碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备抗氧化多肽

为优化碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白制备抗氧化多肽的条件,采用响应面分析法,以·OH清除率为响应值,研究酶解温度、酶用量、酶解p H值对制备抗氧化肽的影响。此外,还研究了不同分子质量魔芋多肽的抗氧化活性,结果表明:最佳酶解工艺参数:底物质量分数2.25%、温度55℃、酶用量3 228 U/g底物、p H 7.84、水解时间270 min。该条件下抗氧化多肽(18.35 mg/m L)的·OH清除率为73.41%,多肽得率为75.37%。通过Sephadex G-25和Sephadex G-15串联柱分离得到5个多肽组分,其中分子质量为1 500 u和1 000 u的组分抗氧化活性较高,其清除DPPH·的IC50分别为2.82 mg/m L和3.65 mg/m L;清除·OH的IC50分别为9.03mg/m L和14.16 mg/m L;抑制大鼠肝脏自发性脂质过氧化的IC50分别为0.21 mg/m L和0.66 mg/m L;抑制大鼠红细胞H2O2诱导氧化溶血的IC50分别为0.11 mg/m L和0.22 mg/m L。     

草鱼源抗氧化肽的响应面法优化制备及活性评价

用5种蛋白酶(木瓜蛋白酶、Neutrase 1.5MG、菠萝蛋白酶、PTN6.0及Alcalase 2.4L)分别酶解草鱼肉糜制备抗氧化肽,发现酶解产物对DPPH自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除力最强的分别是木瓜蛋白酶(IC50=2.66±0.41mg/mL)、Alcalase 2.4L(IC50=1.81±0.44mg/mL)及PTN6.0(IC50=8.57±0.32mg/mL)的酶解产物.将此三种酶进行复配,进一步用响应面分析法优化得到抗氧化肽的最佳制备条件为:酶浓度[E/S]=0.68 × 103U/g蛋白,酶解时间为3.83h,酶解温度为51.41℃,模型预测该条件下羟自由基清除力的IC50值为146.22μg/mL,而实际测定值为155.89±11.21μg/mL,与预测值吻合,且在最优条件下所得的酶解物具有较强的小鼠离体肝脂质过氧化抑制力及还原力.     

棉籽肽的制备工艺、抗氧化活性及部分特性研究

以水解度(DH)及DPPH·清除率为考察指标,利用单因素实验和正交实验探讨碱性蛋白酶酶解棉籽蛋白制备棉籽肽的最佳工艺条件。以VC为对照研究了棉籽肽的总还原力、对·OH及O-2·的清除作用及部分特性。结果表明,棉籽肽的最佳制备条件为:反应时间180 min,p H 9.5,温度55℃,底物质量浓度3.00 mg/m L,碱性蛋白酶加酶量50 U/m L。在最佳条件下,棉籽肽的DPPH·清除率为63.42%,DH为85.90%。棉籽肽的·OH及O-2·清除率均随其质量浓度增大而增强,半数抑制浓度(IC50)分别为0.044 mg/m L和0.046 mg/m L,且均强于VC。棉籽肽总还原力与其质量浓度呈剂量依赖关系,稍弱于VC。棉籽肽等电点约为p H 2,不同p H下,棉籽肽的·OH清除率均在60 min时达到最大,但在不同温度下,棉籽肽·OH清除率随时间变化不大,60℃时达到最大值。     

