常压室温等离子体诱变选育淀粉酶菌株及其酶学特性研究

目的:以云南马龙C3F-2016烟叶表面筛选的产淀粉酶菌株为出发菌株,诱变选育高产淀粉酶菌株并研究诱变前后酶学特性。方法:ARTP技术选育菌株后采用3,5-二硝基水杨酸法测定诱变前后菌株产生的淀粉酶酶活力,并探讨不同温度、不同pH、金属离子、紫外光对淀粉酶活力的影响。结果:诱变选育出一株酶活力有较大提高且传代稳定的突变株Bacillus koreensis FS-103,其淀粉酶活力达9050 U/mL,较出发菌株提高了90%。高产突变株FS-103所产淀粉酶的最适作用温度为60 ℃,最适作用pH5.5,在40~50 ℃和pH5~6之间具有良好的稳定性,Ca2+、Mg2+对淀粉酶活性具有促进作用,紫外照射对淀粉酶活力影响减弱。结论:此诱变选育产淀粉酶菌株的方法可行,为该类菌株进行酶制剂的研究与开发奠定理论基础。     

定向选育米曲霉提取香菇鲜味成分

对A.oryzae进行了定向选育,利用定向选育出来的菌株水解香菇,提取鲜味成分。分别以产蛋白酶、纤维素酶、果胶酶为目标建立了选育模型。讨论了不同的筛选模型对菌株产酶分布的影响,以及其酶系分布特点对香菇固体发酵的影响。实验结果表明,在水解香菇制备鲜味剂的复合酶解过程中纤维素酶是关键酶。确定了用于该过程菌株的选育方法。     

柚苷酶高产菌株的诱变选育及产酶条件的优化

从腐烂柚皮中分离筛选到能分解柚皮苷的产柚苷酶菌株,通过对菌株的形态和培养特征的观察,初步鉴定筛选到的菌株为曲霉属的黑曲霉(Aspergillus niger)。以活力较高的6号菌株为出发菌株进行紫外诱变处理,选育得到了一株酶活达933.3 U/m L的6-2号突变菌株,活力是其出发菌株的2.25倍。对该菌株进行连续5代遗传稳定性试验,结果表明该突变株具有良好的产柚苷酶遗传稳定性。同时,对选育出的6-2号突变株发酵产柚苷酶条件进行了优化研究,其最佳发酵产酶培养条件为:培养温度30℃,培养基p H值6.0,摇瓶添加小球数为4颗。采用此条件发酵产柚苷酶活力达1231.0 U/m L,是其出发菌株的2.97倍,可作为进一步诱变筛选的出发菌株。     

常压室温等离子诱变与微生物微滴培养选育几丁质脱乙酰基酶高产菌株

该研究将室温等离子（ARTP）诱变与微生物微滴培养（MMC）技术应用于几丁质脱乙酰基酶（CDA）高产菌株的诱变选育,构建高产CDA菌株的诱变及高通量筛选方法。结果表明,经过4轮的ARTP诱变及MMC筛选,从200个不同的液滴中共筛选出5个发酵产酶明显提升的液滴,并通过进一步的平板筛选、24-深孔板复筛,获得了17株产酶提高300%以上的诱变菌株。通过对比分析17株高产菌株产CDA的能力,确定了1株最佳CDA高产菌株B4,其CDA最大产量比出发菌株提高了3.15倍,发酵产酶总量达到419.11 U/mL,为原始菌种的3.90倍。该研究为CDA高产菌株的诱变选育及高通量筛选提供了借鉴。     

复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化

以具有产壳聚糖酶能力的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）G10为出发菌,利用紫外和微波对菌株G10进行复合诱变,选育壳聚糖酶高产菌株,并采用正交试验设计对突变株产酶条件进行优化。结果选育出一株产酶活相对较高的突变株W1-32,优化后的产酶条件为果糖1.3%,胶体壳聚糖0.5%,酵母粉2.0%,MgSO4·7H2O 0.3%,初始pH 7.2,温度28 ℃,转速200 r/min。在此优化条件下,菌株W1-32产壳聚糖酶活为11.82 U/mL,是出发菌株G10的6.9倍。该研究为菌种的选育和进一步研究应用提供理论依据。     

