产乳酸菌素菌株的筛选鉴定及其特性分析

本实验对广西巴马村天然发酵米粉中的乳酸菌进行分离鉴定,筛选出一株具有抑菌活性的植物乳杆菌M44,并研究了其所产乳酸菌素的基本性质。采用微生物形态学和16S r DNA序列分析法鉴定菌株M44为植物乳杆菌,其发酵上清液具有抑菌活性,抑菌物质确定为蛋白类。采用盐析法粗提所产乳酸菌素,确定最佳硫酸铵沉淀浓度为60%。由乳酸菌素产量与菌株生长的关系实验得出乳酸菌素的最佳收获时间为发酵培养12 h。管碟法抑菌实验表明,该乳酸菌素在p H范围2~8时有良好的抑菌活性;121℃处理15 min后仍具有抑菌活性;胃蛋白酶、胰蛋白酶处理后抑菌性消失;对单核增生李斯特细菌、大肠杆菌、沙门氏菌,金黄色葡萄球菌均有抑制作用。该乳酸菌素为天然生物防腐剂的开发与应用提供了研究基础。     

1株产细菌素植物乳杆菌的筛选及其细菌素抑菌性质研究

从广西巴马地区取样的米粉中共分离出31株乳酸菌,以单核细胞增生李斯特菌为指示菌,采用牛津杯平板扩散法检测抑菌物质,筛选得到1株产细菌素的乳酸菌M23。通过微生物形态学与16S rRNA基因序列分析,鉴定该菌株为植物乳杆菌。植物乳杆菌M23代谢产生的乳酸菌细菌素在p H 2.0~10.0范围内具有良好的抑菌活性,121℃处理15 min的条件下依然具有抑菌活性,表明其具有良好的酸碱稳定性和热稳定性。发酵试验表明,该乳酸菌素的最佳收获时间为乳酸菌培养14 h。抑菌谱试验表明,该乳酸菌素能够有效抑制部分食源性革兰氏阳性、阴性致病菌。     

植物乳杆菌MXG-68所产细菌素的抑菌特性分析

研究乳酸菌细菌素的抑菌特性,为其作为生物防腐剂奠定基础。以酸马奶来源的植物乳杆菌MXG-6所产的细菌素为研究对象,对其抑菌谱、作用方式、相对分子质量及耐受性进行分析。该细菌素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌活性,属于广谱细菌素,作用方式为杀菌,而不是抑菌和溶菌。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-polyacrylamide gels electrophoresis,SDS-PAGE)确定植物乳杆菌MXG-6所产细菌素的分子质量约6 ku。60、80、100、121℃处理30 min及4、-20℃处理30 d对抑菌活性影响不显著(P 0. 05),在pH 1～10均表现出抑菌活性,表明细菌素具有较好的温度耐受性和酸碱耐受性。有机溶剂及表面活性剂对细菌素的抑菌活性基本无影响(P 0. 05),而EDTA有利于提高抑菌活性。细菌素的抑菌特性分析可为更好地实现细菌素的开发及应用提供一定的理论依据。     

产抑菌物质乳酸菌的筛选及其抑菌特性研究

目的 本文旨在筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌,为其在食品保鲜中的应用奠定基础。方法 以MRS和M17为培养基,对韩国传统泡菜中乳酸菌进行分离鉴定,通过琼脂孔扩散法筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌,并分析它的耐酸、耐胆盐能力,以及对温度、pH、发酵时间的敏感性。结果 以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、枯草芽孢杆菌为指示菌进行抑菌活性筛选,获得一株抑菌效果最佳的植物乳杆菌PC4-5。植物乳杆菌PC4-5在酸性条件（pH=2）处理2 h后存活率达到43.79%,0.5%胆盐处理2 h后存活率达到21.02%,说明植物乳杆菌PC4-5具有较好的耐酸、耐胆盐能力。经排酸排过氧化氢试验后,发酵上清依然保留抑菌活性,蛋白酶处理后抑菌活性丧失,表明该抑菌物质为细菌素。该细菌素在pH为2-6的范围有抑菌能力,且有较好热稳定性。结论 植物乳杆菌PC4-5适用于酸性食品的防腐保存,在食品保鲜中的应用有较大的潜力。     

