猪瘟病毒E2蛋白4重复抗原表位的构建及抗原活性研究

利用PCR方法获得4次重复的猪瘟病毒E2蛋白中和性抗原表位基因，将其克隆到pGEM-5ZF( )载体，测序正确后亚克隆到pGEX-3X载体构建得到重组质粒pGEX-3X-4P。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达了含4重复抗原表位的融合蛋白。该蛋白经纯化后，利用间接ELISA检测其与血清的反应性，结果表明，纯化的融合蛋白与兔抗CSFV E2血清有很强的反应性，与兔抗BVDV E2血清不反应，说明该重复抗原表位在鉴别诊断CSFV与猪的BVDV感染方面具有潜在的应用价值。     

真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的体外重组与纯化研究

将真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的成熟肽区域克隆到表达载体pQE30中,并转化到大肠杆菌XL-blue中进行表达。转化子经载体和基因特异性引物进行PCR双向筛选,并将筛选到的阳性克隆经质粒纯化后,进行序列测定。序列测定结果显示,该基因结构正确,且准确插入到表达载体启动子的下游,获得了结构和组成正确的重组子。重、组子经IPTG诱导后,以SDS-PAGE电泳鉴定,电泳结果表明,该基因在大肠杆菌XL-blue中实现了表达。通过对诱导条件的调整,在体外获得了高效表达的重组蛋白,高效表达的重组蛋白约占菌体蛋白的25％-30％。不同诱导时间对重组蛋白影响实验显示,随诱导时间的增加,重组蛋白产量逐渐增高,经4h诱导,其表达量可以达到平台期,过长时间的诱导,对表达产量没有影响。重组蛋白经镍金属亲和层析纯化,获得了纯度较高的重组蛋白。采用交换缓冲液的方法,用Sephadex G150,对重组蛋白进行脱盐复性,使重组蛋白得到了进一步纯化。     

人肥胖基因在大肠杆菌中的表达

肥胖基因编码的瘦蛋白可以反映机体脂肪含量信息,在发育、繁殖、造血及体重调节等方面具有重要功能。本文利用PCR方法扩增去除信号肽的人肥胖基因cDNA序列,并将位于基因5’端的CCC转变为大肠杆菌常用密码子CCG,扩增片段经测序证实后,克隆原核表达载体pT7-7,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经温度诱导,SDS-PAGE电泳可见分子量约为：16kD的特异蛋白表达带,表达量最高占菌体蛋白总含量的45％以上。表达重组蛋白经纯化,注射昆明白小白鼠,小白鼠体重明显下降,说明纯化的重组蛋白具有生物学活性。     

高纯度白喉毒素突变体CRM197的制备及鉴定

为了制备高纯度的白喉毒素无毒突变体CRM197,可作为载体蛋白用于细菌性结合疫苗开发,对CRM197基因进行大肠杆菌密码子优化,并克隆至表达载体pET28a(+）中,将鉴定正确的重组质粒pET28a-CRM197转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并分析其表达形式及表达条件的优化。再对表达的重组CRM197蛋白进行纯化,最后对纯化的CRM197进行WB、纯度、分子量和圆二色谱等检测项目的初步鉴定分析。PCR酶切和测序鉴定结果表明重组质粒pET28a-CRM197构建成功,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,获得重组工程菌(E.coli(DE3/p28a/197)。该重组工程菌发酵的最佳接种量为5%～10%(v/v),且主要以包涵体形式表达,收获的菌体在高压均质机破碎压力为1 000 bar的条件下进行破碎,然后利用6 mol/L盐酸胍进行溶解变性,复性及经30 kD超滤膜包超滤后上纯化系统AKTA pure150 M,经一步阴离子交换层析进行纯化,其纯度可达98%以上,WB、分子量及圆二色谱等鉴定结果均与标准品一致。综上所述,成功建立大肠菌表达系统CRM197制备...     

铜绿微囊藻生物钟蛋白的表达纯化与抗体制备

为了获得融合表达的铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)生物钟蛋白KaiA、KaiB、KaiC并制备其相应的多克隆抗体,将kaiA、kaiB、kaiC基因分别克隆到原核表达质粒pET-His中.重组质粒pET-His-KaiA,pET-His-KaiB和pET-His-KaiC经酶切和测序鉴定后,分别转化E.coli BL21(DE3)进行融合表达.经SDS-PAGE分析可知,融合表达的KaiA、KaiB和KaiC蛋白表达量可分别达到菌体总蛋白的25%、40%和20%.经亲和层析后融合蛋白KaiA和KaiB的纯度分别达95%和92%,而KaiC经胶回收纯化后纯度也可达93%.将纯化后的三种Kai蛋白作为抗原分别免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA检测抗体滴度表明,制备的抗KaiA、抗KaiB和抗KaiC的多克隆抗体效价高,分别可达到1:50000、1:60000和1:100000.Western blotting结果表明:获得的多克隆抗体具有较高的效价,抗体能识别相应的Kai蛋白,具有较高的特异性,能用于铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiA、KaiB和KaiC的表达节律检测.     

