单环刺螠体壁多糖的分离纯化、理化性质及抗脂质过氧化活性

为研究和开发单环刺螠中活性多糖成分,采用酶法提取和色谱分离技术,从单环刺螠的体壁中提取分离多糖组分,采用化学和仪器分析方法对其单糖组成、分子质量等理化性质进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其进行初步的活性评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠多糖（unicinctus polysaccharide,UP）得率为5.3%。通过离子交换柱层析分离纯化后主要得到两个组分UP-1和UP-2。UP-1是主要由葡萄糖（Glc）组成的高聚葡聚糖,分子质量340 kD,而UP-2为组成复杂的类糖胺聚糖,分子质量约为7.9 kD,主要含有葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、氨基葡萄糖（GlcN）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的甘露糖（Man）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成Man、GlcN、GalN、Glc、Gal、Fuc物质的量比例为1.0∶1.47∶0.64∶6.49∶2.5∶3.0。和其他海洋动物来源类糖胺聚糖类似,UP-2还含有少量的硫酸基,含量为7.4%。对UP-1和UP-2进行初步体外抗氧化活性研究表明,类糖胺聚糖UP-2具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为5.0 mg/mL。     

灵芝子实体多糖的分离纯化、组成及其免疫活性研究

从一种新菌株培育的赤芝子实体中提取分离得到两个分子量均为500万以上的水溶性灵芝多糖组分GLPD1与GLPD2;SEC—LLS分析结果显示两者均为高支化的紧缩结构。PMP柱前衍生化反相色谱分析结果表明GLPD1与GLPD2的单糖组成有显著差异,即GLPD1的单糖组成摩尔百分比为Man∶GlcN∶Rib∶Rham∶GalUA∶GalN∶Glc∶Gal∶Xyl∶Fuc=3.7∶0.8∶0.16∶6.8∶0.7∶0.29∶77∶9.27∶0.16∶1.1;而GLPD2的摩尔比Man∶GlcN∶Rib∶Rham∶GalUA∶GalN∶Glc∶Gal=10.6∶2.0∶0.97∶10.72∶0.65∶0.99∶64.51∶9.52。傅立叶红外光谱分析发现两者异头碳连接方式均为β-构型。体外促进正常小鼠脾淋巴细胞增殖活性试验结果表明,这2个多糖级分均具有一定的免疫活性,且在50,200,500mg/mL 3个浓度下GLPD2的免疫活性均比GLPD1要高,且GLPD2促进正常小鼠脾淋巴细胞增殖活性有量效相关性。     

单环刺螠体壁多糖的组成分析及基于MCM-41的吸附富集研究

本文通过胃蛋白酶酶解法提取了单环刺螠体壁多糖,进行了组成分析,并从吸附动力学、吸附热力学的角度,研究了介孔材料MCM-41对多糖的吸附。组成分析结果显示,多糖中总糖含量为（78.82%±1.40%）,蛋白含量为（10.5%±1.07%）,硫酸根含量为（0.52%±0.06%）;单糖组成分析结果显示,多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖和木糖等单糖组成。红外光谱分析结果显示,多糖中含有O-H、C-O-C、C=O、S=O等特征基团,说明单环刺螠体壁多糖中含有糖醛酸组分,且存在硫酸基的取代。利用平均孔径为3.85 nm、孔容1.25 cm3/g的介孔材料MCM-41对单环刺螠体壁多糖进行富集,吸附量达到350 mg/g,吸附动力学符合准二级吸附动力学（pseudo second order adsorption kinetics,PSO）模型,吸附过程由外部扩散和颗粒内扩散控制。Langmuir和Freundlich模型均能够较好拟合吸附热力学,说明MCM-41的吸附过程主要为单分子层并伴随着多分子层的吸附。研究了不同洗脱剂的洗脱效果,发现10% SDS具有相对较强的洗脱能力。单环刺螠体壁多糖在介孔材料上的吸附研究有望为食品产业中含糖物质的富集分离提供指导。     

