSF细胞DNA的断裂损伤。     

全烟气对细胞抗氧化能力的影响（网络首发、推荐阅读）

卷烟全烟气暴露V79细胞,选取暴露时长1 h不同浓度（4支烟/h、6支烟/h、8支烟/h）组,以活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、总抗氧化能力（T-AOC）为指标,研究全烟气对细胞抗氧化能力的影响。结果表明,全烟气会对细胞内的抗氧化物质产生消耗和抑制,导致胞内的活性氧自由基含量增加,抑制的效果随烟气浓度的增加而愈加显著。     

鳕鱼鳔胶原肽对H_2O_2诱导2BS细胞早期衰老的保护作用

目的:以人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)为研究对象,探讨鳕鱼鳔胶原肽对H_2O_2诱导2BS细胞早期衰老的保护作用。方法:采用H_2O_2诱导2BS细胞建立早期衰老细胞模型,给药组加入不同浓度的鳕鱼鳔胶原肽,以白藜芦醇作为阳性对照,对细胞的增殖率、ROS活性氧水平、细胞凋亡情况、β-半乳糖苷酶含量及过氧化物酶含量进行检测。结果:与模型组细胞相比,经白藜芦醇与鳕鱼鳔胶原肽处理后的细胞存活率提高,ROS活性氧水平、细胞凋亡率与β-半乳糖苷酶含量降低,SOD与CAT活力提高,MDA含量降低,且鳕鱼鳔胶原肽保护效果与给药剂量呈正相关。结论:鳕鱼鳔胶原肽能够有效缓解H_2O_2诱导所造成的早期衰老,在一定程度上降低氧化损伤。     

韩国产芝麻酱油对AAPH诱发LLC-PK1细胞氧化应激的保护作用

以芝麻酿造酱油乙醇提取物(ethanol extract sesame sauce,SSE)为研究对象,探讨其对1 mmol/L 2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(2,2’-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride,AAPH)引发的LLC-PK1猪肾近曲小管上皮细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:LLC-PK1细胞与不同质量浓度(10~100μg/m L)的SSE预先共同培养24 h后,用含AAPH的DMEM培养液继续培养4 h建立细胞损伤模型。细胞存活率用四甲基偶氮唑蓝法检测,细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和总活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平分别以硫代巴比妥酸比色法和2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠探针法测定。细胞内过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)活力和谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量按试剂盒说明书以比色法测定。结果表明,SSE预处理可以提高受损细胞存活率,降低细胞内总ROS水平和MDA含量。同时,SSE还能提高受损细胞内抗氧化酶(CAT、SOD、GSH-Px)及γ-GCS活力并提高细胞内GSH含量。实时荧光定量聚合酶链式反应分析也提示SSE能上调细胞内抗氧化物酶(CAT、SOD和GSH-Px)的m RNA表达量。此外,SSE可以通过提高细胞内源性抗氧化系统能力来降低细胞内MDA和ROS水平,并由此缓解AAPH对LLC-PK1细胞所造成的氧化应激损伤。     

山桃稠李果实花色苷对HepG2细胞抗氧化系统的影响

目的:研究山桃稠李果实花色苷对人肝癌细胞(HepG2)抗氧化系统的影响.方法:质量浓度0.1 ～ 1.2mg/mL的花色苷作用于HepG2细胞,MTT法检测HepG2细胞生长抑制率;检测各组细胞内抗氧化酶活性和谷胱甘肽、丙二醛的含量变化;采用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化.结果:随着花色苷质量浓度的增加,HepG2细胞的抗氧化酶(T-SOD、GSH-PX)活性显著降低;谷胱甘肽(GSH)含量下降,丙二醛(MDA)及活性氧的含量上升.结论:山桃稠李果实花色苷能够明显的降低HepG2细胞的抗氧化能力.     

姜黄素抑制Cu~(2+)诱导的转APP_(695)基因SH-SY5Y细胞氧化损伤和凋亡作用

目的:研究Cu~(2+)诱导的转β-淀粉样前体蛋白(amyloid-β precursor protein,APP)基因SH-SY5Y(SHSY5Y-APP_(695))细胞氧化损伤、凋亡及姜黄素的抑制作用。方法:在姜黄素预保护和无姜黄素预保护条件下,50 μmol/L Cu~(2+)处理细胞24 h,测定细胞存活率、胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平、胞内活性氧(reactive oxygen,ROS)水平、线粒体膜电位、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8和caspase-9活力,蛋白免疫印迹法测定核转录NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)Ser40位点磷酸化(p Ser40-Nrf2)水平以及血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1蛋白表达水平。结果:与空白对照相比,Cu~(2+)损伤组细胞存活率降低,胞内ROS水平和胞外LDH活性升高,线粒体膜电位下降,caspase-9和caspase-3活性明显升高,p Ser40-Nrf2和HO-1含量增加,而姜黄素保护组细胞存活率升高,胞内ROS水平和LDH释放水平降低,线粒体膜电位恢复升高,caspase-9和caspase-3活性明显降低,p Ser40-Nrf2和HO-1表达量减少。结论:姜黄素在一定程度上减弱了Cu~(2+)诱导的氧化损伤和细胞凋亡作用。     

