HPLC-ELSD法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱含量

该研究探讨采用HPLC–ELSD(蒸发光散射检测器)法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱含量。结果表明,选用硅胶色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),磷脂酰胆碱(PC)和溶血磷脂酰胆碱(LPC)分别在0.5 mg/mL~8.0 mg/mL和0.4 mg/mL~6.0 mg/mL范围呈良好线性关系;PC和LPC平均回收率为99.42%和99.83%,相对标准偏差(RSD)分别为1.44%和1.21%。该法对大豆磷脂PC和LPC分析均具有良好精密度和重复性。     

溶血磷脂酰乙醇胺硅胶柱色谱纯化技术研究

探讨了溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)硅胶柱色谱纯化的可行性。通过选择,确定以硅胶为固定相、氯仿-甲醇(体积比2∶1)为洗脱液,进行LPE纯化工艺优化。得到的最优工艺条件为:上样量1∶40(样品质量与固定相质量比),上样液质量浓度30 mg/m L,洗脱流速2.5 m L/min;在最佳工艺条件下,最终LPE产品纯度为99.05%,回收率为88.69%。研究为进一步探讨工业化制备LPE提供了基础数据和理论支撑。     

不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱含量研究

采用HPLC–ELSD法测定不同形态大豆磷脂产品中溶血磷脂酰胆碱(LPC)的含量,并通过对原料、工艺、储存期等因素的研究来确定溶血磷脂酰胆碱含量的变化规律。浓缩磷脂产品中LPC含量约为0.80%,大豆粉末磷脂中LPC含量为1.35%,大豆磷脂一次醇溶产品中LPC含量为2.87%,大豆磷脂二次醇溶产品中LPC含量为12.88%。在–20℃、避光储存条件下,各样品一年储存期内LPC含量的变化不大。     

乙醇冷冻法纯化分离大豆磷脂酰胆碱研究

以大豆粉末磷脂为原料,结合乙醇萃取和乙醇冷冻纯化两个步骤提取纯化磷脂酰胆碱;重点探讨乙醇冷冻纯化步骤工艺条件,考察冷冻时间、冷冻温度、料液比、乙醇浓度等因素对乙醇冷冻纯化效果影响,并在单因素试验基础上进行正交试验,确定最佳冷冻纯化工艺为:冷冻时间6h,冷冻温度-12℃,料液比1:8,乙醇浓度97.5%,在此条件下纯化分离,磷酯酰胆碱含量由45.8%提高至70.5%、得率为81.2%。     

柱层析法分离纯化大豆磷脂酰胆碱

利用硅胶柱层析法,通过梯度洗脱对大豆粉末磷脂中的磷脂酰胆碱进行分离纯化.比较氯仿/甲醇和异丙醇/甲醇两个洗脱体系所得磷脂酰胆碱的纯度和回收率.梯度洗脱时,在氯仿/甲醇体系中氯仿:甲醇的比例为3:2(体积分数),异丙醇/甲醇体系异丙醇:甲醇的比例为1:1(体积分数)洗脱,是获得磷脂酰胆碱的最佳洗脱条件.结果表明:在氯仿,甲醇洗脱体系获得磷脂酰胆碱的纯度为97.0%、回收率为86.5%.异丙醇/甲醇洗脱体系获得磷脂酰胆碱的纯度为95.0%、回收率为83.0%.     

微乳体系中磷脂酶A1水解磷脂酰胆碱的研究

在微乳体系中研究了新型磷脂酶A1(Lecitase Ultra)水解磷脂酰胆碱生成溶血磷脂酰胆碱的反应。磷脂酰胆碱既是反应底物,又是表面活性剂。分别讨论了底物浓度、酶浓度、水分含量对反应的影响,并采用响应面法分析了这3个主要因素的交互作用,确定反应的最佳工艺条件为:底物浓度0.0218 g/mL、酶浓度1.744 mg/mL、W0(水与表面活性剂的摩尔比值)为27.267、pH 5.0和温度50℃。经HPLC分析,反应转化率达到95.2%。     

蛋黄卵磷脂中两种溶血磷脂的分离与结构鉴定

通过柱层析分离法对蛋黄卵磷脂中的两种溶血磷脂(溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺)进行分离纯化,并采用ESI质谱、核磁共振氢谱和碳谱、气相色谱对其进行结构鉴定。结果表明:蛋黄来源的溶血磷脂酰胆碱主要由1-棕榈酰溶血磷脂酰胆碱,1-亚油酰溶血磷脂酰胆碱,1-硬脂酰溶血磷脂酰胆碱,1-油酰溶血磷脂酰胆碱4种化合物组成;溶血磷脂酰乙醇胺主要由1-棕榈酰溶血磷脂酰乙醇胺,1-硬脂酰溶血磷脂酰乙醇胺,1-油酰溶血磷脂酰乙醇胺3种化合物组成。     

乙醇冷冻提取法纯化磷脂酰胆碱(PC)的工艺研究

为了得到纯度较高的磷脂酰胆碱,对乙醇冷冻提取法纯化磷脂酰胆碱的工艺进行了研究.采用高效液相色谱法测定磷脂酰胆碱的含量,通过正交实验设计考察了乙醇浓度、料液比和提取时间等因素在不同水平下对磷脂酰胆碱含量的影响,对试验结果进行了方差分析和显著性检验.结果显示乙醇冷冻提取法最佳工艺组合为A2B3C3,即93%乙醇溶液,料液比1：3,冷冻条件下提取8.5 h,在选定的最佳工艺条件下得到的磷脂酰胆碱的含量由原来的33%提高到了75%,可见乙醇冷冻提取法能有效地纯化磷脂酰胆碱.     

磷脂酶D的纯化及催化制备磷脂酰丝氨酸研究

采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶层析对广岛链霉菌SK43.001-11发酵液中的磷脂酶D进行纯化,并对双液相体系中酶法制备磷脂酰丝氨酸的工艺进行研究。结果表明,纯化后,磷脂酶D比酶活提高到49.48 U/mg,是粗酶液的54. 37倍,回收率为32.31%。磷脂酶D双液相催化制备磷脂酰丝氨酸的最佳条件为:有机相为乙醚,pH6.5,反应温度30℃,L-丝氨酸与磷脂酰胆碱质量比15∶1,有机相与水相体积比1∶1,反应时间2.5h。在最佳条件下,磷脂酰丝氨酸生成率达到74.8%。     

醇相体系制备高纯甘油磷脂酰胆碱的研究

探讨了在醇相体系中甲醇钠催化制备甘油磷脂酰胆碱(L-alpha glycerylphosphorylcholine)的可行性,建立了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)和L-α-GPC的HPLC-ELSD检测方法,研究了温度、料液比、甲醇钠添加量、反应时间对PC转化率和GPC得率的影响。利用Design Expert软件对工艺参数进行优化,得最佳条件:温度35℃、料液比3/20(g/mL)、甲醇钠添加量2 mL、反应时间1.5 h,GPC得率为88.2%。极差分析结果,反应条件对GPC得率影响的顺序为:甲醇钠添加量>温度>反应时间>料液比。大豆粉末磷脂的醇解反应液经过硅胶柱色谱纯化,最终可以得到纯度为99.8%的L-α-GPC,回收率78.4%,这为工业级规模制备高纯L-α-GPC提供了一种好的思路和方法。