江水短时浸渍法脱胶亚麻纤维果胶单糖组分的变化

为进一步明确亚麻脱胶过程中果胶单糖组分的变化,利用PMP(1—苯基—3—甲基—5—吡唑啉酮)柱前衍生化高效液相色谱法测定出亚麻纤维果胶由9种单糖组成,其物质的量比为Gal acid∶Ara∶Gal∶Glu∶Rha∶Fuc∶Xyl∶Man∶Glu acid=64.52∶28.23∶25.55∶17.75∶13.41∶7.36∶5.72∶5.18∶5.05。采用江水短时浸渍法脱胶120 h后达到脱胶终点,脱胶过程中单糖含量逐渐降低,但单糖种类变化不大,其中Fuc在脱胶96 h后含量为零。此外,其余各单糖含量变化从大到小依次为Ara、Gal、Glu、Gal acid、Glu acid、Rha、Xyl、Man,损失率分别为85.00%、77.64%、76.67%、66.72%、61.43%、60.44%、48.01%和44.19%。     

三种色谱法分析鲍鱼生殖腺多糖的单糖组成

为了选择一种准确有效的方法测定鲍鱼生殖腺多糖(AGP-32)的单糖组成。采用薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法对AGP-32的单糖组成进行测定。结果表明:高效液相色谱法较其它色谱方法具有分离效果好,并可同时检测中性糖、糖醛酸和氨基糖等特点,并利用该法得到单糖组成的摩尔比为Man∶Rha∶GlcA∶GalA∶Glc∶Gal∶Xyl∶Fuc=0.79∶2.05∶1.6∶0.58∶0.09∶4.91∶0.11∶0.34。说明高效液相色谱法较其它色谱法更加适合于鲍鱼生殖腺多糖这类复杂样品的单糖组成分析。     

单环刺螠废弃内脏中粗多糖的提取工艺优化

利用热水浸提的方法进行单环刺螠（海肠）废弃内脏中多糖的提取。采用单因素试验和L₉（3⁴）正交试验设计,研究不同pH值、料液比、提取时间和提取温度对单环刺螠内脏多糖提取率的影响。并采用Fenton体系测定单环刺螠内脏多糖对羟自由基（·OH）的清除作用。单环刺螠内脏多糖提取的最佳工艺条件为pH10、料液比1:40（g/mL）、时间3h、温度60℃。单环刺螠内脏多糖在质量浓度为50μg/mL时,对羟自由基清除能力可达60%,且具有剂量效应。     

高效液相色谱法分析地瓜儿多糖的单糖组成

研究分析地瓜儿多糖的单糖组成。采用水提醇沉法提取地瓜儿多糖,用三氟乙酸水解多糖成单糖,单糖产物经衍生化试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化后,利用高效液相色谱法分析单糖的PMP衍生物。结果表明,地瓜儿多糖由甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)和阿拉伯糖(Ara)8种单糖组成,是一种酸性杂多糖,其中以半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸为主,为进一步开发利用地瓜儿这一新的野菜资源提供了科学依据。     

