木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性研究

目的:研究木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物的抗氧化特性.方法:测定不同酶解时间下的酶解液的抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性.结果:在酶用量6 000 U/g 底物、底物质量分数3%、pH7.5、温度55℃的酶解条件下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,0H·清除率55.43%,O2-·清除率64.23%,DPPH·清除率79.32%,总抗氧化能力98.74%单位/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照,木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子质量主要集中在1321～607 Da,该分子质量片段活性多肽对0H·的清除率为42.26%,对02-·的清除率为57.33%,对DPPH·清除率为74.43%,总抗氧化能力88.43单位/mL.结论:木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白210 min时酶解液的抗氧化活性较高,抗氧化活性多肽分子质量主要集中在1 321～607 Da之间.     

大豆降血压活性肽和抗癌活性肽的制备研究

以大豆分离蛋白为原料,用7种不同的蛋白酶对其进行水解,得到大豆肽,在水解不同时间时测定大豆肽的血管紧张素转换酶(ACE)抑制率和胃癌细胞生长抑制率.结果表明,碱性蛋白酶制备的大豆肽ACE抑制率最高,其制备大豆降血压活性肽的最优条件为:反应温度55℃,pH 9.0,底物质量分数8%,酶添加量8 000 U/g,酶解时间5 h.木瓜蛋白酶制备的大豆肽胃癌细胞生长抑制率最高,其制备大豆抗癌活性肽的最优条件为:酶解温度55℃,酶添加量7 000 U/g,pH 7.5,底物质量分数6%,酶解时间4 h.     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽研究

以水解度为指标,对碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白条件进行优化;测定不同酶解阶段及不同分子质量魔芋多肽的ACE抑制活性,筛选具有高ACE抑制活性的降血压多肽。结果表明:在底物质量分数2.25%,加酶量3 500 U/(g底物),温度55℃,pH 7.82的条件下酶解270 min,酶解产物的ACE抑制率达到最大值94.6%,此时水解度9.97%,多肽得率12.26%;酶解液经浓缩、干燥得到的魔芋多肽粉呈淡黄色,多肽含量52.62%,粗蛋白含量62.30%;用葡聚糖凝胶G-25和葡聚糖凝胶G-15串联柱分离得到2个具有高ACE抑制活性的多肽组分,其分子质量分别为1 500和1 000 Da,半抑制质量浓度分别为0.12 mg/mL和0.088 mg/mL。     

酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺优化

为获得优质的核桃蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备原料及优化其制备工艺,采用连续提取法从脱脂核桃粕中依次分离出清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白-1和谷蛋白-2 5种组分蛋白,测定5种组分蛋白的占比及ACE抑制率,以ACE抑制率最大的组分蛋白作为原料采用酶解法制备ACE抑制肽,在筛选出最适酶解用酶基础上,采用单因素试验与响应面试验优化酶解制备核桃蛋白ACE抑制肽的工艺。结果表明：5种组分蛋白中谷蛋白-1占比仅次于谷蛋白-2,且其ACE抑制率最高,以核桃谷蛋白-1为原料,在筛选出胃蛋白酶作为酶解用酶基础上,经工艺优化得到最优的酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺条件为酶解温度46℃、酶解时间6 h、酶用量4.2%(以底物质量计)、酶解pH 1.6,在该条件下所得核桃谷蛋白-1酶解液的ACE抑制率为(50.08±2.34)%。因此,核桃谷蛋白-1经胃蛋白酶酶解可生产ACE抑制活性较高的核桃多肽。     

响应面法优化核桃降压肽的酶解工艺研究

本研究以低温脱脂核桃粕为原料,采用碱溶酸沉提蛋白后,分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶制备核桃多肽,以血管紧张素转化酶(Angiotensin-I-Converting Enzyme,ACE)抑制率和水解度为指标,选出酶解效果最好的酶,并且对其底物质量浓度、加酶量、酶解温度、酶解时间和p H进行单因素实验,在此基础上采用响应面实验优化其制备核桃降压肽的最佳水解工艺。结果表明:在底物质量浓度30g/L、加酶量8000U/g、酶解温度57℃和p H8.6的条件下水解3h,ACE抑制率可达64.32%,此时酶解液的水解度为21.57%。     

Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

以核桃分离蛋白(WPI)为原料,利用Alcalase 2.4L酶解制备高活性的ACE抑制肽.以水解度和ACE抑制率为指标,通过单因素和二次回归正交旋转组合试验,优化了Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺.得到的最佳酶解工艺条件为pH 7.94,酶解温度60℃,底物质量浓度20g/L,酶与底物质量比3.69∶100,酶解3h后,酶解产物的水解度达到24.78％,ACE抑制率达到76.58％,且在此条件下获得的ACE抑制肽具有一定的抗体内消化酶特性.     