中国曲中凝乳酶高产菌株的筛选及产酶条件的研究

目的:从中国曲中筛选凝乳酶高产茵株以代替小牛皱胃酶作凝乳剂.方法:采用酪蛋白平板进行初筛,测定茵株发酵产酶活力并进行复筛,研究其产酶发酵条件.结果:经多次复筛选育出1株高产凝乳酶活力茵株 Rhizopus arrhizus F34.碳源种类对该菌株产酶影响较大,无机氮源对产酶有抑制作用;MgSO4、FeSO4、ZnSO4对产酶也有较大的抑制作用,CaC12、KC1有利于凝乳酶的产生;pH、发酵温度和发酵时间对F34菌株产酶影响显著.结论:F34菌株产凝乳酶的最佳发酵培养基是:米粉麸皮水解液4.5%、豆粉水解液4.0%、CaC12 0.3%、KC10.5%;最适发酵条件:初始pH 4.5,发酵温度34℃,培养时间60 h.     

一株纤维素酶产生菌的抗阻遏选育

从沂蒙地区灌木枯枝中筛选到一株产纤维素酶菌株,初步鉴定为绿色木霉(T.viride Persex Fx NS90).该研究考察了不同浓度阻遏剂甘油、葡萄糖、纤维二糖对菌株生长和产酶的影响.结果显示:菌株生长的生物量随发酵培养基中甘油、葡萄糖、纤维二糖的浓度增加而提高,当培养基中分别含0.6%的甘油或0.4%葡萄糖时,菌株的相应发酵产酶活力较高,葡萄糖的浓度达2%时,菌株发酵产酶能力受到明显抑制,纤维二糖浓度对菌株发酵产酶没有明显的影响.实验采用紫外和微波对筛选菌株进行诱变处理,在含一定浓度阻遏剂的分离培养基上进行修复筛选,对选育出突变菌株的显微形态、抗阻遏性能和发酵产酶能力进行考察.结果表明:经紫外照射90s,微波辐射60s,结合2%葡萄糖平板修复选育,筛选到的突变株在生长过程中,菌落由黄色逐渐变为绿色,呈现黄色孢子,相对于出发菌株其抗阻遏性能明显提高,摇瓶发酵产CMCA和FPA酶活分别提高了41.0%和44.95%.     

α-葡萄糖苷酶菌株的选育及其产酶条件的研究

从土壤中筛选出一株高产α-葡萄糖苷酶的菌株,经鉴定为黑曲霉。在此基础上,利用离子注入技术对其进行诱变处理,选育出一株高产突变株AL7,经10代传代培养其遗传性状稳定的。通过对产酶条件进行优化,使其产酶量为9．24U,较出发菌株提高了4．18倍。     

Aspergillus niger C15产柚苷酶发酵条件的优化研究

通过正交实验对黑曲霉菌株C15产柚苷酶的发酵条件进行了优化。实验结果表明,Aspergillus niger C15菌株的最优产酶发酵条件为:2%桔皮粉、6%豆粕粉,250mL三角瓶中装料30mL,接种量3%,最适初始pH为5.0,30℃条件下培养100h,产酶量可达1395.9U/mL。与原始产酶条件相比,产酶量提高8.6%。不同的金属离子对产酶有不同的作用,添加适量的K2HPO4、MgSO4对产酶有明显的促进作用,CuSO4、FeSO4对产酶起抑制作用。     

复合诱变在毛霉高产蛋白酶菌株选育中的应用

为了选育出生长速度快、孢子数量多、酶活力高的毛霉菌株,从而改善和提高腐乳品质,采用物理和化学复合诱变处理3．3039菌株,并经控温培养,筛选得到4株产酶较出发菌株高的菌株。通过性能比较获得1株产蛋白酶活力高的菌株MR10。将此菌种连续传代3次,进行产酶性能和遗传稳定测定,表明此株MR10在较高温度下生长旺盛,产酶能力高,具有较好的遗传稳定性。     