5 种食用菌多糖理化性质及免疫活性的比较研究

目的：研究平菇、茶树菇、香菇、木耳、金针菇5 种食用菌多糖的理化性质和免疫活性,为食用菌的开发利用提供理论支持。方法：采用水提醇沉法提取多糖;采用分光光度法、高效凝胶渗透色谱法（high performance gelpermeation chromatography,HPGPC）、气相色谱-质谱联用法（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）、红外光谱法（infrared spectrometry,IR）分析多糖的理化性质;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA）测定多糖的免疫活性。结果：相同条件下,5 种食用菌多糖提取率依次为平菇多糖（Pleurotusostreatus polysaccharides,POP）3.39%、茶树菇多糖（Agrocybe chaxingu polysaccharides,ACP）2.71%、金针菇多糖（Flammulina velutipes polysaccharides,FVP）2.69%、香菇多糖（Lentinus edodes polysaccharides,LEP）2.32%和木耳多糖（Auriculari aauricular polysaccharides,AAP）2.31%,它们均由分子质量不同、糖苷键为β-构型的多糖组分组成,均含有甘露糖（mannose,Man）、葡萄糖（glucose,Glc）和半乳糖（galactose,Gal）残基,且ACP还含有鼠李糖（rhamnose,Rha）和阿拉伯糖（arabinose,Ara）,AAP还含有少量的木糖（xylose,Xyl）;甲基化分析显示不同多糖具有不同的糖苷键连接方式,POP和LEP以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式,ACP以→1,6-β-Glc和→1,6-β-Gal为主要连接方式,而AAP和FVP是以→1,4-β-Glc为主要连接方式;体外免疫活性实验结果表明,5 种多糖在25～400 μg/mL质量浓度范围内无细胞毒性,可不同程度地提高巨噬细胞的吞噬能力和促进巨噬细胞分泌NO、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的能力,其中以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式的LEP活性最强,以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式的POP次之,以→1,6-β-Glc和→1,6-β-Gal为主要连接方式的ACP效果一般,以→1,4-β-Glc为主要连接方式的AAP和FVP效果最差。结论：5 种食用菌多糖具有不同的理化性质和对巨噬细胞的免疫调节活性,且活性大小与多糖是否含有→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc连接方式相关。     

南瓜多糖PCE-CGH的制备和结构表征

探讨具有降血糖作用的南瓜多糖的分子组成与分子结构信息。以南瓜粉为原料,经过水提取、有机溶剂分步萃取和柱色谱分离纯化,得到一种水溶性多糖(PCE-CGH)。经高碘酸氧化、Smith降解并采用IR,NMR等方法对该多糖的化学结构进行了表征。结果:该多糖由鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)组成,摩尔比为4∶2∶3∶5。主链主要是以β-1→2糖苷键及β-1→3糖苷键连接的Gal和Ara,同时还存在一定量的Glu和Rha;侧链主要是以β-1→4糖苷键及β-1→6糖苷键连接的Rha和Glu。南瓜多糖PCE-CGH是由4种单糖组成、带有侧链的杂多糖。     

3种海参多糖的分离纯化及其化学组成差异分析

提取3种海参中的粗多糖,通过Q Sepharose Fast Flow(QFF)阴离子交换柱分离纯化,得到海参硫酸软骨素(SC-CHS)及海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)2个组分,并比较3种海参多糖的化学组成。对粗多糖、SC-CHS及SC-FUC分别采用高效凝胶排阻色谱法、柱前衍生高效液相色谱法及离子色谱法测定各海参多糖的相对分子质量、单糖组成及硫酸根含量。结果表明,随着海参种类的不同,3种海参SC-CHS相对分子质量之间无显著性差异,均为120kDa左右;各海参SC-FUC相对分子质量存在显著性差异,其中以海地瓜SC-FUC的相对分子质量最大。不同海参多糖葡萄糖醛酸(GlcUA)、氨基半乳糖(GalN)、半乳糖(Gal)及岩藻糖(Fuc)的物质的量比存在显著性差异。各海参SC-CHS的硫酸根含量在29%左右,各海参SC-FUC的硫酸根含量在26%左右。     