蛋清肽的工艺优化、抗氧化作用及特性

以对DPPH自由基清除率为考察指标,筛选适宜蛋清肽制备蛋白酶。研究酶活、温度、蛋清含量及pH值对蛋清肽清除DPPH自由基的影响,利用正交试验探讨制备蛋清抗氧化肽的最佳工艺;以抗坏血酸(VC)为对照,研究蛋清肽总还原力大小、对羟自由基、超氧阴离子自由基的清除作用及对脂质过氧化的抑制作用;研究蛋清肽的部分特性。结果表明:风味蛋白酶适宜蛋清肽的制备,酶解时间选择90 min。最佳工艺为:pH 5,45℃,蛋清体积分数8%,酶活1 125 U。此条件下对DPPH自由基清除率为53.273%。蛋清肽对羟自由基(0.308 4～1.542 mg/mL)、超氧阴离子自由基(0.089～0.443 mg/mL)具有一定的清除能力,清除率随其质量浓度的增大而增加,且具有一定的还原力。对羟自由基,VC的IC50=0.092 mg/mL,蛋清肽IC50=1.24 mg/mL,对超氧阴离子自由基,VC的IC50=0.021 6 mg/mL,蛋清肽的IC50=0.054 mg/mL。在0.667～10.667 mg/mL范围内,蛋清肽对脂质过氧化的抑制作用随其质量浓度增加而减小,在0.667～10.667μg/mL范围内反而具有促进脂质过氧化作用。蛋清肽等电点在pH 3左右,其对羟自由基清除率随温度增加逐渐下降;在pH 2～10范围内,其溶解度几乎成线性增加。     

金枪鱼皮胶原蛋白肽分离纯化工艺的研究

采用超滤法、凝胶层析柱法、离子交换法、高效液相分析法等研究金枪鱼皮胶原蛋白肽(TSCP)的分离纯化工艺。结果表明:通过超滤分离分子量越低TSCP组分DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率越高,且分子量小于3kDa的TSCP-IV组分的清除率最高,IC50值分别为0.17,0.20,1.64mg/mL。对TSCP-IV进行Sephadex G-25凝胶柱过滤层析后得到4个峰,峰GP-I的得率较高,且峰GP-I对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子的清除率较高,IC50值分别为50.01,86.56,623.75μg/mL。将凝胶过滤组分GP-I经离子交换柱用不同pH值溶液梯度洗脱后得到4个峰,pH 5.61时的洗脱峰IP-II的得率较高,且IP-II对DPPH·自由基、·OH自由基、超氧阴离子清除率较高,IC50值分别为21.59,20.28,121.23μg/mL。用高效液相色谱分析表明,IP-II为纯度较高的金枪鱼皮胶原抗氧化肽段。     

猪睾丸蛋白酶解抗氧化肽工艺优化及抗氧化研究

采用中性蛋白酶酶解猪睾丸蛋白制备抗氧化肽。以还原力为指标,通过正交实验设计,确定了酶解猪睾丸蛋白制备抗氧化肽的工艺条件:底物质量浓度8%,起始pH7.0,酶用量360U/g(新鲜猪睾丸),温度37℃,时间90min,相应指标还原力0.997。通过体外抗氧化活性的研究,发现猪睾丸抗氧化肽对.OH、H2O2、DPPH.和卵黄脂蛋白的IC50分别为0.47、0.56、0.86、0.42g/L。     

响应面优化鱼鳔胶原肽制备工艺及其抗氧化活性研究

鱼鳔富含胶原蛋白,营养价值高,但目前对鱼鳔的加工利用不足,造成资源浪费、环境污染。以草鱼鱼鳔为原料,以DPPH自由基清除能力为评价指标,通过单因素和响应面实验优化酶解鱼鳔胶原蛋白制备抗氧化活性肽的最佳工艺,并研究其体外抗氧化活性。结果表明:抗氧化活性肽的最佳制备工艺为,以风味蛋白酶为酶制剂,酶解时间79.34 min,料液比为3.09∶100(g∶m L),酶添加量为6 343.43 U/g,在此条件下制备的鱼鳔胶原肽的DPPH自由基清除能力达79.98%。鱼鳔胶原肽清除DPPH自由基、羟自由基的IC50分别为8.05 mg/m L和3.54 mg/m L,并且具有较强的还原力。因此,鱼鳔胶原肽具有较强的抗氧化活性,草鱼鱼鳔是制备抗氧化活性肽的良好原料。     

鸡骨胶原蛋白肽抗氧化性的研究

选取具有代表性的·OH、DPPH·、O2·三种自由基体系和铁离子还原体系,以不同浓度鸡骨胶原蛋白肽的抗氧化作用作为指标,评价鸡骨胶原蛋白肽的抗氧化性能。结果显示：鸡骨胶原蛋白肽对三种自由基都具有明显的清除作用,在相应浓度范围内,·OH 最大清除率为99.74%,半抑制浓度IC50 为 4.85mg/ml;DPPH·最大清除率为80.24%,IC50= 32.06μg/ml;O2·最大清除率为53.71%,IC50=16.48μg/ml。同时,对铁离子还具有显著的还原能力。     