木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的条件优化

用木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶解,制备大豆抗癌活性肽,并对其细胞生长抑制率、水解度和木瓜蛋白酶的最优作用条件进行研究。结果表明：在整个酶解过程中,大豆抗癌活性肽都具有明显的抗癌作用,但水解度与大豆抗癌活性肽的细胞生长抑制率之间不呈线性关系。底物质量浓度、酶用量、酶解温度、酶解时间和反应pH值都影响大豆抗癌活性肽的细胞生长抑制率。木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的最优酶解条件为：底物大豆抗癌活性肽的浓度6g/100mL、酶用量7000U/g、酶解温度55℃、酶解时间4h、反应pH7.5,在此条件下得大豆抗癌活性肽细胞生长抑制率为28.13%。     

条斑紫菜蛋白酶解物降血压活性

研究了以条斑紫菜为原料,采用木瓜蛋白酶制备紫菜蛋白活性寡肽,以ACE抑制率为评价指标,研究不同水解条件下酶解液的降血压活性,优化酶解工艺条件并测定酶解物的分子量。优化后的木瓜蛋白酶酶解工艺条件为pH7.5,温度50℃,底物浓度30 mg/mL,酶添加量600 U/g,在此条件下,水解4 h的酶解产物抑制活性达30%以上,ACE抑制肽的半抑制浓度IC50值为4.48 mg/mL。将制备的酶解液进行层析分析,测得具有降血压活性的紫菜蛋白酶解产物是相对分子质量小于2 000的活性肽。     

龙须菜蛋白的提取工艺优化及降血压组分制备

目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分。方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制肽,并考察其ACE抑制率。结果 最佳酶解工艺条件为:pH 8.4、底物浓度18%、温度55℃、酶底比2.0%、碱性蛋白酶酶解3 h,酶解液的蛋白提取率为(19.54±0.56)%、ACE抑制率为(91.12±0.17)%;将酶解液分别通过10、5、1 kDa超滤膜,利用ACE抑制率来验证降血压活性, 1 kDa超滤膜的酶解液ACE活性最高,达到(71.37±0.22)%。结论 龙须菜可作为分离纯化制备龙须菜降血压肽的优质资源。     

酶解核桃蛋白制备降血压肽的工艺优化

以蛋白质含量为88%的核桃蛋白为试验原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解,采用酶解产物血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为检测指标。考察酶解温度、p H值、加酶量以及底物浓度这4个因素对酶解产物ACE抑制率的影响,通过响应面优化试验,重复3次验证性试验,最后确定酶解的最佳工艺条件酶解温度、p H值、加酶量、底物浓度分别为:55℃、9.0、7 300 U/g、2.7%,酶解物的ACE抑制率平均可达60.23%。经超滤分离,得到小于3 k Da分子量的核桃降压肽,IC50值最低为0.389 3 mg/m L,其ACE抑制活性最高。     

酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的研究

利用木瓜蛋白酶酶解核桃分离蛋白制备小分子活性肽,并研究了不同分子量段核桃小分子肽的抗氧化性能。通过单因素实验和正交实验,确定了木瓜蛋白酶制备抗氧化肽的最佳酶解条件为:pH8.5,温度50℃,酶与底物浓度之比[E]/[S]=3:100,底物浓度[S]=3.5g/100mL,酶解时间5h。用截留分子量分别为3kDa和10kDa的超滤膜将核桃粗肽液分离成<3kDa、3～10kDa及>10kDa3个分子量段,并对不同分子量段核桃多肽的抗氧化性进行了研究,结果表明,分子量<3kDa的核桃多肽的抗氧化性大于其他两个分子量段。     

木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的研究

以大豆分离蛋白为原料,以细胞生长抑制率为指标,用木瓜蛋白酶对其进行酶解,得到大豆抗癌活性肽。木瓜蛋白酶的最佳作用条件为:温度55℃、酶添加量7 000 U/g、反应pH 7.5、底物质量分数6%、酶解时间4 h。在抗癌活性肽制备过程中,对水解度和肽活性之间的关系进行了研究。结果表明,水解度与大豆肽的抗癌活性不呈线性关系。用10 000 u和5 000 u的超滤膜处理木瓜蛋白酶的酶解产物,在不同分子质量的超滤组分中,分子质量小于5 000 u组分的癌细胞生长抑制率最高,达32.58%。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

酶法制备阿拉斯加鳕鱼降压肽的工艺优化及其产物的结构鉴定

以体外血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为指标,筛选出制备阿拉斯加鳕鱼降压肽的最优酶。本研究通过正交实验以及单因素优化实验确定了阿拉斯加鳕鱼降压肽的最优酶解工艺,考察了最优工艺降压肽的氨基酸含量与分子量分布范围。结果表明:在菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶6种蛋白酶中,经胰蛋白酶酶解得到的降压肽ACE抑制率最高,为68.48%,其中影响胰蛋白酶活性大小的因素依次为温度、酶与底物质量比、料液比、pH和时间,最优酶解温度40℃,酶与底物质量比3%,料液比1:7,pH=7,酶解时间2 h。在此工艺条件下,降压肽ACE抑制率可达79.62%,氨基酸总含量为83%,分子量低于500 Da的降压肽可达到70.74%。优化的阿拉斯加鳕鱼降压肽的提取工艺可行、合理,降压肽也具有较高的体外ACE抑制活性。本研究结果为进一步考察食源性降压肽提供了参考。     