吸血蝙蝠纤溶酶原激活剂α2的原核表达及抗体制备

利用人工合成的吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂α2(DSPAα2)基因,研究了其在细菌中的表达及表达产物的纯化和抗体制备.首先人工合成DSPAα2基因,并构建原核表达载体转化大肠杆菌.经IPTG诱导后,DSPAα2在细菌中得到了高效表达.SDS-PAGE结果显示,以包涵体的形式存在的DSPAα2重组蛋白占到细菌总蛋白的32%.包涵体裂解后经亲合层析柱纯化,100mL菌液中能得到2.2mg纯的重组蛋白.用纯化的DSPAα2分别免疫大鼠和小鼠,经ELISA检测,获得了效价达到1∶12800以上的高质量的抗血清.Western blot结果显示抗体能与DSPAα2特异性地结合.     

HIV-1核心蛋白的表达与纯化

将编码人I型免疫缺陷病毒(HIV1)核心蛋白p24gag的基因序列克隆到原核表达载体pET28(b)中,高效表达了N,C端融合His·Tagp24蛋白,所表达的重组p24蛋白占菌体总蛋白的46%。在变性条件下,使用NiNTA亲和层析法纯化了p24蛋白,纯度为94%。菌体中及纯化、复性后的目的蛋白均能与抗HIV1p24单克隆抗体发生特异性反应。用纯化的p24蛋白免疫小鼠,4周时小鼠血清抗p24抗体效价达1∶400。实验结果表明:大肠杆菌表达的HIV1p24蛋白纯化后可用作HIV1检测试剂的原料。     

用温度诱导融合表达含内蛋白子的人神经营养因子-3

将重组质粒 pTXB NT3(6 9kb)与载体 pJLA50 3(4 9kb)分别用Nde 1/BamH 1双酶切 ,然后将前者的人神经营养因子 3 内蛋白子 几丁质结合区 (hNT3 in tein CBD)DNA片段插入后者载体中 ,构建成一个含内蛋白子的温度诱导型表达载体pLZY0 1。经转化后 ,工程菌E coliBL2 1/ pLZY0 1在LB培养基中培养 ,表达产物约为4 2kD的hNT3 intein CBD融合蛋白 ,经DTT不完全化学拆除后 ,可得约 15kD的hNT3,2 7kD的intein CBD及 4 2kD的融合蛋白 ,产物经鸡胚背根神经节测定其生物活性 ,融合蛋白在 80ng ,hNT3在 2 5ng时能较好地促进神经纤维的伸长。     

中国明对虾线粒体MnSOD在大肠杆菌中的重组表达、产物纯化及活性测定

采用PCR方法扩增编码中国明对虾线粒体锰超氧化物歧化酶(MnSOD)成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pCRR T7/NT TOPOR TA中进行体外重组表达.重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS后,经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白.对重组蛋白进行 LC-ESI-MS 分析的结果表明,融合蛋白的三个肽段与中国明对虾线粒体MnSOD 相应肽段完全一致.将重组蛋白通过金属螯合柱进行纯化,进而透析、复性,最后获得了活性高达2373U/mg的重组蛋白.中国明对虾线粒体MnSOD的成功表达,为深入研究其在中国明对虾免疫反应和抗氧化胁迫中的作用奠定了基础.     

牙鲆抗菌肽hepcidin基因在大肠杆菌中的融合表达

根据从实验室克隆的牙鲆抗菌肽hepcidin基因(GenBank登陆号DQ129693)的序列,设计了特异性引物,PCR扩增其成熟肽片段.重组至融合表达载体pGEX-4T-1中,构建成牙鲆抗菌肽hepcidin基因融合表达载体pGEX-fhep,转化至大肠杆菌BL21(DE3)plyS中,筛选得到的阳性克隆用IPTG进行诱导.SDS-PAGE电泳显示在29kD处有特异性的蛋白条带出现,Western-blotting 检测表明已经成功表达了融合蛋白,表达的融合蛋白最高占总蛋白的21%.纯化得到的GST-fhep用凝血酶切割后,用亲合层析得到牙鲆的抗菌肽hepcidin.抑菌实验结果表明抗菌肽对大肠杆菌(ATCC25922)有一定程度的抑制作用.     