生物保鲜乳酸菌的筛选及其细菌素特性研究

利用牛津杯法从传统泡菜和腊肠中分离的80株乳酸菌中筛选出10株具有较高抑菌活性的乳酸菌.通过排除酸性产物有机酸、过氧化氢干扰及抑菌谱试验,LAB5和LAB55仍表现广谱的抑菌活性;2菌株发酵上清液经蛋白酶K、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶处理后抑菌活性均有降低,其中LAB5对木瓜蛋白酶敏感,因此可以初步判定这2株乳酸菌产生的抑菌物质为细菌素.2种细菌素具有良好的热稳定性,pH值越低抑菌能力越强;2株菌表现良好的产酸能力,经生理生化和16S rDNA鉴定为植物乳杆菌.     

一株产广谱细菌素乳酸菌菌株的分离鉴定及其细菌素特性研究

目的:从母乳婴儿粪便筛选获得产广谱细菌素的乳酸菌菌株,并对其所产细菌素的理化及生物学特性进行研究分析,预测其在食品工业中的应用前景。方法:以课题组从母乳婴儿粪便分离得到的23株乳酸菌为试材,采用牛津杯琼脂扩散法,选取单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和大肠杆菌(Escherichia coli)为指示菌筛选产广谱细菌素的优良菌株。通过菌体形态观察、生理生化特征及16S r DNA序列分析对菌株进行分类学鉴定,并从耐酸、耐热、蛋白酶敏感性、抑菌谱等角度分析菌株所产细菌素生物学特性。结果:分离得到1株产广谱细菌素菌株BL-1,发现该菌株所产细菌素具有较好的热稳定性和酸耐受性,在pH为2、121℃条件下细菌素活性仍然保持稳定,酶敏感性强,胃蛋白酶可将其完全分解,使用安全性较高,且抑菌谱较广,对受试的李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aereu)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌阴性菌均表现出较强抑菌活性。最后该菌株经分类学鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。结论:从母乳婴儿粪便中分离出一株产广谱细菌素鼠李糖乳杆菌BL-1,该菌所产细菌素具有优良的食品加工特性,有作为天然食品防腐剂的巨大应用前景。     

泡菜中1株植物乳杆菌所产细菌素的生物学特性

细菌素是由某些细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的多肽或蛋白类物质,是一种具有安全性、高效性、易降解性的天然抑菌物质。研究从传统乳酸发酵食品泡菜中分离筛选出1株产细菌素的乳酸菌,通过API 50CHL糖酵解、16SrDNA序列分析进行鉴定并命名为植物乳杆菌(Lactobacillum plantarum)PY5-7。实验表明:PY5-7具有对革兰氏阳性菌和阴性菌的广谱抑菌性,并且对链霉蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶表现出不同程度的敏感性。该细菌素的抑菌活性pH范围较广,为pH 2.0~9.0,并分别在70,80,90℃下处理1h后仍具有较高的抑菌活性,具有较好的耐热性和耐酸碱性,在生物食品防腐剂的开发中具有广阔的应用前景。     

腌腊肉中优良乳酸菌的筛选鉴定及初步应用

通过产酸能力、耐低温能力、耐氯化钠能力、耐亚硝酸钠能力、产气产黏液和产广谱抑菌细菌素等试验,从26株分离自腌腊肉的乳酸菌筛选出具有优良发酵特性的菌株R3-1,经生理生化和16S rDNA鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。拮抗试验表明植物乳杆菌R3-1能产生广谱抗菌作用的细菌素,但对同分离来源的木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)P2无拮抗,两者可组合成复合发酵剂。发酵牛肉干初步应用试验表明植物乳杆菌R3-1与木糖葡萄球菌P2组成的复合发酵剂在颜色、香味、质地、味道和接受度方面比单独使用植物乳杆菌发酵或不使用菌种发酵有显著改善(p0.05),表明植物乳杆菌R3-1是潜在的工业用乳酸菌肉品发酵剂菌株。     