蛹虫草菌糠多糖的分离纯化及结构组成分析

以蛹虫草菌糠为原料,利用纤维素酶酶解提取多糖,通过乙醇分级醇沉与Sevag法脱蛋白对所提多糖进行初级分离纯化,得到4 种多糖（P1、P2、P3、P4）。利用凝胶色谱、气相色谱-质谱联用技术（gas chromatographymassspectrometry,GC-MS）对这4 种多糖的分子质量分布与单糖组成进行分析;进一步利用Superdex 200凝胶柱层析对P2进行纯化精制,通过高碘酸钠氧化、Smith降解、红外光谱和核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）技术表征了精多糖P2的一级结构。结果表明：乙醇分级沉淀与Sevag脱蛋白方法的结合能满足蛹虫草菌糠多糖初级纯化的要求,得到了较纯的P2、P3、P4组分,分子质量分别为35.9、9.4、3.7 kD;其中P2是由葡萄糖组成的葡聚糖,其主链结构主要为α-（1→4）吡喃葡聚糖。P3和P4是由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖,且单糖组成均以葡萄糖为主。     

海带多糖及其纯化组分的胆酸盐吸附能力及抗氧化活性

采用pH 2的柠檬酸溶液提取海带中的多糖,将海带多糖（polysaccharide from Laminaria japonica,LPA-P）通过Sevag法除蛋白、透析除盐处理、离子交换柱处理,分离纯化得到3 种多糖组分LPA-P1、LPA-P2、LPA-P3,探讨了海带多糖的分子质量、硫酸基含量、单糖组成与其抗氧化能力和胆酸盐吸附能力的内在联系。结果表明：LPA-P及其纯化组分均含有硫酸基,且LPA-P3最多为5.36%,LPA-P1最少为1.22%;海带多糖及其纯化组分的单糖组成均以岩藻糖、半乳糖和甘露糖为主,其中LPA-P和LPA-P3主要的单糖为半乳糖,而LPA-P1和LPA-P2主要的单糖为甘露糖,海带多糖LPA-P3中岩藻糖含量最高;海带多糖LPA-P、LPA-P1、LPA-P2和LPA-P3的平均分子质量为20.13、17.55、28.71、17.14 kD。海带多糖的氧自由基吸收能力和2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基（2,2’-azinobis (3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid) ammonium salt radical,ABTS＋·）清除能力从大到小依次为LPA-P3＞LPA-P＞LPA-P2＞LPA-P1;LPA-P3具有最强的胆酸盐吸附能力,LPA-P和LPA-P2次之且无显著性差异,LPA-P1基本不具有胆酸盐吸附能力。结合LPA-P及其纯化组分的结构特性,推测高硫酸基含量、主要单糖组成为岩藻糖和半乳糖的海带多糖具有更强的胆酸盐吸附能力及抗氧化活性。     

糖枣多糖的单糖组成分析

研究糖枣多糖的单糖组成。以3 a生糖枣为试材,采用糖腈乙酸酯衍生化法,利用气相色谱仪对5个枣多糖组分进行单糖成分测定。结果表明,在糖枣多糖的单糖组成中,以木糖醇、葡萄糖、半乳糖所含比例较高,分别占单糖总含量的19.4%、18.5%、24.2%(组分DTC中葡萄糖比例高达36.4%);鼠李糖、核糖、阿拉伯糖和甘露糖,所占含量次之,分别为7.1%、6.5%、8.1%、7.9%;岩藻糖、木糖含量较低,分别只占总单糖质量的5.0%、3.4%(组分DTB1中岩藻糖只占0.80%,组分DTB2中木糖只占0.70%)。由此可知,糖枣多糖中单糖组成的差异性大。     

茄枝多糖的分离纯化及成分分析

研究茄枝多糖的提取工艺和主要单糖组分。通过水提工艺,比较三氯乙酸（trichloroacetic acid,TCA）、Sevag、TCA与木瓜蛋白酶结合、Sevag与木瓜蛋白酶结合4 种脱除蛋白方法,使用DEAE-D22纤维素柱与SephadexG-100柱层析精制获得茄枝多糖ESP1-1,并对其进行薄层色谱（thin layer chromatography,TLC）、高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）检测与组分分析。木瓜蛋白酶与TCA法结合脱除蛋白效果最佳,蛋白清除率达到93%,多糖损失率为45.3%;TLC、HPLC检测与分析证明ESP1-1具有多糖的理化性质,主要由甘露糖、葡萄糖、果糖、木糖4 种单糖组成。研究结果可为茄枝多糖的开发应用提供理论支持。     