木聚糖酶产生菌Gh-5培养基配方及发酵条件的优化

研究培养基组分与发酵工艺条件对试验菌株Gh-5产木聚糖酶的发酵影响,并对木聚糖酶的酶学性质进行初步研究。结果表明,该菌最适发酵产酶培养基组分为甘露糖15 g/L,氯化铵10 g/L,ZnSO4 0.3 g/L,KH2PO4 0.5 g/L;最适发酵条件为温度37 ℃;pH值为8.0;接种量14 %;发酵培养生长周期36 h。木聚糖酶产生菌株Gh-5发酵优化后的酶活力为114.64 U/mL,较优化前38.02 U/mL提高了201.53%。木聚糖酶酶学性质研究结果表明,木聚糖酶酶活最适pH值为8.0;最适温度为65 ℃;Zn2+对木聚糖酶酶活有较好促进作用。     

宇佐美曲霉木聚糖酶的纯化及其性质

宇佐美曲霉E001固态发酵成熟曲经水浸提、硫酸铵盐析、Phenyl-SepharoseCL-4B疏水层析、SephadexG-75凝胶过滤层析、DEAESepharosefastflow阴离子交换层析等提纯步骤,获得了比酶活3047IU/mg蛋白的纯木聚糖酶,其SDS-PAGE呈单一条带。用SDS-PAGE和凝胶过滤测得木聚糖酶的相对分子质量分别为23.2kD和23.0kD,表明该酶蛋白为单亚基。纯木聚糖酶的最适作用温度和pH值分别为50℃和4.6;以燕麦木聚糖为底物的酶动力学常数Km和Vmax值分别为5.27mg/ml和6494μmol/(min·mg);Ca2+、EDTA对酶有激活作用,而Sn2+、Pb2+、Fe3+有强烈的抑制作用。     

真菌木聚糖酶产生菌的筛选及酶学性质研究

本实验通过土壤稀释涂布法,经过初筛、复筛,筛选出了两株酶活力较高真菌菌株C4 和G1,在此基础上对它们生长的最佳碳源选择、酶学性质进行了研究。结果表明：菌株C4 产酶的最佳碳源为玉米芯－麸皮,培养24h 就可以达到产酶高峰,其酶活力达6582.29U/ml。此酶反应最适温度为40℃,在50℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,并且pH 稳定性比较好;菌株G1 产酶的最佳碳源为玉米芯,培养96h 就可以达到产酶高峰,其酶活力到达6301.04U/ml。此酶反应的最适温度是40℃,在40℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,但pH 值稳定性不如菌株C4。     

康氏木霉固体发酵木聚糖酶条件的研究

通过固体发酵培养,经单因素及正交试验分析,得出康氏木霉发酵产木聚糖酶最优条件组合为：麸皮与玉米芯质量比为2∶8,硫酸铵2.5%,MnSO4 0.50%,料水比1∶1.5（g∶mL）,培养基初始pH自然,培养温度30 ℃,发酵时间6 d。在此条件下,康氏木霉固体发酵木聚糖酶活力达11.98 IU/g。该木聚糖酶水解产物富含2～5个木糖分子的低聚木糖。     

Production,Characterization and Application of a Xylanase from Streptomyces sp. AOA40 in Fruit Juice and Bakery Industries

Streptomyces sp. AOA40, which produces halotolerant and thermotolerant xylanase, was isolated from Mersin soil. Various carbon sources were tested for xylanase production with selected fermentation medium. The best carbon source was selected as corn stover. The effect of corn stover concentration and particle size, composition of fermentation medium, fermentation condition such as initial pH and agitation rate on xylanase production was determined. After production, xylanase was partially purified with ion-exchange chromatography and gel filtration chromatography for characterization of xylanase and application in fruit juice and dough improvement. The optimum pH for the activity of xylanase occurred at pH 6.0 in phosphate buffer, while the optimum temperature was 60°C. The relative xylanase activity in the pH ranges of 4–9 remained between 59.93 and 54.43% of the activity at pH 6.0 (100.00%). The xylanase activity showed a half-life of 172 min at 70°C, which was reduced to 75 min at 80°C. The enzyme was highly inhibited by 10–100 mM of Hg⁺², EDTA, Mg⁺², SDS and 100 mM Cu⁺². Clarity of fruit juices increased after enzymatic treatment of apple (17.85%), grape (17.19%) and orange juice (18.36%) with partially purified xylanase and also reducing sugar concentrations of these fruit juices were improved by 17.21, 16.79 and 19.57%, respectively. Also, dough volume was raised 17.06% with using partially purified Streptomyces sp. AOA40 xylanase in bread making.     