植物乳杆菌素研究进展

植物乳杆菌素是植物乳杆菌产生的一类具有抑菌活性的肽类，可以抑制许多革兰氏阳性菌。作者简述了细菌素的分类、植物乳杆菌素的抑菌范围和抑菌机制，并简要介绍了几种植物乳杆菌素的性质。尽管目前植物乳杆菌素还未被批准作为防腐剂在食品中使用，但植物乳杆菌已被广泛地应用到食品工业中，相信不久的将来植物乳杆菌素作为一类理想的天然食品防腐剂，应用前景将十分广阔。     

源自泡菜的植物乳杆菌产新型广谱抑菌细菌素的特性分析

筛选对食源性致病菌和腐败菌有特异性抑制作用的产细菌素乳酸菌菌株,并研究细菌素的特性,为其在食品防腐中的应用提供参考。从分离自泡菜的112 株乳酸菌中反复筛选得到1 株产细菌素（BacH32）菌株（Hlh32）,经鉴定菌株Hlh32为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,其在35 ℃ MRS培养基中发酵至稳定期即18～24 h达到最大BacH32产量（对金黄色葡萄球菌的抑菌活性达到1 850 AU/mL）。通过硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-15凝胶过滤层析、制备型高效液相色谱等方法进行纯化。Trinice十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果显示BacH32分子质量为6.7 kDa,与文献报道的植物乳杆菌细菌素分子质量有显著差异。细菌素BacH32对蛋白酶敏感,而脂肪酶、α-淀粉酶和β-淀粉酶对其无影响,表明BacH32为蛋白质。BacH32在pH 2～9的环境下孵育4 h,在37、60、80、100 ℃保持30 min或121 ℃保持15 min仍能保持较好抑菌活性。细菌素BacH32对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抑菌活性,对真菌也有一定的抑菌活性。向培养至对数初期的金黄色葡萄球菌中添加BacH32,菌体生长完全受到抑制。以上特性表明植物乳杆菌Hlh32合成的细菌素BacH32有潜力作为天然食品防腐剂在食品中使用。     

广谱乳酸菌素的研究

研究的主要目的是筛选产广谱乳酸菌素的乳酸菌菌株,并将其产生的乳酸菌素进行提取和纯化研究。实验从多种材料中筛选出22株乳酸菌,采用牛津杯法选出抑菌活性最高的乳酸菌B9,该菌株经菌种鉴定为植物乳杆菌。乳酸菌B9发酵液的抑菌圈直径为22.19mm,经硫酸铵盐析、透析脱盐、DEAE-52离子柱层析和Sephadex G-25凝胶柱层析后的抑菌圈直径分别为19.54、23.46、25.32、25.76mm。采用高效液相色谱进行纯度检测,得到一个峰,说明该菌株发酵所产细菌素经一系列提取纯化操作后,纯度得到很大提高。此菌株产生的乳酸菌素不仅对革兰氏阴性菌如大肠杆菌有较强抑制作用,而且对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌也有较强的抑制作用,是一种广谱乳酸菌素。     