酶解条件对核桃多肽抗氧化活性的影响

以核桃蛋白粉为原料制备核桃蛋白抗氧化活性肽,分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶对核桃蛋白进行酶解,测定了不同酶作用下的核桃多肽抗氧化活性,确定碱性蛋白酶是酶解核桃蛋白的最适蛋白酶。研究了酶解温度、酶解时间、酶解pH、底物浓度、酶添加量等酶解条件对酶解产物抗氧化活性的影响。结果表明:不同的酶解条件对酶解产物核桃多肽的抗氧化活性有显著影响,最佳酶解条件为:温度50℃,时间120 min,pH8,底物浓度3%,酶添加量3%,在此酶解条件下制得的核桃多肽对羟基自由基和超氧阴离子的清除率分别为53.8%和50.0%,还原能力为51.7%。     

甲鱼蛋白酶解产物体外ACE抑制和抗氧化活性研究

目的研究甲鱼蛋白酶解产物的血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性和抗氧化性.方法以体外活性(ACE抑制率、·0H、O2-·和DPPH·清除率)为指标,通过正交试验确定木瓜蛋白酶的最佳酶解条件;用Sephadex G-25分离、提纯.检测各组分的ACE抑制活性和抗氧化活性.结果木瓜蛋白酶酶解甲鱼蛋白制备ACE抑制肽的最佳酶解条件为温度60℃、pH 7.0、酶解时间3 h、加酶量1.0%;在此酶解条件下酶解产物的ACE抑制率为99.96%,获得了ACE抑制活性较高的组分F4和F1,其ACE抑制率分别为67.27%、52.73%;制备抗氧化肽的最佳酶解条件为温度60℃、pH 5.0、时间4h、加酶量0.6%,得到抗氧化活性最高的组分F2,该组分的·OH、O2-·和DPPH·清除率分别为10.39%、33.00%、17.68%,其相对分子质量范围集中在307左右.结论甲鱼多肽具有较强的体外ACE抑制活性和抗氧化活性.     

泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽。从9种蛋白酶中筛选出菠萝蛋白酶的酶解液具有较高降压活性,IC50值为0.65mg/mL。在单因素试验的基础上,采用和Box-Behnken和响应面法(RSM)优化了酶解泥鳅蛋白的工艺条件,以ACE抑制率为指标,探讨酶与底物的比值([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对ACE抑制率的影响。结果表明：制备降血压肽的最佳酶解条件为[E]/[S]4.9‰、酶解时间5.9h、酶解温度54.4℃、pH6.5、底物质量分数30%,该条件下制备的泥鳅蛋白酶解产物的ACE抑制率为88.92%。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

不补料酶膜耦合反应制备牛乳蛋白ACE抑制肽的研究

为了克服传统酶解技术的不足,提高酶解反应效率,采用不补料酶膜耦合反应制备牛乳蛋白ACE抑制肽。考察超滤膜对牛乳蛋白及酶的截留、膜通量及滤出液的ACE抑制率和IC_(50)的影响,确定出超滤膜最佳的截留分子量为5000 u;研究了反应时间、底物浓度、加酶量和循环泵转速对蛋白转化率的影响,确定最优酶解工艺条件:底物浓度7%(W/W)、加酶量2000 U/g、反应时间100 min、循环泵转速100 r/min,该条件下蛋白转化率、单位酶产肽量、ACE抑制率分别达到53.16%、39.59 g肽/g酶、76.81%,与对照组相比蛋白转化率、单位酶产肽量、ACE抑制率分别提高了16.99%、16.61%、18.55%;采用高效凝胶过滤色谱法测定超滤液中ACE抑制肽的分子量分布,发现样品中分子量≤2253 u组分质量分数为94.62%,超滤膜对截留分子量大小控制准确。因此不补料酶膜耦合反应可为酶法制备牛乳蛋白ACE抑制肽提供一种更为高效的方法。     

木瓜蛋白酶水解酪蛋白制备降血压肽的工艺优化

目的:以酪蛋白为原料,酶解法制备降血压肽,优化工艺。方法:采用5种不同蛋白酶水解酪蛋白,根据水解产物的血管紧张素转化酶(ACE)体外抑制活性选择蛋白酶。以酶用量、酶解时间、底物浓度3因素作为研究对象,以可溶性蛋白产量、ACE体外抑制活性两参数为评价指标,通过Box-Behnken响应面分析法优化水解工艺。结果:木瓜蛋白酶水解酪蛋白的产物活性最高,因此作为工艺优化用酶。响应面分析法得到的最优工艺条件为:酶用量0.032 g,酶解时间4.53 h,底物浓度0.70%,可溶性蛋白产量1283.71 mg、ACE抑制率为87.23%。结论:Box-Behnken设计可有效优化木瓜蛋白酶水解酪蛋白制备降血压肽工艺,所得工艺稳定可靠。