The influence of the polarization of the radiation on the accuracy of the transmission of the dimensions of the unit of temperature in radiation thermometry

The results of an investigation of different types of tungsten lamps in order to estimate the components of the error budget of spectrum-pyrometer apparatus are presented. Quantitative relations are considered and the results of experimental research, which enable systematic methods to be developed for eliminating the influence of polarization of the radiation of the lamps in standard radiation thermometry, are analyzed.Translated from Izmeritelnaya Tekhnika, No. 9, pp. 42–45, September, 2004.     

贮槽液位测量单片机应用系统

本文研究用８０９８单片机对密闭大贮槽的贮液容量进行自动检测的应用系统，解决了把贮槽液位测量传感器输出的电流信号直接转换成贮液重量进行显示，从而使显示直观、清晰．     

降低反渗透设备出水电导率的方法

反渗透设备是水处理行业常用设备,广泛用于纯水、高纯水等的预处理.通过试验,找到两种降低反渗透设备出水电导率的方法:反渗透设备进水软化后加碱和反渗透设备进水酸化后脱气,这两种方法都有一定的应用范围,应根据工艺要求和运行费用选择使用.     

Increasing the Reliability of the Primary Processing of the Results of Measurements

A new approach is considered to processing the results of measurements. It is utilized as a basis for carrying out primary processing including the detection and elimination of anomalous measurements and also for cleansing results of additive noise components. The results are presented of an analysis of the efficiency of a method for multiplying estimates when cleansing the results of measurements of additive noise components.     

论人工科学、人居环境科学、事理学的同一性

目的 辨析"人工科学""人居环境科学""事理学"的本质属性和共性特征,并探讨新时代背景下设计学科理论体系建设的可能性方向.方法 首先,采取文献法,回溯人工科学、人居环境科学和事理学的提出及其相关成果,并借助VOSviewer工具分析三者在国内的发展状况,重在厘清理论脉络、理论应用及其对学界和业界产生的不同程度的影响;其次,运用比较法,分别从研究内容、研究思维、研究途径三个维度逐一展开,重在总结三者在认识论、方法论等层面的特性与共性.结论 人工科学、人居环境科学、事理学在学理上具有同一性,可将"人工科学"作为世界设计学科共性基础理论之一,将"人居环境科学""事理学"视为世界设计理论中的"中国智慧"和"中国方案".     

表面活性剂在处理太安表面静电中的应用

通过实验检验表面活性剂对太安表面静电积累的降解效果,测定表面活性剂对太安基本性质的影响,分析比较对表面活性剂的优化选择。     

近红外技术应用于成品卷烟的内在质量稳定性控制

以某品牌卷烟为例,采用傅立叶变换近红外光谱技术采集成品卷烟的近红外光谱,结合连续流动法测定样品中还原糖、烟碱、氯、钾含量的数据,采用偏最小二乘法(PLS)分别建立了预测品牌卷烟烟丝中还原糖、烟碱、氯、钾及糖碱比、钾氯比的近红外模型,模型的相关系数(除钾外)都在0.95以上。用建立的模型快速检测红狼卷烟的各化学成分,通过值的波动范围初步监控成品的质量稳定性。并采集它们的近红外光谱,应用连续小波变换(CWT)对原始光谱进行预处理,再对CWT系数进行主成分分析(PCA),在PCA分析的基础上引入马氏距离算法建立成品卷烟质量稳定性评价模型。通过研究光谱预处理对卷烟样品分类鉴别的影响,确定马氏距离阈值Dthro,结合近红外定量测定值与马氏距离阈值Dthro,对卷烟产品质量稳定性进行评价和控制。     

Analysis of the specific features of loading of the elements of landing gears of aircrafts aimed at the evaluation of the load-bearing capacity of the structure

We propose a computational scheme of the aircraft nose landing gear and perform the analysis of weak sections in the landing-gear lever by the finite-element method. We determine the loading modes in which the landing-gear lever is subjected to disproportional cyclic loads, which should be taken into account in the evaluation of the service life and determination of the properties of applied materials. __________ Translated from Problemy Prochnosti, No. 4, pp. 87–93, July–August, 2008.     

公立高校两权分离的现实基础与动力机制分析

市场经济体制下，利用市场机制配置资源及政事分离是我国公立高校面临的迫切要求。而这一要求得以付诸实践的前提之一就是实行高校所有权和经营权的分离。文章认为，当前我国公立高校两权分离是不彻底的,并指出高校的所有权和经营权存在分离的现实基础以及高校与市场、高校与政府间矛盾生成的动力机制，这些决定了两权分离将成为高校未来发展的合理方向。