藏灵菇中乳酸菌的鉴定及细菌素生物特性研究

从藏灵菇中筛选出一株具有抑菌活性的菌株,采用生理生化鉴定、16S rDNA序列分析确定菌种属性,采用硫酸铵沉淀法对该菌所产生的细菌素进行粗提取并对其抑菌活性和稳定性进行研究。结果显示,该菌为植物乳杆菌,除去有机酸和过氧化氢的影响,该菌产生的细菌素具有较好的抑菌活性。该菌所产的细菌素热稳定性较好,在100℃处理30 min抑菌活性降至54%,且对酸碱不敏感,在p H3~9的范围内都具有抑菌活性,在p H为3.82时抑菌活性最佳,对胃蛋白酶、α-凝乳酶有较强的耐受性,对蛋白酶K较敏感,在37℃下处理2 h抑菌活性为处理前活性的47.36%。对植物乳杆菌产细菌素的分析证明该菌产的细菌素在食品加工防腐中具有潜在的使用价值。     

地衣腌菜中产广谱细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

采用滤纸片双层平板法从自制酸奶、市售散装腌菜和袋装榨菜中分离出乳酸菌,再对分离的乳酸菌进行抑菌试验、酸和过氧化氢抑制作用的排除、蛋白酶的敏感检测和抑菌谱测定,最后对所得菌株形态和生理生化特性进行鉴定。结果:从样品中筛选到5株具有较高抑菌活性的乳酸菌菌株,在排除了酸和过氧化氢干扰后,发酵上清液仍有很强的抑菌作用;经蛋白酶处理后,发酵液的抑菌活性显著下降,说明该抑菌物具有蛋白质性质,是一类细菌素。这5株菌对绿脓假单胞杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌均有很强的抑菌活性,并选出抑菌活性最强的菌株E2-2,初步鉴定其为戊糖乳杆菌。     

产细菌素乳酸菌的选育及其抑菌特性的研究

采用牛津杯琼脂扩散法,从实验室保存的乳酸菌中筛选到具有较高抑菌活性的菌株嗜酸乳杆菌A、戊糖片球菌M和戊糖片球菌T,它们产生的抑菌物质经排除酸、过氧化氢后,仍具有抑菌活性,然而经蛋白酶处理后其抑菌活性明显下降,确定其抑菌物质为细菌素,进一步的抑菌实验表明,3株菌所产细菌素具有较宽的抑菌谱,适宜用作生物型防腐剂。     

四川泡菜中乳酸菌的抗菌性研究

乳酸菌在发酵食品中可以降低食品的pH值并产生天然抑菌代谢物,发掘天然抗菌物质已成为当下的研究热点。试验通过对52株从四川泡菜中分离得到的乳酸菌进行抑菌活性筛选,得到10株具有良好抑菌活性的乳酸菌菌株;采用牛津杯法对这10株乳酸菌的抗菌能力与代谢产物酸度之间的关系进行了研究,并比较了其代谢产物分别对细菌和产璞酵母的抑菌能力大小;对乳酸菌的抗菌机理进行了初步探讨。结果显示:对于同一种指示菌,乳酸菌的代谢产物总酸度越高,其抑菌能力越强;将代谢产物总酸中和至pH 7.0后,仅1株乳酸菌L7仍具有抗菌特性,其抗菌能力明显下降;同种乳酸菌对细菌的抗菌作用较强,对酵母菌几乎无抑制作用。经鉴定L7为植物乳杆菌,其代谢物对细菌和产璞酵母均有良好的抑制作用,在泡菜发酵中起重要作用。     

一株产广谱细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

为获得产广谱细菌素的乳酸菌,采用经典的乳酸菌筛选法及16S rRNA基因序列测定法,从传统酸白菜中分离乳酸菌并进行菌种鉴定,从蛋白酶稳定性、热稳定性、pH值稳定性和抑菌谱4个方面分析抑菌物质的生物学特性。结果表明,从传统酸白菜中分离出1株产抑菌活性物质的乳酸菌SY5,经鉴定为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。将发酵上清用蛋白酶K和胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失,表明抑菌活性物质具有蛋白质性质,确定为细菌素。生物学特性分析表明,该细菌素在120℃热处理30 min后仍保留82.7%的抑菌活性,pH值范围为2～7。抑菌谱测定结果表明,该细菌素对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较好的抑制效果,具有广谱抑菌活性。     