木聚糖酶产生菌的筛选

目的 从土壤中筛选木聚糖酶产量高的菌株,并研究其产酶的初步条件.方法 根据培养基上水解圈的大小和摇瓶培养后木聚糖酶的酶活性,筛选产酶量高的菌株.通过一系列单因素试验,研究影响产酶的碳源、氮源和无机盐.结果 筛选到1株产木聚糖酶的菌株,其产酶的较优碳源、氮源和无机盐为麸皮(30 g/L)、牛肉膏(10g/L)和磷酸氢二钾(1.0 g/L).结论 筛选到的菌株具有生产木聚糖酶的潜力.     

嗜热棉毛菌固体发酵产木聚糖酶条件的优化

通过单因素实验优化了嗜热棉毛菌CAU44利用农业废弃物固体发酵产木聚糖酶的发酵条件。结果表明,发酵产酶的最佳碳源为玉米芯和麦麸以4∶6混合的复合碳源,最佳氮源为(NH4)2SO4,最佳水分含量为80%,培养基最佳初始pH为4.0,最佳表面活性剂及添加量为0.5%的Tween-60。在优化后的发酵条件下50℃培养7d,嗜热棉毛菌CAU44产木聚糖酶的酶活力最高,达到20343U/g干基碳源,为目前国内报道的最高值。因此,嗜热棉毛菌CAU44在利用农业废弃物固体发酵产木聚糖酶方面有很大的应用前景。     

高产木聚糖酶嗜热子囊菌固体发酵条件与酶学性质

以本实验室从土壤中分离筛选到的一株高产木聚糖酶的嗜热子囊菌QS7-2-4为生产菌种,进行固体发酵产木聚糖酶的发酵条件研究,结果表明最佳产酶条件为:玉米芯:麸皮为7:3(w/w);最佳氮源为酵母膏和胰蛋白胨的混合氮源,添加量为1.5%;吐温-80添加量为0.5%,初始pH为7.2,培养基含水量为80%,250mL三角瓶装料量为8g,发酵温度50℃,发酵时间72h,该条件下木聚糖酶产量达27952U/g干基。该酶最适反应温度为75℃,最适反应pH为4.5,在70℃以下具有良好的稳定性,在室温下储藏150d仍然保留87%的活性。     

Inhibition of proteases during fermentation improves xylanase production by alkali tolerant Aspergillus fumigatus ARl

An alkali-tolerant Aspergillus fumigatus ARl produced a high level of xylanase (228 U/ml) at 42 h of submerged fermentation at pH 9.0. During later culture periods, xylanase activity declined considerably and reached 45 U/ml at 90 h. This trend is because of proteolytic degradation of xylanases since A. fumigatus co-produced multiple proteases with high activity (120-159 U/ml) during submerged fermentation. Xylanase and protease were found to be active over a wide range of pH from 5.5 to 9.0. In contrast, protease lost its activity completely in the presence of CuSO4 (25 mM) while xylanase remained active. The selective inhibition of proteases by the addition of CuSO4 to the culture medium prevented proteolytic degradation of xylanase and improved the production of xylanase by 3-fold.     

不同来源木聚糖酶酶学性质研究

目的 研究比较4种不同来源木聚糖酶的酶学性质,为各酶在不同领域应用提供理论依据.方法 通过摇瓶发酵获得源自4种菌株的木聚糖酶粗酶液,用二硝基水杨酸（DNS）法测定各木聚糖酶的酶活性,并研究酶学性质.结果 嗜热棉毛菌、绿色木霉、泡盛曲霉和橄榄绿链霉菌来源的木聚糖酶的最适温度分别为70,60,50和60℃;最适pH分别为6,4,4和6.嗜热棉毛菌来源的木聚糖酶耐热性最强,高温60℃下,酶活性高于85％,70℃仍保持60％以上的酶活性,且在pH4～11的范围内能保持较高稳定性.另外3种来源的木聚糖酶则有较强的耐酸性.结论 嗜热棉毛菌来源的木聚糖酶有饲料添加剂方面的应用优势.另外3种来源的木聚糖酶可根据不同行业对木聚糖酶的要求,应用于食品、医药、能源、环境等领域.