西青果多酚对甲基苯丙胺诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究西青果多酚对甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及机制。方法:实验分为对照组、模型组(3 mmol/L METH)和不同浓度西青果多酚组(25、50、100、200 μg/mL西青果多酚+3 mmol/L METH),给药处理24 h后检测细胞存活率、细胞凋亡、细胞DNA损伤、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活力以及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量等。结果:与对照组相比,3 mmol/L METH能极显著降低PC12细胞存活率(P<0.01),显著降低SOD和GSH-Px活力(P<0.05),显著增加胞内MDA含量(P<0.05),极显著增加细胞凋亡率、ROS含量和DNA损伤(P<0.01);与模型组相比,50~200 μg/mL西青果多酚能极显著抑制METH诱导的PC12细胞存活率和SOD活力的降低(P<0.01),显著抑制GSH-Px活力下降(P<0.05),极显著抑制METH导致的细胞凋亡、DNA损伤、胞内MDA和ROS含量增加(P<0.01)。结论:西青果多酚对METH诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与西青果多酚抑制METH诱导的氧化应激,缓解DNA损伤相关。     

姜黄素超分子包合物的体外抗肿瘤活性评价

对姜黄素超分子包合物的体外抗肿瘤活性进行评价。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)比色法检测包合物(40、80、160、320、640 μg/mL)对不同肿瘤细胞(A375黑色素瘤细胞、A549肺癌细胞、Hela宫颈癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞)处理不同时间(24、48、72 h)后对其细胞存活率的影响,并进一步运用Annexin-V/PI双染检测包合物抑制肿瘤细胞增殖的原因。结果表明,四种细胞的存活率均随着包合物浓度和处理时间的增加呈下降趋势,并且包合物对A375细胞的增殖具有最强的抑制作用,其IC₅₀达到最低,为476.4 μg/mL。进一步的检测发现,当包合物处理A375细胞后,细胞凋亡的数量随着包合物浓度的升高而升高,从对照组的3.3%上升到35.0%,这表明,包合物通过诱导细胞凋亡来抑制A375细胞增殖。     

水飞蓟素对丙烯酰胺诱导人肝癌细胞氧化损伤的保护作用

研究水飞蓟素对人肝癌细胞系（human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2）增殖的影响以及 对食品加工过程中产生的丙烯酰胺所致肝细胞毒性的预防效果,同时对其保护机制进行探讨。通过噻唑蓝法检测 水飞蓟素对HepG2细胞增殖的影响和对丙烯酰胺诱发HepG2细胞毒性的保护效果;利用荧光探针法对HepG2细胞 内活性氧的变化进行检测,并运用比色法分别检测细胞内脂质、蛋白质及DNA的氧化损伤标志物（丙二醛、蛋 白羰基和8-羟基脱氧鸟苷）含量;利用酶活力试剂盒检测细胞内过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力的变化。结果显示, 12～96 μg/mL的水飞蓟素对HepG2细胞无毒性;水飞蓟素可以抑制丙烯酰胺引起的细胞存活率降低和氧自由基水平 升高,减少丙烯酰胺对脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,并提高细胞内抗氧化物酶CAT、SOD和GSH-Px活力。研 究证明,水飞蓟素能够缓解丙烯酰胺对肝细胞造成的氧化损伤。     

Oxidative stress, genotoxicity, and vascular cell adhesion molecule expression in cells exposed to particulate matter from combustion of conventional diesel and methyl ester biodiesel blends

Our aim was to compare hazards of particles from combustion of biodiesel blends and conventional diesel (D(100)) in old and improved engines. We determined DNA damage in A549 cells, mRNA levels of CCL2 and IL8 in THP-1 cells, and expression of ICAM-1 and VCAM-1 in human umbilical cord endothelial cells (HUVECs). Viability and production of reactive oxygen species (ROS) were investigated in all cell types. We collected particles from combustion of D(100) and 20% (w/w) blends of animal fat or rapeseed oil methyl esters in light-duty vehicle engines complying with Euro2 or Euro4 standards. Particles emitted from the Euro4 engine were smaller in size and more potent than particles emitted from the Euro2 engine with respect to ROS production and DNA damage, but similarly potent concerning cytokine mRNA expression. Particles emitted from combustion of biodiesel blends were larger in size, and less or equally potent than particles emitted from combustion of D(100) concerning ROS production, DNA damage and mRNA of CCL2 and IL8. ICAM-1 and VCAM-1 expression in HUVECs was only increased by D(100) particles from the Euro4 engine. This suggests that particle emissions from biodiesel in equal mass concentration are less toxic than conventional diesel.     

