尼罗红染色荧光定量海洋微拟球藻胞内油脂含量

以海洋微拟球藻Nannochloropsis oceanica为受试对象,采用尼罗红染色荧光定量胞内油脂含量。采用单因素实验考察了激发波长、发射波长、二甲基亚砜体积分数、染色时间、尼罗红质量浓度对微藻胞内油脂荧光强度的影响,在此基础上,采用响应面实验进行染色荧光定量条件优化。结果表明,优化的微拟球藻胞内油脂尼罗红染色荧光定量最佳条件为二甲基亚砜体积分数25.6%、染色时间16 min、尼罗红质量浓度0.11 μg/mL、激发波长430 nm、发射波长685 nm。在最佳条件下,尼罗红染色微拟球藻胞内油脂荧光强度与油脂含量显著正相关（R2=0999 9）,说明通过尼罗红染色荧光法可快速表征微拟球藻胞内油脂含量。研究结果为后续微拟球藻资源高值化应用及高产油脂海洋微藻快速筛选和动态追踪微藻产油过程提供了依据。     

尼罗红-荧光光谱法测定布朗葡萄藻油脂含量的方法研究

布朗葡萄藻因胞外分泌物多、细胞壁厚、聚集生长等原因,不能用传统的尼罗红染色方法进行油脂含量测定。通过探索染色前处理和染色条件,优化了布朗葡萄藻的染色方法:藻液摇匀后超声波处理3 min(超声波参数为温度20℃、发射功率100 W、频率40 k Hz),3 000×g离心去除培养基,用体积分数8%的DMSO重悬细胞,调整悬液OD750到0.16,每1 m L样品加入10#L 120μg/m L的尼罗红丙酮溶液(尼罗红质量浓度1.2#g/m L),40℃水浴锅中染色10 min,荧光激发光波长520nm。改进的方法促进了尼罗红与布朗葡萄藻的结合,提高了测定的稳定性和准确度。     

荧光光谱法检测微藻中油脂

研究了尼罗红染色荧光光谱法检测微藻中油脂含量的方法.探讨了染色时间、尼罗红质量浓度、二甲基亚砜体积分数、细胞密度对藻液细胞发射光谱的影响,得到最佳测定条件为:染色时间6min,尼罗红质量浓度0.8 μg/mL,二甲基亚砜体积分数20%,细胞密度(0.248～0.448)×10<'9>个/mL.该研究为规模化筛选高含油量藻株及跟踪产油微藻油脂积累过程奠定了基础.     

裂殖壶菌胞内油脂尼罗红荧光染色快速检测方法的研究北大核心CSCD

为了建立快速检测裂殖壶菌胞内油脂的方法,探讨了尼罗红荧光染色法检测裂殖壶菌油脂含量的检测条件。通过考察裂殖壶菌重悬液中添加二甲基亚砜体积分数、尼罗红染液用量、染色温度、染色时间及细胞密度对荧光强度的影响,确立最优检测条件,进一步考察细胞油脂含量与荧光强度的关系,从而建立尼罗红荧光检测法的定量关系。结果表明,最优检测条件为：每毫升裂殖壶菌重悬液中二甲基亚砜体积分数和尼罗红染液用量分别为25%和15μL,染色温度50℃,染色时间15 min。在最优检测条件下,细胞密度不超过0.218×10^8个/m L范围内,菌液油脂含量（X）与荧光强度（Y）呈现良好的线性关系,其线性关系式为Y=798.55X-3.44,相关系数R2为0.996 4。因此,采用尼罗红荧光染色法可以快速检测裂殖壶菌的油脂含量。     

裂殖壶菌胞内油脂尼罗红荧光染色快速检测方法的研究

为了建立快速检测裂殖壶菌胞内油脂的方法,探讨了尼罗红荧光染色法检测裂殖壶菌油脂含量的检测条件。通过考察裂殖壶菌重悬液中添加二甲基亚砜体积分数、尼罗红染液用量、染色温度、染色时间及细胞密度对荧光强度的影响,确立最优检测条件,进一步考察细胞油脂含量与荧光强度的关系,从而建立尼罗红荧光检测法的定量关系。结果表明,最优检测条件为:每毫升裂殖壶菌重悬液中二甲基亚砜体积分数和尼罗红染液用量分别为25%和15μL,染色温度50℃,染色时间15 min。在最优检测条件下,细胞密度不超过0.218×10~8个/m L范围内,菌液油脂含量(X)与荧光强度(Y)呈现良好的线性关系,其线性关系式为Y=798.55X-3.44,相关系数R2为0.996 4。因此,采用尼罗红荧光染色法可以快速检测裂殖壶菌的油脂含量。     