藤椒油体外抗氧化活性研究

以冷榨藤椒油和溶剂萃取的藤椒油为原料,采用体外抗氧化实验研究其抗氧化能力。以BHT和VC为阳性对照,通过测定两种藤椒油还原力、对·OH、DPPH·、O-2·清除率,探讨藤椒油的抗氧化能力。结果表明,冷榨油和溶剂油的还原能力随其质量浓度的增加而增强,对·OH、DPPH·、O-2·清除率随质量浓度的增加而增大;溶剂油对·OH、DPPH·的清除率高于同质量浓度的冷榨油;冷榨油对·OH、DPPH·、O-2·的IC50值分别为4.0675、10.3052和0.5415mg/m L;溶剂油对·OH、DPPH·、O-2·的IC50值分别为1.9606、2.9465和1.6053mg/m L。当溶剂油质量浓度达到9mg/m L时,对·OH清除率达到89.79%,其清除效果高于1mg/m L VC对·OH(清除率71.82%)清除效果;当溶剂油质量浓度达到11mg/m L时,对DPPH·清除率达到86.87%,远高于1mg/m L BHT清除率(44.51%)。     

狭叶荨麻醇提物的体外抗氧化及抗炎活性

为了开发利用狭叶荨麻资源,本研究以狭叶荨麻为原料,对其醇提物的体外抗氧化及抗炎活性进行了研究。在单因素试验的基础上,采用响应面法对提取条件进行了优化,得到最佳提取条件为提取时间114 min、料液比1:15、乙醇浓度为64%,所得醇提物得率(10.00±0.26)%,该狭叶荨麻醇提物中活性物质含量总酚(160.77±0.01)mg/g、总黄酮(366.85±0.05)mg/g、原花青素(7.81±0.01)mg/g、皂苷(516.76±0.04)mg/g、生物碱(2.01±0.02)mg/g。在优化条件下进行了提取,分别采用抗坏血酸(Vc)、双氯芬酸钠作抗氧化、抗炎阳性对照,对所得狭叶荨麻醇提物进行总还原力、清除DPPH·、清除·OH及抑制透明质酸酶、抑制白蛋白变性活性评价。该狭叶荨麻醇提物总还原力高于Vc,且量效关系比Vc更明显(p0.001),EC50为0.04 mg/m L;清除DPPH·、清除·OH活性比Vc好,IC50分别是0.02 mg/m L、1.87 mg/m L;抑制透明质酸酶、抑制白蛋白变性活性与双氯芬酸钠相近,IC50分别是2.43 mg/m L,0.31mg/m L。     

全缘栝楼多糖及提取物不同极性部位抗氧化研究

研究全缘栝楼多糖和提取物不同极性部位体外抗氧化活性。采用清除羟自由基(OH·)、[2,2'-连氨-(3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸)二氨盐]自由基(ABTS+·)、DPPH测定法以及Fe3+还原/抗氧化能力(FRAP)法,评价全缘栝楼多糖和提取物不同极性部位的抗氧化能力。全缘栝楼多糖和提取物不同极性部位清除DPPH·能力均强于抗坏血酸(IC50=1.22 mg/m L),且多糖(IC50=0.030 mg/m L)和乙酸乙酯层(IC50=0.082 mg/m L)比茶多酚强(IC50=0.118 mg/m L);多糖(IC50=0.031 mg/m L)清除OH·能力比茶多酚(IC50=0.032 mg/m L)和抗坏血酸(IC50=0.044 mg/m L)强,而石油醚层(IC50=0.033 mg/m L)和乙酸乙酯层(IC50=0.038 mg/m L)强于抗坏血酸;清除ABTS+·能力均强于茶多酚(IC50=0.416 mg/m L),且多糖(IC50=0.008 mg/m L)强于抗坏血酸(IC50=0.011 mg/m L);Fe3+还原/抗氧化能力均强于茶多酚(FRA P=1 310.8μmol/g),但比抗坏血酸弱(FRAP=31 469μmol/g)。全缘栝楼多糖和提取物不同极性部位有较强的抗氧化能力,为其生物活性的深入研究提供了参考依据。     

