抑制AMPK激活对脑缺血小鼠行为学和脑梗死体积的影响

目的:探讨抑制磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)激活对脑缺血小鼠行为和脑梗死体积的影响。方法:选取雄性昆明小鼠66只,随机分为假手术组、盐水对照组及药物干预组,每组22只。药物干预组在缺血时腹腔注射AMPK特异性抑制剂Compound C(20 mg/kg),采用线栓法制作大脑中动脉栓塞/再灌注模型,盐水对照组在相同时间给予等量0.9%氯化钠注射液腹腔注射,假手术组不给予任何药物。再灌注24 h后对小鼠进行神经功能评分,TTC染色观察脑梗死体积,Westem-Blot法检测缺血侧大脑中pAMPK蛋白表达。结果:假手术组无神经功能缺损和脑梗死灶,脑组织有少量pAMPK蛋白表达,包括皮质(0.700±0.197)和海马(0.690±0.228);脑缺血再灌注损伤后,盐水对照组小鼠神经功能评分(2.63±0.52)分,脑梗死体积(49.57±9.71)%,缺血侧脑组织pAMPK蛋白包括皮质(1.410±0.322)和海马(1.510±0.418),均较假手术组增高(P<0.05);药物干预组神经功能评分(1.88±0.64)分,脑梗死体积(24.07±7.74)%,缺血侧脑组织中pAMPK蛋白包括皮质(0.930±0.229)和海马(0.960±0.378),均较盐水对照组降低(P<0.05)。结论:小鼠脑缺血再灌注损伤后,缺血侧脑组织中AMPK被激活,抑制AMPK激活具有神经保护作用。     

Apelin-13对脑缺血再灌注损伤作用的初步研究

目的:研究Apelin-13对缺血/再灌注小鼠脑损伤的作用,并初步探讨其对自噬性细胞死亡的影响。方法:取健康雄性CD-1小鼠,随机分为假手术(sham)组、生理盐水(Saline)组、Apelin组;Apelin组和Saline组首先建立脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,再灌注即刻给予同侧侧脑室注射Apelin-13或等量生理盐水,然后在再灌注48 h后,进行神经功能方面检测,同时利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死体积;缺血再灌注24 h和48 h后,采用West-blot法检测各组自噬相关蛋白LC3的表达情况。结果:Apelin-13可显著降低小鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损症状,减少脑梗死体积,减低自噬相关蛋白LC3的表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值。结论:Apelin-13对小鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,抑制神经细胞的自噬性死亡可能是其作用机制之一。     

黄芪当归合剂对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及内质网应激的影响

目的:探讨黄芪当归合剂对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及内质网应激的影响。方法:将SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、治疗组和溶剂对照组,每组3只。采用经典线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,TTC法检测缺血再灌注后脑组织坏死情况,TUNEL法检测缺血再灌注后神经细胞凋亡率,Western bloting法检测凋亡和内质网应激相关蛋白的表达情况。结果:缺血2 h再灌注48 h后,实验组脑组织均出现不同程度的缺血灶,各组细胞出现不同程度的凋亡;与模型组和溶剂对照组相比较,治疗组凋亡率明显减少(P<0.05),caspase-3、caspase-12蛋白的表达量明显降低(P<0.05),GRP78蛋白的表达量明显升高(P<0.05)。结论:黄芪当归合剂能够在一定程度上减少神经细胞凋亡,缓解内质网应激。     

桃红四物汤对雄性SD大鼠脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元的作用研究

目的:探讨桃红四物汤对雄性SD大鼠脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元的作用。方法:采用改良后的新式线栓法建模,随机分为大脑中动脉阻塞再灌注组、正常组、桃红四物汤低、中、高剂量治疗组,每组各20只。治疗组连续7d灌胃治疗,每日两次,早、晚各一次;模型组和正常组正常喂养。自第8天,对各实验组大鼠进行神经功能评分并处死取脑,用Nissl染色法观察海马CA1区神经元的形态和数量。结果:与模型组比较,桃红四物汤治疗组的神经功能评分明显增加(P<0.01);Nissl染色治疗组显示海马CA1区神经元数量明显增加,随给药剂量增加而增加(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注后,给予桃红四物汤能显著改善损伤大鼠的大脑神经功能,增加海马CA1区神经元数量,并且其治疗效果随桃红四物汤给药剂量的增加而增强。     

尤瑞克林对脑缺血再灌注模型大鼠缺血侧皮质区内皮抑素表达的影响

目的观察尤瑞克林对脑缺血再灌注模型大鼠缺血侧皮质区内皮抑素(ES)表达的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组3组。模型组和实验组大鼠用线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)脑缺血再灌注模型,假手术组接受相似手术处理,但不插入线栓。实验组于再灌注后5 min经尾静脉注射用灭菌生理盐水稀释的尤瑞克林3.5×10~(-3)PNAU/kg,给药体积1 m L/kg;假手术组和模型组经尾静脉注射灭菌生理盐水。于再灌注48 h后进行神经功能缺损评分,采用免疫组织化学法和Western Blot法检测缺血侧皮质区微血管内皮细胞ES的表达。结果与模型组比较,实验组神经功能缺损评分明显降低,缺血侧皮质区微血管内皮细胞ES表达明显下降,差异均有统计意义(P<0.05)。结论尤瑞克林可通过下调缺血侧皮质区微血管内皮细胞ES表达来促进脑缺血再灌注后的血管新生,从而发挥神经保护作用。     