尼罗红荧光光谱法快速测定解脂耶氏酵母油脂含量的研究

为了建立快速简便检测解脂耶氏酵母油脂含量的方法,探讨了尼罗红-光谱法测定解脂耶氏酵母油脂含量的检测条件。通过研究解脂耶氏酵母最佳发射光波长、细胞密度、尼罗红染液用量、染色时间、不同助溶剂效能及最佳体积分数对荧光强度的影响,确定了最佳检测条件,得到细胞油脂含量与荧光强度的线性关系。解脂耶氏酵母在激发光560 nm、发射光650 nm处有最高荧光值,每毫升菌液加入质量分数为0.1 mg/m L的尼罗红染液20μL,加入体积分数为15%的异丙醇,黑暗染色5 min,在细胞OD600=0~1.3的范围内,菌液的油脂含量(X)与荧光值(Y)呈较好的线性关系,线性关系式为Y=6.3651X+10.097,R2=0.9902,灵敏度达0.0001 g。该方法能够准确地反映出解脂耶氏酵母胞内油脂含量。尼罗红-荧光法可成为一种快速检测解脂耶氏酵母胞内油脂含量的新方法。     

尼罗红-荧光光谱法测定亚心形扁藻油脂含量

尼罗红-荧光光谱法能够快速地对微藻细胞中的油脂含量进行检测,但是该方法对所测微藻物种具有一定依赖性,在分析不同微藻细胞油脂含量前需要对测试条件进行优化。优化后的亚心形扁藻油脂含量分析条件为:藻液800×g离心5 min去除培养基,用体积分数4%的二甲基亚砜(DMSO)水溶液重悬至OD750=0.3,尼罗红质量浓度0.8μg/m L,避光40℃水浴恒温10 min,激发波长520 nm。发现亚心形扁藻在培养的对数生长后期油脂开始积累,稳定期后期油脂含量趋于恒定,优化后的尼罗红-荧光光谱法能够准确地检测亚心形扁藻生长过程中的油脂含量变化。     

雅致放射毛霉蛋白酶的定位及释放研究

文章对腐乳生产菌株雅致放射毛霉蛋白酶的定位及释放进行了研究，结果表明：雅致放射毛霉存在胞外和胞内(或膜)蛋白酶。其中，胞外蛋白酶是松散结合在菌丝上的细胞表面酶，离子溶液和非离子溶液都可以将其释放，但有部分只能在离子溶液中释放；水和盐溶液都可以释放胞内(或膜)蛋白酶。0．3M的NaCL溶液可以作为胞外和胞内(或膜)蛋白酶的提取剂。     

微藻脂类组成及脂肪酸分布的分析技术

微藻具有光合效率高、生长周期短、有可能异养生长等特性, 并含有多种生物活性物质,尤其是 EPA、DHA 等多不饱和脂肪酸含量丰富, 可以作为功能食品的优质生物资源。多不饱和脂肪酸在微藻细胞中主要以脂质的形式存在, 脂类组成及脂肪酸分布信息可以为藻种筛选、不饱和脂肪酸的分离纯化等提供依据。本文综述了高产多不饱和脂肪酸的藻种, 脂质及脂肪酸的萃取方法与分离鉴定技术, 特别对全二维气相色谱法、高压液相色谱法在微藻中的应用进行了阐述。     

基于细胞组学技术提高胶球藻C-169中性脂染色的有效性

本研究基于流式细胞仪、荧光酶标仪、激光共聚焦扫描显微镜等细胞组学分析技术,系统研究了藻液细胞浓度、Nile Red浓度、助溶剂种类和浓度,以及染色温度、染色时间、振荡时间等对检测藻细胞中性脂相对含量(以平均荧光强度表示)的影响,提高了胶球藻C-169中性脂染色的有效性。结果表明,Nile Red荧光染色的最佳藻细胞浓度为106 m L,染料浓度在0.05~0.2μg/m L之间较适宜且不会产生过量的荧光干扰;添加15%~30%(V/V)丙三醇能显著增强染料进入细胞的通透性;25~40℃范围内胶球藻染色后的荧光强度较强但无显著差异(p0.05);染色时间超过10 min及振荡时间超过30 s均未显著提高胶球藻C-169染色后的平均荧光强度。系统优化后的染色方法可从细胞水平上显著提高中性脂荧光检测的精确性,同时为其他微藻采用这一荧光探针快速测定中性脂含量提供了快速有效方法。     

利用玉米秸秆产油脂木霉菌株的筛选

对52株木霉菌株进行尼罗红染色、菌丝油脂提取和纤维素酶、木质素降解酶活力测定,发现一株哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Q2-37为最优菌株.该菌株干菌丝中的油脂含量为(20.5±0.36)％.以玉米秸秆粉为唯一碳源的培养基质上培养Q2-37,每利用100g玉米秸秆粉可以产生(1.188±0.028)g油脂.对受试菌株提取得到的油脂含量进行分析发现,木霉干菌丝的油脂含量范围在(12.6±0.31)％～(20.5±0.36)％.该研究表明,木霉利用植物秸秆生产油脂为生物柴油提供廉价原料是具有潜力的.     