林蛙低聚肽的体外抗氧化与ACE抑制作用

以林蛙为原材料,通过酶解获得林蛙低聚肽,测定了其相对分子质量分布,又从DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基和还原能力四个方面对其抗氧化作用较全面的进行了评价;另外从林蛙低聚肽对血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的抑制作用对其降血压活性进行了分析;结果显示:林蛙低聚肽的相对分子质量分布大多为1000Da以下(高达85%),其中140～500Da之间的小肽最多(约占52%)。三种自由基半抑制浓度(IC50)分别为:2.3mg/m L、3mg/m L和15mg/m L;浓度为5mg/m L时还原能力与VC浓度0.03mg/m L相当;另外其ACE抑制活性实验中IC50值为0.5mg/m L,林蛙低聚肽的抗氧化能力和ACE抑制活性与浓度都呈现正相关。证明了林蛙低聚肽具有良好的抗氧化作用和ACE抑制能力,为下一阶段相关功能肽段的筛选、纯化奠定良好的基础,为相关抗氧化和降血压等保健类食品的开发利用提供一定的理论依据。     

风味蛋白酶酶解桑葚制备抗氧化肽的工艺研究

利用风味蛋白酶酶解桑葚粉制备抗氧化肽。以多肽得率和DPPH·清除率为指标,在单因素试验的基础上通过响应面法优化酶解工艺。结果表明：最佳酶解条件为酶解温度54℃、pH 6.95、酶解时间4.25 h、酶添加量8%(以桑葚蛋白质量计)、料液比30∶1(g/L),在此条件下桑葚多肽得率为16.76%±0.58%、DPPH·清除率为62.45%±0.93%,制得的桑葚抗氧化肽具有较好的抗氧化活性。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

响应面优化酶法提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及抗氧化活性测定

研究胰蛋白酶提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及体外抗氧化活性,并与水提法和碱提法的多糖进行比较。在单因素试验基础上以响应面法优化酶法提取多糖的工艺,结果显示最佳工艺条件为:酶解温度55℃、料液比1∶40(g/mL)、酶解时间4 h、加酶量2.5%,此时虎斑乌贼肌肉多糖得率为4.15%,优于水提法和碱提法的多糖得率。体外抗氧化活性研究表明酶法提取的多糖比碱提和水提的多糖具有更好的抗氧化活性,当多糖质量浓度为4 mg/mL时,水提、碱提和酶提虎斑乌贼肌肉多糖对·OH的清除率分别为50.15%、55.14%和89.47%,其IC50值分别为4.51、3.56 mg/mL和0.82 mg/mL;对DPPH自由基的清除率分别为28.89%、31.48%和40.80%,其IC50值分别为16.66、15.43 mg/mL和11.50 mg/mL;对O2-·的清除率分别为75.43%、81.63%和97.00%,其IC50值分别为1.15、0.69 mg/mL和0.29 mg/mL;还原力大小分别为0.134、0.156和0.193。综合分析表明,酶提法得到的多糖得率较高且具有较好的体外抗氧化活性。     

麻疯树籽壳乙醇提取物的抗氧化活性研究

本实验以麻疯树籽壳乙醇提取物中黄酮质量浓度为内标,以维生素C(VC)和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)为对照,通过超氧阴离子(O-2·)、1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH·)和亚硝酸盐(NO-2)的清除能力,以及还原力和总抗氧化能力的测定,评价了麻疯树籽壳乙醇提取物的抗氧化活性。实验结果表明,麻疯树籽壳乙醇提取物的O-2·清除率的半数抑制浓度(IC50)为0.502mg/m L,小于VC的0.654mg/m L;其DPPH·与NO-2清除率的IC50分别为0.185、0.494mg/m L,均小于BHT;麻疯树籽壳乙醇提取物中黄酮质量浓度在0.7~1.0mg/m L时,其还原力与同质量浓度VC相当,大于BHT;在测定范围时,其总抗氧化能力随质量浓度增加而增强,且大于同质量浓度的BHT,而小于VC。由此说明,麻疯树籽壳乙醇提取物具有较强的抗氧化活性。     