产细菌素乳酸菌的鉴定及其特性研究

从婴儿粪便中分离获得能够产生抑菌活性物质的乳酸菌,通过排除有机酸、过氧化氢的干扰试验,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性;通过蛋白酶K和胰蛋白酶试验,证明该菌株产生的抑菌活性物质具有蛋白质性质,是一种细菌素.初步提纯该细菌素,其抑菌活性较适pH范围为2～4,120℃热处理30 min后仍有70%的抑菌活性.经Trcine-SDS-PAGE试验分析该细菌素分子质量为4kDa.抑菌谱测定结果表明,该细菌素不仅对革兰氏阳性菌(单增李斯特氏菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等)有抑制作用,而且还抑制革兰氏阴性菌(大肠杆菌、沙门氏菌、恶臭假单胞菌、福氏志贺氏菌等),具有广谱的抑菌作用.通过菌落形态、生理生化特性试验和16S rRNA基因序列分析,鉴定该乳酸菌为植物乳杆菌,命名为Lactobacillus plantarum ZJ317.     

抑制青霉菌乳酸菌的分离、鉴定及抑菌物质分析

目的：从市售酱菜中筛选具有抑制青霉菌活性的乳酸菌,测定其对酱菜中主要霉菌及产毒真菌的抑菌效果,分析乳酸菌抑制青霉菌的有效成分,并对乳酸菌进行分子生物学鉴定。方法：采用双层平板法对酱菜中具有抑制青霉菌活性的乳酸菌进行筛选,打孔法测定其抑制青霉菌作用,并采用蛋白酶消化、调节pH值、热处理等方法分析抑菌物质的有效成分,采用16S rDNA聚合酶链式反应扩增后测序对乳酸菌进行鉴定。结果：从酱菜中筛选出的14 株乳酸菌中,其中3 株对酱菜中分离的青霉菌及2 株产毒真菌的生长有较明显的抑制作用,不同蛋白酶处理、pH值调节对乳酸菌发酵浓缩液的抑菌活性会有不同影响,但是3 种加热处理并不改变抑菌效果。3 株乳酸菌经鉴定分别为：弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）、清酒乳杆菌（Lactobacillus sake）、植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）。结论：从酱菜中分离的乳酸菌对酱菜中青霉菌及某些产毒霉菌的生长有明显抑制作用,推测其抑菌成分可能为小分子肽和/或有机酸。     

植物乳杆菌LZ222细菌素的分离纯化及其特性

从新鲜牛奶中分离筛选出一株有抑菌活性的乳酸菌,经形态学观察、生理生化分析及16S rDNA基因序列同源性分析,鉴定该菌为植物乳杆菌,命名为LZ222。在排除有机酸、过氧化氢对该菌发酵上清液抑菌活性的干扰试验后,发现其仍有明显的抑菌活性;而将发酵上清液用蛋白酶K和胰蛋白酶处理后,其抑菌活性几乎丧失,说明该菌产生的抑菌活性物质具有蛋白质性质,初步确定是一种细菌素。理化性质分析表明:这种细菌素具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,可被人体内蛋白酶降解。通过Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳分析该细菌素分子质量为4.6 ku的小分子多肽。     

传统发酵牦牛酸乳中细菌素产生菌的筛选与鉴定

从西藏羊八井地区、云南香格里拉的传统牦牛酸乳中分离出26株乳酸菌,以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及酿酒酵母为指示菌。采用牛津杯双层琼脂扩散法检测菌株的抑菌谱大小,并经过有机酸排除、过氧化氢排除、蛋白酶水解检测试验,最终筛选得到5株产细菌素的菌株,编号分别为3、23、24、21和25。通过微生物形态学与16SrDNA序列同源性分析,鉴定这些菌株分别为干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳酸乳球菌乳球亚种。抑菌谱试验表明,这些细菌素能够抑制部分食源性革兰氏阳性菌和阴性致病菌,对真菌无抑菌活性。