利用流式细胞仪筛选紫外诱变高含油小球藻

为筛选得到高含油的小球藻藻株,对若夫小球藻(Chlorella zofingensis)进行紫外诱变,尼罗红染色后再利用流式细胞仪对高含油藻株进行筛选。结果表明:紫外诱变40 min后,经流式细胞仪筛选,分选出的90%的突变藻株总脂含量都高于野生对照株。最终筛选到的藻株S16经培养总脂产量达到2.4 g/L,比野生对照株提高了50%。     

Image analysis to quantify histological and immunofluorescent staining of ex vivo skin and skin cell cultures

Image processing steps and analysis techniques were developed for the quantification of photomicrographs obtained from light and fluorescence microscopy. The substrates examined were either skin cell cultures, such as normal human keratinocytes (NHK) or fibroblasts, or ex vivo skin sections. Examples of the analyses are provided for the comparison of skincare active ingredient treated samples vs. placebo to demonstrate the utility of the methods to quantify and provide numerical data for a procedure that is typically qualitative in nature and based on observations by a histologist. Quantifiable experiments that are discussed include: Fontana Masson staining for melanin expression; Nile red staining to detect cellular lipid droplets; nuclei staining with diamidino‐phenylindole (DAPI); and immunofluorescent staining of protein expression with a primary antibody directed against the protein (antigen) and a secondary antibody tagged with a fluorescent dye (Alexa Fluor 488) against the primary antibody.     

Preparation and Characterization of Novel Lipid Carriers Containing Microalgae Oil for Food Applications

This work investigated the suitability of lipid carriers as potential encapsulation method to improve the physical and chemical stability of microalgae oil high in docosahexaenoic acid (DHA). Lipid carriers with various oil contents were successfully prepared by a microfluidization method using stearic acid as solid lipid, microalgae oil as liquid lipid, and poloxamer 188 as surfactant. Results show that the mean particle diameter of the lipid carriers was in the range of 300 to 350 nm with the polydispersity index below 0.2. The lipid carriers were found to have spherical shape when examined under the transmission electron microscope. Data from the encapsulation efficiency and loading capacity indicate high distribution of microalgae oil throughout the lipid carriers and good physical stability as reflected by the particle size and size distribution during storage. Furthermore, the lower DPPH scavenging activity of lipid carriers compared with that of free microalgae oil suggests better chemical stability of microalgae oil encapsulated in lipid carriers. The addition of microalgae oil into lipid phase could disturb the crystalline order and form lattice defects to enable encapsulation of DHA as revealed by the results from differential scanning calorimetery. Current results suggest that this type of novel lipid carriers could be an efficient and promising carrier system for delivery of microalgae oil.     

微藻总脂含量快速测定的方法比较

快速、可靠、简便的总脂含量测定方法在富油藻种筛选、功能性藻油评估及微藻生物学研究中至关重要。本研究以三种微藻(微绿球藻Nannochloris sp.、普通小球藻Chlorella vulgaris、绿色巴夫藻Pavlova viridis)藻粉为原料,系统比较了四种方法(Bligh-Dyer法、改良Bligh-Dyer法、ASTM标准法和皂化法)用于测定微藻中总脂含量的差异,并以原位转酯法为对照,进一步分析了各方法总脂提取物中的脂肪酸含量及组成。改良Bligh-Dyer法和ASTM标准法总脂测定结果稳定,脂肪酸回收率最高,三种藻粉中分别为93.65%和93.74%、85.02%和85.77%、88.62%和88.84%;两者总脂含量及提取物中脂肪酸的组成和含量均无显著差异(p0.05)。显然,改良Bligh-Dyer法操作简便、分析时间短(1 h)、所需样品量少(0.25 g),可替代ASTM标准法,作为实验室快速准确测定微藻总脂含量的首选方法。     