米糟蛋白酶解制备生物肽及其抗氧化活性的研究

为了高值化利用米糟资源,以米糟蛋白为原料通过酶解法生产一种高效、低毒的天然米糟抗氧化肽。实验结果表明:7种蛋白酶中,中性酶为最佳酶选,其最佳酶解条件为:米糟蛋白质量浓度(S)为10g/100mL,中性酶浓度(E/S,质量分数)为8%,pH为6.0,温度为60℃,时间为30min。在该最佳酶解条件下,米糟生物肽的得率为18.50%,水解度为2.84%,DPPH.(1,2-二苯代苦味肼基自由基)清除率为90.10%。该米糟生物肽具有较强的DPPH和羟自由基清除能力,其IC50值(抗氧化活性为50%时所对应的米糟生物肽质量浓度)分别为1.136、0.169g/L,还具有较强的还原能力和Fe2+螯合能力(IC50值为2.127g/L)。由此得出,米糟蛋白是一种很好的米糟抗氧化肽生产原料,且该生物肽是一种较为理想的天然抗氧化剂产品。     

酶解麦胚制备风味活性肽的研究

为提高小麦副产物综合利用附加值,研究采用风味蛋白酶酶解麦胚制备风味活性肽,以感官评分和麦胚肽得率为衡量指标优化酶解工艺,测定酶解物中风味物质含量、肽分子量分布及其体外抗氧化活性。结果表明,麦胚最佳酶解条件为pH7,底物浓度2%,酶解温度50℃,酶添加量4%。此时,麦胚肽得率为（8.17±0.70）%,酶解物具有一定咸鲜滋味并伴有清淡香气。麦胚酶解物中挥发性物质以烃类、酸类和醇类物质为主;呈鲜物质主要为天冬氨酸、5''-鸟嘌呤核苷酸和琥珀酸;肽分子量主要分布小于3 000 Da,其DPPH自由基清除率、ABTS＋自由基清除率和羟自由基清除率的IC50值分别为10.327、0.448、0.574 mg/mL,具有较好的体外抗氧化活性。     

不同酶法辅助提取紫山药皮薯蓣皂苷及其抗氧化活性研究

以紫山药皮为实验材料,对比分析了纤维素酶和果胶酶对紫山药皮薯蓣皂苷的提取效果,并在单因素实验结果基础上采用正交实验对纤维素酶提取紫山药皮薯蓣皂苷的工艺进行优化。结果表明,最佳提取工艺为加酶量2.0%、料液比1∶10 g/m L、提取时间60 min、酶解温度40℃,此条件下紫山药皮薯蓣皂苷的平均得率为(8.77±0.89)mg/100 g。体外抗氧化实验中,紫山药皮薯蓣皂苷表现出明显的抗氧化能力,对DPPH自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的半数抑制率浓度IC50分别为0.276 mg/m L和0.430 mg/m L,清除能力略弱于维生素C。     

超声波预处理对鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的影响

采用超声波对鹰嘴豆蛋白进行预处理,研究超声波参数对鹰嘴豆蛋白抗氧化肽活性的影响规律。以还原力、·OH清除率和水解度为指标,设计Box-Behnken试验,考察超声波功率、超声时间、超声温度对鹰嘴豆蛋白酶解产物水解度及抗氧化活性的影响。结果表明,超声波预处理优化工艺参数为超声波功率750W,超声时间28min,超声温度48℃;鹰嘴豆酶解产物的·OH清除率、还原力、水解度分别为95.97%、1.73、25.04%,与理论预测值95.20%、1.75、25.41%误差均在±1%以内,表明采用响应面方法(RSM)优化的工艺条件参数准确、可靠,所建立的预测模型在实践中可行。与未经超声波预处理的比较,·OH的半清除质量浓度IC50值从10.58g/L降到8.81g/L;当多肽质量浓度为12g/L时,还原力从1.46增加到2.16;水解度从20.03%增加到25.04%。超声波预处理能提高鹰嘴豆蛋白的酶解效率和抗氧化活性。