大白桩菇多糖的结构鉴定及清除自由基活性

利用水提醇沉法提取大白桩菇粗多糖,用酸性乙醇分级、SepharoseCL-4B以及Sephadex G-100柱层析分离纯化得到大白桩菇多糖（DBZG4-b）。采用高效液相色谱法检测DBZG4-b均一性及相对分子质量。经气相色谱、纸层析、红外光谱、甲基化、气相色谱-质谱、核磁共振方法解析DBZG4-b的结构。结果显示,DBZG4-b为均一性多糖,相对分子质量约为6 864;DBZG4-b为多分支结构多糖,主链由Glc和Gal构成,均以1→6糖苷键连接,Glc在3位上有分支,Gal在4位上有分支;支链由Ara、Glc、Gal构成,其中Ara以1→3连接,Glc以1→3连接,Gal以1→4连接,Ara、Xyl、Rha、Man、Glc、Gal都有一部分构成分子的末端残基。清除·OH与1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基实验表明,DBZG4-b具有良好的清除自由基能力。     

茶叶酸性多糖的分离、纯化及其理化性质研究

采用水提醇沉法从采自江西婺源的粗老绿茶中提取茶叶多糖,通过Sevag法脱蛋白得到精制茶叶多糖,应用高效凝胶渗透色谱法（high performance gel permeation chromatography,HPGPC）分析茶叶多糖纯度并测定其分子质量,进一步测定茶叶多糖的糖含量、蛋白质含量、单糖组成、糖醛酸组成等理化指标,同时对其进行紫外和红外光谱扫描,考察其光谱性质。结果表明：该茶叶多糖组分为均一性高的酸性多糖组分,分子质量约为289 734 D,糖含量为55.1%,蛋白质含量为1.8%。该茶叶多糖酸性组分主要由鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为1.26∶3.18∶4.08∶1.00∶1.52∶3.92,该茶叶多糖酸性组分中含有大量半乳糖醛酸,含量为33.5%。     

鹰嘴豆非淀粉多糖的分离纯化及结构表征

提取鹰嘴豆中的粗多糖,通过酶处理和Sevag法除去多糖中的淀粉和蛋白质,经DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-75凝胶柱分离纯化分别得到鹰嘴豆非淀粉中性多糖和酸性多糖,并通过紫外光谱、气相色谱、红外光谱、扫描电镜测定其性质和单糖组成。结果表明：鹰嘴豆非淀粉多糖在260 nm和280 nm波长处均无吸收峰,表明两种多糖均不含核酸、蛋白质以及肽类等;气相色谱测定表明鹰嘴豆非淀粉中性多糖单糖组成的物质的量比为鼠李糖∶岩藻糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶半乳糖∶葡萄糖=2.48∶1∶3.92∶0.87∶32.82∶18.79∶28.06,鹰嘴豆非淀粉酸性多糖单糖组成物质的量比为鼠李糖∶岩藻糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶半乳糖∶葡萄糖=2.22∶1∶3.92∶2.10∶5.92∶15.99∶8.57（均以岩藻糖为标准）;红外光谱测定表明二者均有多糖的特征吸收峰;扫描电镜显示鹰嘴豆非淀粉中性多糖呈线形结构而鹰嘴豆非淀粉酸性多糖呈卷曲的片状结构。     

葛仙米多糖的单糖组成分析

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法及HPLC-质谱联用法测定葛仙米多糖的单糖组成,两种方法测定结果相互吻合。同时采用HPLC法测定了相关单糖的标准曲线,相关系数达到0.995以上,经计算,葛仙米多糖的单糖组成物质的量比甘露糖∶葡萄糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖为1∶1.12∶3.24∶1.72∶1.21。