抗氧化剂耦合非生物胁迫调控微藻油脂和类胡萝卜素合成的研究进展北大核心CSCD

微藻代谢物产率低的问题制约了微藻的产业化发展,近年来利用抗氧化剂耦合非生物胁迫成为有效解决微藻代谢物产率低的方法之一。为了对微藻在非生物胁迫条件下高效合成油脂和类胡萝卜素提供新的思路,综述了抗氧化剂耦合非生物胁迫调控微藻合成油脂和类胡萝卜素的研究进展,并进一步分析了抗氧化剂调控次级代谢产物合成和微藻细胞抗性的作用机制。抗氧化剂可通过调控微藻细胞内氧化还原平衡、信号转导和相关基因的转录水平,维持微藻生长,促进代谢产物的积累,并缓解氧化损伤。     

微藻油脂合成的转录调控研究进展

生物燃料是传统化石燃料的理想替代品,微藻是生产生物燃料的优良原料,通过对微藻油脂合成和调控的了解,能够有效提高微藻生产生物柴油的效率。转录因子是一种具有特殊功能结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,在复杂的油脂合成代谢过程中,转录因子能对代谢过程中多个酶系进行集体调控,从而促进藻细胞中油脂积累。从微藻油脂的合成途径出发,简要介绍了合成途径中的关键酶,重点综述了bZIP、MYB、Dof、bHLH转录因子对于微藻油脂合成的调控影响。微藻油脂合成涉及多个亚细胞单位的多条途径,是一个十分复杂的代谢网络过程,通过基因工程手段改变合成途径中相关酶的表达可以增加微藻中油脂积累。     

基于高通量培养的胶球藻C-169生物量和油脂积累能力的快速评价

本研究利用CO_2培养箱内48孔板振荡光照培养专利设计的微藻高通量培养体系,结合细胞组学技术,系统评价了氮源和盐度梯度下胶球藻C-169细胞的生长速率、生物量浓度和油脂积累能力。结果表明,该培养体系的均一性和稳定性良好,可实现微藻的高通量及多处理培养。富氮培养基可显著提高胶球藻C-169的细胞生长速率和生物量浓度,缺氮培养基显著驱动了细胞积累中性脂。在含1/4氮的培养基中藻细胞的生物量浓度是4倍氮培养基中的25%,而中性脂含量(平均荧光强度表示)则高达后者的16倍以上。在0~15‰盐度范围内胶球藻C-169的生长状况良好且无显著差异(p0.05),15‰以上盐度藻细胞生长受到明显抑制。10‰盐度下中性脂含量(以平均荧光强度表示)显著高于所有其他组(p0.05),说明该盐度有利于驱动细胞积累中性脂。     

气生微藻Heveochlorella sp. Yu作为生物柴油生产原料的特性研究北大核心CSCD

为了拓展生物柴油原料来源,以气生微藻Heveochlorella sp. Yu为研究对象,通过测定其生长曲线、生物量、油脂产率、沉降率等,对其作为生物柴油生产原料的特性进行研究。结果表明,培养后气生微藻Heveochlorella sp. Yu的生物量为4.14 g/L,油脂含量为39.43%,油脂产率为181.38 mg/(L·d),2 h的自然沉降率为65.28%(可大幅浓缩水体,降低微藻的采收成本)。此外,该微藻能够产生γ-氨基丁酸(GABA),含量为9.50 mg/g。气生微藻Heveochlorella sp. Yu具有成为生物柴油原料的潜力,具有微藻油脂的开发价值。     

The Saccharomyces cerevisiae alcohol acetyl transferase Atf1p is localized in lipid particles

The yeast alcohol acetyl transferase I, Atf1p, is responsible for the major part of volatile acetate ester production in fermenting Saccharomyces cerevisiae cells. Some of these esters, such as ethyl acetate and isoamyl acetate, are important for the fruity flavours of wine, beer and other fermented beverages. In order to reveal the subcellular localization of Atf1p and further unravel the possible physiological role of this protein, ATF1::GFP fusion constructs were overexpressed in brewer's yeast. The transformant strain showed a significant increase in acetate ester formation, similar to that of an ATF1 overexpression strain, indicating that the Atf1p-GFP fusion protein was active. UV fluorescence microscopy revealed that the fusion protein was localized in small, sphere-like organelles. These organelles could be selectively stained by the fluorescent dye Nile red, indicating that they contained high amounts of neutral lipids and/or sterols, a specific characteristic of yeast lipid particles. Purification of lipid particles from wild type and ATF1 deletion cells confirmed that the Atf1p-GFP fusion protein was located in these organelles. Furthermore, a clear alcohol acetyl transferase activity could be measured in the purified lipid particles of both wild type and transformed cells. The localization of Atf1p in lipid particles may indicate that Atf1p has a specific role in the lipid and/or sterol metabolism that takes place in these particles.