不同缺血时间对脑缺血/再灌注损伤大鼠神经行为学的影响

为探讨不同缺血时间对脑缺血/再灌注损伤大鼠神经行为学的影响,利用线栓法复制脑缺血/再灌注损伤模型,考察缺血1 h、2 h和4 h后再灌注1 d、4 d、7 d和14 d的不同时间点时大鼠神经功能缺损评分,TTC染色测梗死面积.结果显示缺血2 h组存活率较高,为中度神经功能缺损程度.结论为缺血2 h为最适合的造局灶性缺血/再灌注模型的缺血时间,可以为评定后续实验中药物药效指标和选择缺血时间窗提供重要参考.     

半枝莲总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨半枝莲总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及作用机制。方法:45只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组和半枝莲组,每组15只。模型组和半枝莲组均制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型。半枝莲组每日给予半枝莲总黄酮(140 mg·kg~(-1))灌胃,其余两组每日灌服等量的生理盐水,共干预4周。末次给药后处死大鼠,采集脑组织,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测脑梗死体积;采用HE染色法观察大鼠海马区脑组织形态学变化。采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织立早基因(FBJ osteosarcoma oncogene,c-fos)、B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因家族蛋白(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)的表达。结果:TTC结果显示:模型组脑梗死体积最大,半枝莲组梗死体积显著减小(P<0.05)。病理组织学结果显示:模型组脑梗死表现最明显,而半枝莲组的脑梗死程度有所减轻。免疫组织化学显示:与假手术组比较,模型组和半枝莲组大鼠脑组织c-fos和Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,半枝莲组大鼠脑组织c-fos和Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:半枝莲总黄酮治疗脑缺血再灌注损伤的可能机制与其下调c-fos和Bax表达、上调Bcl-2表达有关。     

黄芪对缺血再灌注诱导心肌损伤的保护作用

目的:探讨黄芪对缺血再灌注诱导的心肌损伤的保护作用。方法:收集60只正常大鼠建立缺血再灌注损伤模型,随机分为对照组、缺血再灌注模型组、实验组,各20只。实验组在大鼠进行再灌注损伤造模时,给予5 mL黄芪浓缩液,缺血再灌注模型组给予等体积的生理盐水进行干预,对照组不做任何处理。造模成功24 h后迅速断头取心,采用MTT比色法检测细胞增殖能力;采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡率,进一步验证其保护作用;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)、超氧化物歧化酶(superoxide orgotein dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH)水平。结果:与对照组比较,缺血再灌注模型组和实验组细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率能力明显增加,PKB、SOD、GSH水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与缺血再灌注模型组比较,实验组细胞增殖能力明显增加,细胞凋亡率明显减少,PKB、SOD、GSH水平存在明显变化,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪可减轻心肌细胞的缺血再灌注损伤,通过抗氧化和抗凋亡来实现保护作用。     

丁苯酞在大鼠脑缺血—再灌注损伤中的神经保护机制的研究

目的探讨丁苯酞注射液在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及可能的作用机制。方法56只清洁级SD大鼠,随机平均分为假手术组,缺血—再灌注组,丁苯酞24 h治疗组,丁苯酞48 h治疗组。缺血2 h再灌注时,丁苯酞24 h治疗组及丁苯酞48 h治疗组分别予腹腔注射丁苯酞注射液每天20 mg/kg,直至各时间点处死。假手术组和缺血—再灌注组分别向腹腔注射等量生理盐水。观察各组脑缺血体积及脑源性神经营养因子(BDNF)阳性细胞数。结果丁苯酞治疗组比缺血再灌注组的脑缺血体积明显缩小,且丁苯酞48 h治疗组较24h治疗组缩小更显著(P<0.05)。BDNF阳性细胞检测显示丁苯酞治疗组比缺血再灌注组的BDNF阳性细胞数明显增加,且丁苯酞48 h治疗组较24 h治疗组增多更明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞注射液可能通过诱导BDNF的表达从而发挥对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。     

天然虾青素对大鼠MCAO模型的保护作用研究

目的:探讨天然虾青素对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制。方法:采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(MCAO)模型,以神经学评分、脑梗塞体积、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)为评价指标,考察天然虾青素的脑保护作用。结果:天然虾青素能够明显改善模型动物的神经病学症状,缩小脑梗塞体积,升高血清SOD活性,降低血清MDA水平。结论:天然虾青素在防治大鼠脑缺血/再灌注损伤方面具有明显作用,其作用与抗氧化损伤有关。