苦荞茶多糖诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体机制

目的：从线粒体调控机制的角度探讨苦荞茶多糖（tartary buckwheat tea polysaccharide,TBTP）对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法：应用水提醇沉法结合超声辅助技术提取的TBTP处理A549细胞,分为空白对照组和不同质量浓度TBTP处理组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡水平,采用DHE和Mito SOX染色检测细胞和线粒体活性氧簇水平,采用JC-1染色检测线粒体膜电位变化,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、Bcl-2、剪切型半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、细胞色素c的水平。结果：TBTP呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞增殖。TBTP处理A549细胞24 h可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡。TBTP处理能够显著增加A549细胞和线粒体内活性氧水平,降低线粒体膜电位;同时,TBTP能够增加促凋亡蛋白Bax和剪切型Caspase-3的表达、抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进A549细胞线粒体细胞色素c外流。结论：TBTP能够促进活性氧簇生成、降低线粒体膜电位,进而抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。     

不同形态硒与VE联用对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究不同形态硒化合物(有机硒:L-硒甲基硒代半胱氨酸;无机硒:亚硒酸钠)单独使用及其与VE联合使用后对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生氧化应激损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,将HUVECs随机分为7组:对照组、H_2O_2组、L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methylselenocysteine,L-Se MSC)组、亚硒酸钠(sodium selenite,SS)组、VE组、L-Se MSC+VE联用组、SS+VE联用组。经不同样品干预处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HUVECs存活率;检测各组细胞内脂质氧化终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性的变化。结果:各处理组HUVECs存活率之间没有显著差异;与H_2O_2组比较,0.1 mg/L亚硒酸钠、10 mg/L VE处理能使HUVECs内MDA生成量显著减少,SOD和GSH-Px活性显著升高,并且亚硒酸钠和VE联合使用在细胞水平上具有显著的协同作用,而L-Se MSC组与对照组无显著差异。结论:亚硒酸钠和VE均可保护由H_2O_2诱导引起的HUVECs氧化损伤,提高HUVECs抗氧化能力,并且亚硒酸钠和VE联用具有明显的协同抗氧化作用。     

食品污染物苯并[a]芘致细胞损伤作用的研究

目的:对食品污染物苯并[a]芘所致细胞损伤作用进行研究。方法:用不同浓度的苯并[a]芘(1、5、10、50、100μmol/L)对肺腺癌细胞A549染毒24h,MTT法测定细胞存活率、单细胞琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA损伤,用溶剂二甲基亚砜处理细胞组作为未染毒细胞组。结果:苯并[a]芘染毒作用时,随染毒浓度的增加,A549细胞存活率呈下降趋势;A549细胞的DNA损伤程度也随染毒浓度增加而增加,与未染毒A549细胞相比,染毒A549细胞的Olive尾矩值均有明显增加(p<0.05)。结论:食品污染物苯并[a]芘致A549细胞明显的损伤作用。     

竹盐酿造酱油对H2O2诱发LLC-PK1细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究竹盐酿造酱油乙醇提取物对H2O2诱发猪肾近曲上皮小管细胞（pig proximal tubular cell）LLC-PK1氧化损伤的保护作用。方法：以不同质量浓度（10～200 μg/mL）的竹盐酿造酱油乙醇提取物预培养LLC-PK1细胞24 h后,换用含500 μmol/L H2O2的DMEM细胞培养液继续培养4 h建立细胞氧化损伤模型。四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测细胞生存率,硫代巴比妥酸比色法测定细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,比色法测定细胞内过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性和谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量。结果：经不同质量浓度竹盐酿造酱油乙醇提取物预处理24 h后,受损细胞的生存率上升,细胞内MDA生成量减少,ROS水平显著降低。同时,细胞内抗氧化酶（CAT、SOD和GSH-Px）的活性及其mRNA转录水平,GSH含量也较未经竹盐酿造酱油乙醇提取物处理的受损细胞增加。结论：竹盐酿造酱油乙醇提取物可以通过提高细胞内抗氧化酶系的活性和抗氧化物质GSH的含量而有效地对抗H2O2诱发的LLC-PK1细胞氧化损伤。